CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达Word格式.docx

1、 AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照，CD133表达与CD34表达有相关性。CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。【关键词】 白血病； MDS； CD133； CD34； 预后Expression of CD133 in Bone Marrow Cells of Patients with Leukemia and Myelodysplastic Syndrome Abstract To explore the relationship between the expression of CD133 and pathogenesis of leukemia and MD

2、S, immunocytochemistry method was used to examine the expression of CD133 in bone marrow cells of patients with leukemia and MDS. The results showed that the positive rate of CD133 in 41 acute leukemia patients was %. The expression of CD133 in AML patients （16/29,%） was significantly higher than th

3、at in control group （2/15,%）. There was no significant difference in CD133 expression between CML and controlpositive rate of CD133 in 9 patients with MDS was %（5/9）. There was no significant difference between MDS and normal control. The expression of CD133 in all leukemia cells with CD34+ was high

4、er than that in leukemia cells with CD34-, and there was significant difference in expression of CD133 between them （）. The expression of CD133 had no relationship with the clinical prognostic factors such as sex, age, the percentage of leukemic cells in peripheral blood and in bone marrow, WBC coun

5、ts, hemoglobin concentration, platelet counts and LDH level. It is concluded that the expression of CD133 in bone marrow cells of patients with AML is higher than that in control group. The expression of CD133 is significantly correlated with the expression of CD34. The high expression of CD133 may

6、be an adverse prognostic factor in acute leukemia. Key words leukemia; MDS; CD133; CD34; prognosis J Exp Hematol 2007; 15（3）:470-473 CD133曾被认为仅仅是一种造血干祖细胞表面标记。1997年Yin等1首次报道了AC133抗原并成功制备了能识别该抗原的单克隆IgG抗体，2000年6月第七届人类白细胞分化抗原工作组会议（ILDAW）将此抗原命名为CD1332。文献报道，CD133+CD34+的造血干/祖细胞较之CD133-CD34+造血干/祖细胞有更强的多系分化潜

7、能3,从而为白血病的造血干细胞移植提供新的策略。本研究通过免疫细胞化学方法分析CD133抗原在白血病和骨髓增生异常综合症中的表达及其与CD34的协同表达以了解其临床意义。 材料和方法 标本采集与处理 急性白血病患者43例，其中初治患者36例，治疗后复发患者7例;AML 29例，ALL 14例。AL中男22例，女21例，年龄12-80岁。慢性白血病患者9例，其中男8例，女1例，年龄34-82岁。骨髓增生异常综合症患者9例，其中男6例，女3例，年龄15-76岁。以上患者均为2004年3月20日-8月10日在我院血液病研究室确诊的病人。另取非血液系统恶性疾病患者15例作为对照，对照组与病例组在性别、

8、年龄上无显着差异。 中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2007; 15（3）CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达取以上患者骨髓2 ml，常规肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离出单个核细胞， 895g离心20分钟。离心后液体分3层，上层为血浆，中层为分层液，下层为红细胞，在上层与中层交界面呈现浑浊带，此层含有大量单个核细胞。用毛细吸管轻插至白膜层，沿管壁周缘吸出界面层细胞，移入另一无菌刻度离心管中。用5倍以上体积的PBS洗涤， 671g离心10分钟,去上清液。重复洗涤3次，然后计数活细胞，使细胞浓度控制在107/ml左右。用离心涂片机离心涂片，晾干，冷丙酮固定，-20冰箱保存备

9、用。 主要试剂 CD133单克隆抗体购自R&D公司，CD34单克隆抗体购自Zymed公司，SP kit试剂盒购自天津灏洋公司和北京中杉金桥生物技术有限公司，浓缩型DAB试剂盒购自天津灏洋公司。 方法 免疫细胞化学方法严格按试剂盒说明书进行。 阳性细胞判定标准 阳性细胞的胞膜呈棕色或棕黄色颗粒，观察者记数200个细胞，结果用半定量记分方法判定，即按阳性细胞占细胞总数的多少分为0-3级，0级：阳性细胞为0； 1级：阳性细胞25； 2级：阳性细胞50； 3级：阳性细胞50； 按着色细胞染色强弱分为0-3级，0级：弱；2级：中；3级：强。然后以两项积分之和判断阳性程度，0-2分为阴性染色，3-6分为阳

