分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

1、分子实验常用试剂缓冲液配制分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2

2、、1.5 M Tris-HCl 组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 量取

3、下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。4、3 M 醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） 配制量 100mL 配置方法 1. 称取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer

4、 组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 1

5、00mL 配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22m滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、R

6、NA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全

7、抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇 配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助

8、于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。 9、10（W/V）SDS 组份浓度 10（W/V）SDS 配制量 100mL 配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68加热溶解。 2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。10、2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程

9、中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。12、5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量

10、分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose 组份浓度 20（W/V）Glucose 配制量 100mL 配置方法 1. 称取20g Glucose置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100mL。 3. 高温高压灭菌后，4保存。14、Solution I 组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （质粒提取用） 配制量 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL 0.5 M EDTA（pH

11、8.0） 20mL 20Glucose（1.11M） 45mL dH2O 910mL 2. 高温高压灭菌后，4保存。 3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。15、Solution II 组份浓度 250mM NaOH，1（W/V）SDS （质粒提取用） 配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。 10SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。 3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。 16、Solution III

12、组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） 配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。 KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 4. 高温高压灭菌后，4保存。17、0.5M EDTA 组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0) 配制量 1L 配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0时，EDT

13、A才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。18、1 M DTT 组份浓度 1 M DTT 配制量 20mL 配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22m滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20保存。19、10mM ATP 组份浓度 10mM ATP 配制量 20mL 配置方法 1. 称取121mg Na2ATP3H2O，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

14、3. 适量分成小份，-20保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin 组份浓度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml） 配制量 50mL 配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22m滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。2、IPTG 组份浓度 24mg/mL IPTG （24mg/mL） 配制量 50mL 配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

15、3. 用0.22m滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。3、X- Gal 组份浓度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL） 配制量 50mL 配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。 4、LB培养基 组份浓度 1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g

16、NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4保存。5、LB/Amp培养基 组份浓度 1（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去

17、离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4保存。 6、TB培养基 组份浓度 1.2（W/V） Tryptone 2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800

18、mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 4保存。7、TB/Apm培养基 组份浓度 1.2（W/V） Tryptone 2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅

19、拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后4保存。8、SOB培养基 组份浓度 2（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 0.05（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM Mg

20、Cl2 配制量 1L 配置方法1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。 2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后

21、，4保存。 9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。9、SOC培养基 组份浓度 2（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 0.05（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 配制量 100mL 配置方法1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m滤膜过滤除菌。 2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。3. 4保存。10、2YT培养基 组份浓度 1.6（W/V）Tryptone， 1（W/V）Yeast Extrac

22、t，0.5（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4保存。11、bbroth培养基 组份浓度 2（W/V）Tryptone， 0.5（W/V）Yeast Extract，0.5（W/V）MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g M

23、gSO47H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4保存。12、NZCYM培养基 组份浓度 0.5（W/V） Yeast Extract 0.1（W/V） Casamino Acid 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO47H2O 2g 2. 加

24、入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4保存。13、NZYM培养基 组份浓度 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2O 配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。14、NZM培养基 组份浓度 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2O 配置方法 NZM培养

25、基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。15、一般固体培养基的 配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。 配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7g/L 2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。 3. 待培养基冷却至5060时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。 4. .铺制平

26、板（3035mL培养基/90mm培养皿）。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1（W /V） Tryptone 平板培养基 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5（W /V） IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5（W /V） Agar 配制量 1L 配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

27、4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60左右。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（3035mL培养基/90mm培养基）。 8. 4保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1.2（W /V） Tryptone 平板培养基 2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（W/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 0.02

28、4mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5（W /V） Agar 配制量 1L 配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60左右。 6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL

29、）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（3035mL培养基/90mm培养基）。 8. 4保存平板。生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 组份浓度 0.5mol/L 配制量 2L 配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。 2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 组份浓度 0.5mol/L 配制量 2L 配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。4、0.2葡萄糖标准溶液 组份浓度 0.2 配制量 1L 配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4保存。5、250g/mL牛血清 组份浓度 250g/mL 白蛋白标准液 配制量 2L 配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。 2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4保存。