CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达Word格式.docx
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AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照，CD133表达与CD34表达有相关性。
CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。
【关键词】白血病；
MDS；
CD133；
CD34；
预后
ExpressionofCD133inBoneMarrowCellsofPatientswithLeukemiaandMyelodysplasticSyndrome
AbstractToexploretherelationshipbetweentheexpressionofCD133andpathogenesisofleukemiaandMDS,immunocytochemistrymethodwasusedtoexaminetheexpressionofCD133inbonemarrowcellsofpatientswithleukemiaandMDS.TheresultsshowedthatthepositiverateofCD133in41acuteleukemiapatientswas%.TheexpressionofCD133inAMLpatients（16/29,%）wassignificantlyhigherthanthatincontrolgroup（2/15,%）.TherewasnosignificantdifferenceinCD133expressionbetweenCMLandcontrol positiverateofCD133in9patientswithMDSwas%（5/9）.TherewasnosignificantdifferencebetweenMDSandnormalcontrol.TheexpressionofCD133inallleukemiacellswithCD34+washigherthanthatinleukemiacellswithCD34-,andtherewassignificantdifferenceinexpressionofCD133betweenthem（）.TheexpressionofCD133hadnorelationshipwiththeclinicalprognosticfactorssuchassex,age,thepercentageofleukemiccellsinperipheralbloodandinbonemarrow,WBCcounts,hemoglobinconcentration,plateletcountsandLDHlevel.ItisconcludedthattheexpressionofCD133inbonemarrowcellsofpatientswithAMLishigherthanthatincontrolgroup.TheexpressionofCD133issignificantlycorrelatedwiththeexpressionofCD34.ThehighexpressionofCD133maybeanadverseprognosticfactorinacuteleukemia.
Keywordsleukemia;
MDS;
CD133;
CD34;
prognosis
JExpHematol2007;
15（3）:
470-473
CD133曾被认为仅仅是一种造血干／祖细胞表面标记。
1997年Yin等［1］首次报道了AC133抗原并成功制备了能识别该抗原的单克隆IgG抗体，2000年6月第七届人类白细胞分化抗原工作组会议（ILDAW）将此抗原命名为CD133［2］。
文献报道，CD133+CD34+的造血干/祖细胞较之CD133-CD34+造血干/祖细胞有更强的多系分化潜能［3］,从而为白血病的造血干细胞移植提供新的策略。
本研究通过免疫细胞化学方法分析CD133抗原在白血病和骨髓增生异常综合症中的表达及其与CD34的协同表达以了解其临床意义。
材料和方法
标本采集与处理
急性白血病患者43例，其中初治患者36例，治疗后复发患者7例;
AML29例，ALL14例。
AL中男22例，女21例，年龄12-80岁。
慢性白血病患者9例，其中男8例，女1例，年龄34-82岁。
骨髓增生异常综合症患者9例，其中男6例，女3例，年龄15-76岁。
以上患者均为2004年3月20日-8月10日在我院血液病研究室确诊的病人。
另取非血液系统恶性疾病患者15例作为对照，对照组与病例组在性别、年龄上无显着差异。
中国实验血液学杂志JExpHematol2007;
15（3）CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达取以上患者骨髓2ml，常规肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，895×
g离心20分钟。
离心后液体分3层，上层为血浆，中层为分层液，下层为红细胞，在上层与中层交界面呈现浑浊带，此层含有大量单个核细胞。