10、性染色。 统计学处理 两样本率的比较采用2检验。结 果 急性白血病患者骨髓细胞CD133表达 43例AL患者CD133表达的阳性率为。29例AML患者中，16例CD133表达阳性,阳性率为，其中AML M1 1例，AML M2 5例，AML M3 1例，AML M4/M5 7例，MDS转化的AML 2例（2/2）。14例ALL患者中有6例CD133表达阳性，8例CD133表达阴性，CD133表达的阳性率为。AML组CD133的表达与对照组间的差别有统计学意义，AML与ALL组之间CD133表达的差别无统计学意义（）。对AML各FAB亚型CD133表达率的差异的统计学分析显示，M4/M5亚型的C

11、D133表达率高于M3，差异有统计学意义，其余各亚型之间的差异均无统计学意义。 初治组CD133表达阳性率低于AL治疗后复发组CD133表达阳性率，但差异无显着性。 慢性白血病患者骨髓细胞CD133表达 9例慢性白血病患者中，6例CML患者中CD133表达阳性者2例，2例CLL和1例CNL中均未检测到CD133表达。但CML阳性率与对照组间的差别无统计学意义。 MDS患者骨髓细胞CD133表达 9例MDS患者中有5例CD133呈阳性，4例为阴性，阳性率为,与对照组间的差别无显着差异。 患者骨髓细胞CD133与CD34的协同表达 所有病例CD34阳性与CD34阴性患者CD133表达情况见附表。

12、Table. Expression of CD133 in bone marrow cells with either CD34 positive and CD34 negative in patients with acute leukemia and MDS CD133 positiveCD133 negativeCD34 positive23*16CD34 negative616*， compared with CD34 negative patients. 对白血病患者骨髓细胞分析发现，在CD34+与CD34-患者均可表达CD133,在所有白血病患者中CD34+组的CD133阳性表达率

13、高于CD34-患者，且差异有统计学意义，但分析显示CD34+AML与CD34-AML病人CD133表达率的差异无显着性，在ALL组也如此。 此外，我们的研究分析还表明，骨髓细胞CD133的表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶高低无显着相关性。 讨 论 CD133是一种非常保守的蛋白，从线虫到人都有很高的同源性4。CD133在正常及异常造血和非造血组织中均有表达，随着细胞的分化成熟其表达减弱、消失。研究发现，两个人体视网膜母细胞瘤细胞系、WERI Rb 1和一个畸胎瘤细胞系NT2的CD133表达为阳性，AML来源的细胞系MUTZ

14、 2是第一个已知的人CD133+造血细胞系6。1997年，Miraglia等5首次报道急性白血病患者CD133的表达情况，11例CD34+患者中CD133高表达3例，弱表达4例。之后，Horn等7对30例AML患者CD133的表达进行了检测，结果9例CD133bright,15例CD133dim,6例CD133-,与Miraglia不同的是，CD133在AML包括原发性和MDS转化的继发性白血病各个FAB亚型中均有表达，而且表达强弱程度与FAB亚型无关。 与Horn的报道类似,我们的研究结果显示，CD133表达在AML及ALL患者骨髓细胞均可阳性，而在AML及ALL组CD133阳性表达率均高于对照组，且AML组与对照组间的差异显着，但ALL组与对照组间差异无显着性，AML组与ALL组间CD133阳性表达率的差异也无统计学意义。考虑到ALL组病例数较少，故不能判定CD133在ALL的表达无意义，有待增加病例数作进一步研究。与Miraglia等5不同的是，在我们的研究中CD133可表达于各FAB亚型，各亚型表达率M1为100,M2为，M3为，M4/M5为,这一点与Horn等7研究类似。经统计学分析M4/M5病例组的CD133表达率高于M3病例组，且差异有统计学意义，其余各亚型之间的差异均无统计学意义