各种缓冲液的配制方法.docx

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各种缓冲液的配制方法各种缓冲液的配制方法各种缓冲液的配制方法之巴公井开创作时间：

二O二一年七月二十九日Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液PH0.2mol/LNa2HPO4（ml）0.1mol/L柠檬酸钠（ml）PH0.2mol/LNa2HPO4（ml）0.1mol/L柠檬酸钠（ml）2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HPO4.2H2O,分子量=178.050.2mol/L溶液含35.61g/L柠檬酸.H2O,分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.1mol/L）PH0.1mol/L柠檬酸（ml）0.1mol/L柠檬酸钠（ml）PH0.1mol/L柠檬酸（ml）0.1mol/L柠檬酸钠（ml）3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8柠檬酸.H2O,分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸钠.2H2O,分子量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4g/L醋酸缓冲液（0.2mol/L,18）PH0.2mol/LNaAC（ml）0.2mol/LHAC（ml）PH0.2mol/LNaAC（ml）0.2mol/LHAC（ml）3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3H2O,分子量=136.090.2mol/L溶液含27.22g/L

（1）醋酸盐溶液的配制：

醋酸醋酸钠缓冲液（pH3.6）取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液（pH3.7）取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸6080ml,至溶液从蓝色转酿成纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液（pH3.8）取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液（pH4.5）取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液（pH4.6）取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值至4.6,再加水稀释至100ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液（pH6.0）取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得.用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lgC（NaAc）/C（HAc）（在此,C（HAc）指醋酸的浓度,C（NaAc）指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方）,PKa=-lgKa=4.75,将PH=5.5代入,可得C（NaAc）/C（HAc）=5.6通常我们配制时会使C（HAc）=0.1mol/L,或是C（HAc）=0.2mol/L等.若是配制C（HAc）=0.1mol/L,则C（NaAc）=0.56mol/L称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可.固然若想配制其它的浓度,也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不能配的太稀,否则缓冲能力要下降,太浓的话又浪费试剂.苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH（ml）0.2mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至（ml）4.00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：

称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中,稀释至500ml.磷酸缓冲液（0.2mol/L）PH0.2mol/LNa2HPO4（ml）0.2mol/LNaH2PO4（ml）PH0.2mol/LNa2HPO4（ml）0.2mol/LNaH2PO4（ml）588.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.481.019.06.426.573.57.687.013.06.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3Na2HPO4.2H2O,分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/LNaH2PO4.2H2O,分子量=156.03,0.2mol/L溶液含31.21g/LNaH2PO4.H2O,分子量=138.03,0.2mol/L溶液含27.6g/LNa2HPO4.12H2O,分子量=358.22,0.2mol/L溶液含71.64g/L磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法0.01MPBSPBS（135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4,pH7.2）PBS缓冲液（pH7.27.4）：

NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L称7.9gNaCl,0.2gKCl,0.24gKH2PO4（or1.44gNa2HPO4）和1.8gK2HPO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L.保管于4冰箱中即可.需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.母液的配制：

0.2MNa2HPO4：

称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：

称取31.2gNaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：

先配0.2MPB（pH=7.4,100ml）：

取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可.然后只需将0.2MPB（pH=7.4）按相应比例适当稀释即可,如：

0.1MPB（PH=7.4）：

取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可.0.01MPB（PH=7.4）：

取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可.0.02MPB（PH=7.4）：

取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可.若需要NaCl的话,加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可.另：

其它各种另PH值的0.2MPB（100ml）配方：

pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可.在15lbf/in2（1034105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟）,保管存于室温或4冰箱中.需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒.PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20.30.4根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）.所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能招致阴性.所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液.PBS缓冲液称取NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4?

12H2O3.63g,KH2PO40.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保管备用.PBST缓冲液取300lTween-20加入PBS100ml中,混匀后即刻使用.现用现配.如果是把所有固体加年夜十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在6.5左右,明显偏酸.不能用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调,可是有更方便的方法.十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值.不需要其它任何处置.这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次PH8.0的PBS配方详细1.NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充沛搅拌溶解.3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1L.4.高温高压灭菌后,室温保管.注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中弥补1mMCaCl2和0.5mMMgCl2.0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBS）的配制：

甲液：

0.05mol/LNa2HPO4溶液：

称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;乙液：

0.05mol/LKH2P04溶液:

称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至1000m1.将甲乙液分装在棕色瓶内,于4冰箱中保管,用时甲、乙两液各按分歧比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH甲液ml乙液mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可.硼酸缓冲液（0.2mol/L硼酸盐）PH0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）PH0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂Na2B4O7.10H2O,分子量=381.43,0.05mol/L溶液=0.2mol/L硼砂含19.07g/L硼酸,分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去结晶水,必需在带塞得瓶中保管；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液取代盐酸-氯化钾缓冲液PH0.1mol/LHCl（ml）0.02mol/LKCl（ml）加水至（ml）PH0.1mol/LHCl（ml）0.02mol/LKCl（ml）加水至（ml）1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.031001.629.9035.001002.27.5246.251000.02mol/LKCl溶液：

溶7.455g氯化钾于水中,稀释至500ml苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液PH0.1mol/LHCl（ml）0.02mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至（mi）PH0.1mol/LHCl（ml）0.02mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至（mi）2.246.6025.001003.214.8025.001002.439.6025.001003.49.9525.001002.633.0025.001003.66.0025.001002.826.5025.001003.82.6525.001003.020.4025.001000.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：

称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中,稀释至500ml磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH（ml）0.2mol/L磷酸二氢钾（ml）加水至（ml）PH0.1mol/LNaOH（ml）0.2mol/L磷酸二氢钾（ml）加水至（ml）5.83.6625.001007.029.5425.001006.05.6425.001007.234.9025.001006.28.5525.001007.439.3425.001006.412.6025.001007.642.7425.001006.617.7425.001007.845.1725.001006.823.6025001008.046.8525.001000.2mol/L磷酸二氢钾溶液：

溶13.616g磷酸二氢钾于水中,稀释至500ml硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH（ml）0.2mol/L硼酸-氯化钾（ml）加水至（ml）PH0.1mol/LNaOH（ml）0.2mol/L硼酸-氯化钾（ml）加水至（ml）7.82.6525.001009.021.4025.001008.04.0025.001009.226.7025.001008.25.9025.001009.432.0025.001008.48.5525.001009.636.8525.001008.612.0025.001009.840.8025.001008.816.4025.0010010.048.9025.001000.02mol/L硼酸-氯化钾溶液：

溶6.202g硼酸和7.456g氯化钾于水中稀释至500ml时间：

二O二一年七月二十九日