各种缓冲液的配制方法.docx

1、各种缓冲液的配制方法各种缓冲液的配制方法 各种缓冲液的配制方法之巴公井开创作 时间：二 O二一年七月二十九日 Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液 PH 0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)PH 0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)2.2 0.4 19.6 5.2 10.72 9.28 2.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.85 2.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.40 2.8 3.17 16.83 5.8 12.09 7.91 3.0 4.11 15.89 6.0 12.63 7.37 3.2 4

2、.94 15.06 6.2 13.22 6.78 3.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.15 3.6 6.44 13.56 6.6 14.55 5.45 3.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.55 4.0 7.71 12.29 7.0 16.47 3.53 4.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.61 4.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.83 4.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.27 4.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.85 5.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55 Na2HP

3、O4.2H2O,分子量=178.05 0.2mol/L溶液含 35.61g/L 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L溶液含 21.01g/L 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.1mol/L）PH 0.1mol/L柠檬酸（ml）0.1mol/L柠檬酸 钠（ml）PH 0.1mol/L柠檬酸（ml）0.1mol/L柠檬酸钠(ml)3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 14.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 14.0 6.0 5.8 4.7 15.3

4、 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L溶液含 21.01g/L 柠檬酸钠.2H2O,分子量=294.12；0.1mol/L溶液含 29.4g/L 醋酸缓冲液（0.2mol/L,18）PH 0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH 0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.6 0.75 9.25 4

5、.8 5.90 4.10 3.8 1.20 8.80 5.0 7.00 3.00 4.0 1.80 8.20 5.2 7.90 2.10 4.2 2.65 7.35 5.4 8.60 1.40 4.4 3.70 6.30 5.6 9.10 0.90 4.6 4.90 5.10 5.8 9.40 0.60 NaAC.3H2O,分子量=136.09 0.2mol/L溶液含 27.22g/L（1）醋酸盐溶液的配制：醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠 5.1g,加冰醋酸 20ml,再加水稀释至 250ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.7)取无水醋酸钠 20g,加水 300ml 溶解后,加溴酚蓝

6、指示液 1ml 及冰醋酸 6080ml,至溶液从蓝色转酿成纯绿色,再加水稀释至 1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.8)取 2mol/L醋酸钠溶液 13ml 与 2mol/L醋酸溶液 87ml,加每 1ml 含铜 1mg的硫酸铜溶液 0.5ml,再加水稀释至 1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠 18g,加冰醋酸 9.8ml,再加水稀释至 1000ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠 5.4g,加水 50ml 使溶解,用冰醋酸调节 pH值至 4.6,再加水稀释至 100ml,即得.醋酸醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠 54.6g,加 1mol/L

7、醋酸溶液 20ml 溶解后,加水稀释至 500ml,即得.用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的 PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)（在此,C(HAc)指醋酸的浓度,C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8 乘 10的-5次方）,PKa=-lgKa=4.75,将 PH=5.5 代入,可得 C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L,或是 C(HAc)=0.2mol/L等.若是配制 C(HAc)=0.1mol/L,则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为 82*0.56=46 克量取冰醋酸体积为

8、0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入 1000mL水中溶解、搅拌均匀即可.固然若想配制其它的浓度,也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不能配的太稀,否则缓冲能力要下降,太浓的话又浪费试剂.苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液 PH 0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至(ml)4.0 0.40 25.00 100.00 4.2 3.65 25.00 100.00 4.4 7.35 25.00 100.00 4.6 12.00 25.00 100.00 4.8 17.50 25.00 100.00 5.0 23.65 25.00 100

9、.00 5.2 29.75 25.00 100.00 5.4 35.25 25.00 100.00 5.6 39.70 25.00 100.00 5.8 43.10 25.00 100.00 6.0 45.40 25.00 100.00 6.2 47.00 25.00 100.00 0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过 24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中,稀释至 500ml.磷酸缓冲液（0.2mol/L）PH 0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.2mol/LNaH2PO4(ml)PH 0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.2mol/LNaH2PO4(ml

10、)58 8.0 92.0 7.0 61.0 39.0 6.0 12.3 87.7 7.2 72.0 28.0 6.2 18.5 81.5 7.4 81.0 19.0 6.4 26.5 73.5 7.6 87.0 13.0 6.6 37.5 62.5 7.8 91.5 8.5 6.8 49.0 51.0 8.0 94.7 5.3 Na2HPO4.2H2O,分子量=178.05,0.2mol/L溶液含 35.61g/L NaH2PO4.2H2O,分子量=156.03,0.2mol/L溶液含 31.21g/L NaH2PO4.H2O,分子量=138.03,0.2mol/L溶液含 27.6g/L Na

11、2HPO4.12H2O,分子量=358.22,0.2mol/L溶液含 71.64g/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法 0.01M PBS PBS(135 mM NaCl,2.7 mM KCl,1.5 mM KH2PO4,and 8 mM K2HPO4,pH 7.2)PBS 缓冲液（pH7.27.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L,KH2PO4 1.4mmol/L 称 7.9g NaCl,0.2g KCl,0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和 1.8g K2HPO4,溶于 800 ml 蒸馏水中,用 HC

12、l 调节溶液的 pH值至 7.4,最后加蒸馏水定容至 1 L.保管于 4冰箱中即可.需要注意的是,通常所说的浓度 0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或 K 离子的浓度,Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的.母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于 1000ml 水 各种浓度 PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB(pH=7.4,100ml)：取 19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4,81ml 0.2mo

