分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

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分子实验常用试剂缓冲液配制

分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl

7.4约70mL

7.6约60mL

8.0约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl组份浓度1.5MTris-HCl

（pH8.8）配制量1L

配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA

（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠组份浓度3M醋酸钠

（pH5.2）配制量100mL

配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl8g

KCl0.2g

Na2HPO41.42g

KH2PO40.27g

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵

配制量100mL

配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS组份浓度10％（W/V）SDS

配制量100mL

配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH组份浓度2NNaOH

配制量100mL

配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl组份浓度2.5NHCl

配制量100mL

配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl组份浓度5MNaCl

配制量1L

配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose组份浓度20％（W/V）Glucose

配制量100mL

配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose

（质粒提取用）配制量1L

配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（pH8.0）25mL

0.5MEDTA（pH8.0）20mL

20％Glucose（1.11M）45mL

dH2O910mL

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS

（质粒提取用）配制量500mL

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS50mL

2NNaOH50mL

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH

（质粒提取用）配制量500mL

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc147g

CH3COOH57.5mL

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA组份浓度0.5MEDTA

（pH8.0）配制量1L

配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1MDTT组份浓度1MDTT

配制量20mL

配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

19、10mMATP组份浓度10mMATP

配制量20mL

配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin组份浓度100mg/mlAmpicillin

（100mg/ml）配制量50mL

配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG组份浓度24mg/mLIPTG

（24mg/mL）配制量50mL

配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X-Gal组份浓度20mg/mLX-Gal

（20mg/mL）配制量50mL

配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。

3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基组份浓度1％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NaCl

0.1mg/mLAmpicillin

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

7.4℃保存。

6、TB培养基组份浓度1.2％（W/V）Tryptone

2.4％（W/V）YeastExtract

0.4％（V/V）Glycerol

17mMKH2PO4

72mMK2HPO4

配制量1L

配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12g

YeastExtract24g

Glycerol4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4℃保存。

7、TB/Apm培养基组份浓度1.2％（W/V）Tryptone

2.4％（W/V）YeastExtract

0.4％（V/V）Glycerol

17mMKH2PO4

72mMK2HPO4

0.1mg/mLAmpicillin

配制量1L

配置方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12g

YeastExtract24g

Glycerol4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。

6.均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

0.05％（W/V）NaCl

2.5mMKCl

10mMMgCl2

配制量1L

配置方法

1.配制250mMKCl溶液。

在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20g

YeastExtract5g

NaCl0.5g

4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1L。

8.高温高压灭菌后，4℃保存。

9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

0.05％（W/V）NaCl

2.5mMKCl

10mMMgCl2

20mM葡萄糖

配制量100mL

配置方法

1.配制1M葡萄糖溶液。

将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。

2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

3.4℃保存。

10、2×YT培养基组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）NaCl

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone16g

YeastExtract10g

NaCl5g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

11、Φb×broth培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20g

YeastExtract5g

MgSO4•7H2O5g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

12、NZCYM培养基组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract

0.1％（W/V）CasaminoAcid

1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

YeastExtract5g

CasaminoAcid1g

NZ胺10g

NaCl5g

MgSO4•7H2O2g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

13、NZYM培养基组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。

14、NZM培养基组份浓度1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配置方法NZM培养基除不含YeastExtract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。

15、一般固体培养基的配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

配制Agar（琼脂：

铺制平板用）15g/L

Agar（琼脂：

配制顶层琼脂用）7g/L

Agarose（琼脂糖：

铺制平板用）15g/L

Agarose（琼脂糖：

配制顶层琼脂用）7g/L

2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3.待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。

4..铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度1％（W/V）Tryptone

平板培养基0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NaCl

0.1mg/mLAmpicillin

0.5％（W/V）IPTG

0.04mg/mLX-Gal

1.5％（W/V）Agar

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。

8.4℃保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度

1.2％（W/V）Tryptone

平板培养基2.4％（W/V）YeastExtract

0.4％（W/V）Glycerol

17mMKH2PO4

72mMK2HPO4

0.1mg/mLAmpicillin

0.024mg/mLIPTG

0.04mg/mLX-Gal

1.5％（W/V）Agar

配制量1L

配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12g

YeastExtract24g

Glycerol4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。

8.4℃保存平板。

生物化学实验常用试剂的配制方法

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L

配制量2L

配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。

2、0.5mol/L盐酸溶液组份浓度0.5mol/L

配制量2L

配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。

2.用去离子水稀释至2L。

4、0.2％葡萄糖标准溶液组份浓度0.2％

配制量1L

配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。

2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至1L

5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清组份浓度250μg/mL

白蛋白标准液配制量2L

配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。

3.4℃保存。