用毛细吸管轻插至白膜层，沿管壁周缘吸出界面层细胞，移入另一无菌刻度离心管中。
用5倍以上体积的PBS洗涤，671×
g离心10分钟,去上清液。
重复洗涤3次，然后计数活细胞，使细胞浓度控制在107/ml左右。
用离心涂片机离心涂片，晾干，冷丙酮固定，-20℃冰箱保存备用。
主要试剂
CD133单克隆抗体购自R&
D公司，CD34单克隆抗体购自Zymed公司，SPkit试剂盒购自天津灏洋公司和北京中杉金桥生物技术有限公司，浓缩型DAB试剂盒购自天津灏洋公司。
方法
免疫细胞化学方法严格按试剂盒说明书进行。
阳性细胞判定标准
阳性细胞的胞膜呈棕色或棕黄色颗粒，观察者记数200个细胞，结果用半定量记分方法判定，即①按阳性细胞占细胞总数的多少分为0-3级，0级：
阳性细胞为0；
1级：
阳性细胞＜25％；
2级：
阳性细胞＜50％；
3级：
阳性细胞＞50％；
②按着色细胞染色强弱分为0-3级，0级：
弱；
2级：
中；
3级：
强。
然后以两项积分之和判断阳性程度，"
0-2分"
为阴性染色，"
3-6分"
为阳性染色。
统计学处理
两样本率的比较采用χ2检验。
结果
急性白血病患者骨髓细胞CD133表达
43例AL患者CD133表达的阳性率为％。
29例AML患者中，16例CD133表达阳性,阳性率为％，其中AMLM11例，AMLM25例，AMLM31例，AMLM4/M57例，MDS转化的AML2例（2/2）。
14例ALL患者中有6例CD133表达阳性，8例CD133表达阴性，CD133表达的阳性率为％。
AML组CD133的表达与对照组间的差别有统计学意义，AML与ALL组之间CD133表达的差别无统计学意义（）。
对AML各FAB亚型CD133表达率的差异的统计学分析显示，M4/M5亚型的CD133表达率高于M3，差异有统计学意义，其余各亚型之间的差异均无统计学意义。
初治组CD133表达阳性率低于AL治疗后复发组CD133表达阳性率，但差异无显着性。
慢性白血病患者骨髓细胞CD133表达
9例慢性白血病患者中，6例CML患者中CD133表达阳性者2例，2例CLL和1例CNL中均未检测到CD133表达。
但CML阳性率与对照组间的差别无统计学意义。
MDS患者骨髓细胞CD133表达
9例MDS患者中有5例CD133呈阳性，4例为阴性，阳性率为％,与对照组间的差别无显着差异。
患者骨髓细胞CD133与CD34的协同表达
所有病例CD34阳性与CD34阴性患者CD133表达情况见附表。
Table.ExpressionofCD133inbonemarrowcellswitheitherCD34positiveandCD34negativeinpatientswithacuteleukemiaandMDS
CD133positiveCD133negativeCD34positive23*16CD34negative616*，comparedwithCD34negativepatients.
对白血病患者骨髓细胞分析发现，在CD34+与CD34-患者均可表达CD133,在所有白血病患者中CD34+组的CD133阳性表达率高于CD34-患者，且差异有统计学意义，但分析显示CD34+AML与CD34-AML病人CD133表达率的差异无显着性，在ALL组也如此。
此外，我们的研究分析还表明，骨髓细胞CD133的表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶高低无显着相关性。
讨论
CD133是一种非常保守的蛋白，从线虫到人都有很高的同源性［4］。
CD133在正常及异常造血和非造血组织中均有表达，随着细胞的分化成熟其表达减弱、消失。
研究发现，两个人体视网膜母细胞瘤细胞系、WERIRb1和一个畸胎瘤细胞系NT2的CD133表达为阳性，AML来源的细胞系MUTZ2是第一个已知的人CD133+造血细胞系［6］。
1997年，Miraglia等［5］首次报道急性白血病患者CD133的表达情况，11例CD34+患者中CD133高表达3例，弱表达4例。
之后，Horn等［7］对30例AML患者CD133的表达进行了检测，结果9例CD133bright,15例CD133dim,6例CD133-,与Miraglia不同的是，CD133在AML包括原发性和MDS转化的继发性白血病各个FAB亚型中均有表达，而且表达强弱程度与FAB亚型无关。
与Horn的报道类似,我们的研究结果显示，CD133表达在AML及ALL患者骨髓细胞均可阳性，而在AML及ALL组CD133阳性表达率均高于对照组，且AML组与对照组间的差异显着，但ALL组与对照组间差异无显着性，AML组与ALL组间CD133阳性表达率的差异也无统计学意义。
考虑到ALL组病例数较少，故不能判定CD133在ALL的表达无意义，有待增加病例数作进一步研究。
与Miraglia等［5］不同的是，在我们的研究中CD133可表达于各FAB亚型，各亚型表达率M1为100％,M2为％，M3为％，M4/M5为％,这一点与Horn等［7］研究类似。
经统计学分析M4/M5病例组的CD133表达率高于M3病例组，且差异有统计学意义，其余各亚型之间的差异均无统计学意义
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