13、l/L 的 Na2HPO4,即可.然后只需将 0.2M PB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可.0.01M PB（PH=7.4）：取 50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可.0.02M PB（PH=7.4）：取 100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可.若需要 NaCl 的话,加入 NaCl 至 0.9%（g/100ml）即可.另：其它各种另 PH 值的 0.2M PB（100ml)配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（m

14、l）5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 87.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 90.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 0.01M 磷酸盐缓冲液（PB

15、S）配制方法 称取 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中,用 HCl 调节溶液的 pH值至 7.4,最后加蒸馏水定容至 1L即可.在 15lbf/in2(1034 105Pa)高压下蒸气灭菌（至少 20分钟）,保管存于室温或 4冰箱中.需要注意的是,通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或 K 离子的浓度,Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入 100 u/ml青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒.PH 7.6

16、7.4 7.2 7.0 H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5 Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2 NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4 根据经验来看,新鲜配置的 PBS 搅匀后其 PH值约在 7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）.所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能招致阴性.所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的 PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液.

17、PBS 缓冲液 称取 NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g,KH2PO4 0.24g,溶于 900ml 双蒸水中,用盐酸调 pH值至 7.4,加水定容至 1L,常温保管备用.PBST 缓冲液 取 300l Tween-20 加入 PBS 100ml 中,混匀后即刻使用.现用现配.如果是把所有固体加年夜十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在 6.5 左右,明显偏酸.不能用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调,可是有更方便的方法.十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值.不需要其它任何处置.这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次 PH8

18、.0的 PBS 配方详细 1.NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L,KH2PO4 1.4mmol/L 2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充沛搅拌溶解.3.滴加浓盐酸将 pH 值调节至 8.0,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L.4.高温高压灭菌后,室温保管.注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中弥补 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2.0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO

19、4 溶液：称取磷酸氢二钠 9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;乙液：0.05mol/L KH2P04 溶液:称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至 1000m1.将甲乙液分装在棕色瓶内,于 4冰箱中保管,用时甲、乙两液各按分歧比例混合,即可得所需 pH的缓冲液,见下表:pH 甲液 ml 乙液 mI 5.29 2.5 97.5 5.59 5.0 95.0 5.91 10.0 90.0 6.24 20.0 80.0 6.47 30.0 70.0 6.64 40.0 60.0 6.81 50.0 50.0 6.98 60.0 40.0 7.17 70.0 30.0 7.38

20、 80.0 20.0 7.73 90.0 10.0 8.04 95.0 5.0 你要配制 pH=6.8的 PBS,可用甲、乙液各 50ml 混合即可.硼酸缓冲液（0.2mol/L硼酸盐）PH 0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）PH 0.05mol/L硼砂（ml）0.2mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5 7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5 7.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.0 8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0 硼砂 Na2B4O7.10H2O,分子量=381.43,0.05mol/L溶液=0.2mol/

21、L硼砂含 19.07g/L 硼酸,分子量=61.84,0.2mol/L溶液含 12.37g/L 硼砂易失去结晶水,必需在带塞得瓶中保管；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液取代 盐酸-氯化钾缓冲液 PH 0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/LKCl(ml)加水至(ml)PH 0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/LKCl(ml)加水至（ml）1.1 94.56 2.70 100 1.7 23.76 38.10 100 1.2 75.10 12.45 100 1.8 18.68 40.60 100 1.3 59.68 20.15 100 1.9 14.98 42.50 100 1.

22、4 47.40 26.30 100 2.0 11.90 44.05 100 1.5 37.64 31.20 100 2.1 9.46 45.03 100 1.6 29.90 35.00 100 2.2 7.52 46.25 100 0.02mol/LKCl 溶液：溶 7.455g氯化钾于水中,稀释至 500ml 苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液 PH 0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至（mi）PH 0.1mol/LHCl(ml)0.02mol/L苯二甲酸氢钾（ml）加水至（mi）2.2 46.60 25.00 100 3.2 14.80 25.00 100 2.

23、4 39.60 25.00 100 3.4 9.95 25.00 100 2.6 33.00 25.00 100 3.6 6.00 25.00 100 2.8 26.50 25.00 100 3.8 2.65 25.00 100 3.0 20.40 25.00 100 0.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过 24小时额苯二甲酸氢钾 20.44g溶于水中,稀释至 500ml 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液 PH 0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L磷酸二氢钾(ml)加水至（ml）PH 0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L磷酸二氢钾(ml)加水至（ml）5

24、.8 3.66 25.00 100 7.0 29.54 25.00 100 6.0 5.64 25.00 100 7.2 34.90 25.00 100 6.2 8.55 25.00 100 7.4 39.34 25.00 100 6.4 12.60 25.00 100 7.6 42.74 25.00 100 6.6 17.74 25.00 100 7.8 45.17 25.00 100 6.8 23.60 2500 100 8.0 46.85 25.00 100 0.2mol/L磷酸二氢钾溶液：溶 13.616g磷酸二氢钾于水中,稀释至 500ml 硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液 PH 0.1

25、mol/LNaOH(ml)0.2mol/L硼酸-氯化钾（ml）加水至（ml）PH 0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L硼酸-氯化钾（ml）加水至（ml）7.8 2.65 25.00 100 9.0 21.40 25.00 100 8.0 4.00 25.00 100 9.2 26.70 25.00 100 8.2 5.90 25.00 100 9.4 32.00 25.00 100 8.4 8.55 25.00 100 9.6 36.85 25.00 100 8.6 12.00 25.00 100 9.8 40.80 25.00 100 8.8 16.40 25.00 100 10.0 48.90 25.00 100 0.02mol/L硼酸-氯化钾溶液：溶 6.202g硼酸和 7.456g氯化钾于水中稀释至 500ml 时间：二 O二一年七月二十九日