PBS缓冲液配制方法.docx
《PBS缓冲液配制方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《PBS缓冲液配制方法.docx（7页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
PBS缓冲液配制方法
PBS缓冲液配方
不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。
我们实验室的配方：
A液：
0.lmol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾（KH2P04,MW136.09）1.361g,加双蒸水至100ml。
B液:
0.lmol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠（Na2HP04.2H20,MW177.99）1.78g,加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠（Na2HP04.12H20,MW358.14）3.58g,加双蒸水至100ml□pHA液（ml）B液（ml）
5.609.500.25
5.919.001.00
6.24——8.00——2.00
6.47——7.00——3.00
6.646.004.00
6.81——5.00——5.00
6.98——4.00——6.00
7.17——3.00——7.00
7.382.008.007.731.009.00
8.04——0.50——9.50
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HP04?
12H20（磷酸氢二钠）
NaH2P04?
2H20（磷酸二氢钠）Nacl用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
称取8gNaCl>0.2gKCI、1.44gNa2HP04禾口0.24gKH2P04,溶于
800ml蒸惚水中，用HC1调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸惚水定容至1L即可0.01M
PBS缓冲液
称取NaCI8g,KCI0.2g,Na2HP04?
12H203.63g,KH2P040.24g,溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4,加水定容至IL,常温保存备用。
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。
以下是我的总结：
母液的配制：
0.2MNa2HPO4:
称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于
1000ml水
0.2MNaH2P04:
称取31.2gNaH2P04-2H20,溶于1000ml水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：
先配0.2MPB（pH=7.4
100ml）
取19ml0.2mol/L
的NaH2P04,81ml0.2mol/L的Na2HP04,即可然后只需将0・2MPB
（pH=7.4）按相应比例适当稀释
即可，如:
0.IMPB（ph二7.4）
500ml0.2MPB,加水稀释至
1000ml
0.01MPB（PH=7.4）
50ml0.2MPB,加水稀释至
1000ml
0.02MPB（PH=7.4）可
100ml0.2MPB,加水稀释至
1000ml
要NaCL的
加入NaCL至0・9%（g/100ml
）
即可。
另：
其它各种另
PH值的
pH
0.2MNaH2P04
（ml）
5.7
93.5
6.5
5.8
92
8
5.9
90
10
6.0
87.7
12.3
6.1
85
15
6.2
81.5
18.5
6.3
77.5
22.5
6.4
73.5
26.5
6.5
68.5
31.5
6.6
62.5
37.5
0.2MPB（100ml）
0.2MNa2HP04（
ml）
6.7
56.5
43.
6.8
51
49
6.9
45
55
7.0
38
62
7.1
33
67
7.2
28
72
7.3
23
77
7.4
19ml
81m
7.5
16
84
7.6
13
87
7.7
10.5
0.5
7.8
8.5
91.5
7.9
7
93
8.0
5.3
94.7
5
磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer,PB,磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方
磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer,PB）
试剂：
NaH2P042H20Na2HP0412H20
配制方法:
配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2P04和0・2mol/L的
Na2HP04,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液
（PB）,根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）0.2mol/L的Na2HP04;称取Na2HP04.12H2031.2g（或
NaH2P04H2027.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（2）0.2mol/L的Na2HP04:
称取NaHP04.12H2O71.632g（或Na2HP04
7H2053.6g或Na2HPO4・2H2035.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：
取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和
81ml0.2mol/L的Na2HP0412H20,充分混合即为0・2mol/L的PB
（pH约为7.4〜7.5）。
若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
0.2mol/L磷酸盐缓冲液（PH5.7〜8.0）
pH0.2mol/LNaH2P04（ml）0.2mol/LNa2HP04（ml）
5.7
93.5
6.5
5.8
92.0
8.0
5.9
90.0
10.0
6.0
87.7
12.3
6.1
85.0
15.0
6.2
81.5
18.5
6.3
77.5
22.5
6.4
73.5
26.5
6.5
68.5
31.5
6.6
62.5
37.5
6.7
56.5
43.5
6.8
51.0
49.0
6.9
45.0
55.0
7.0
39.0
61.0
7.1
33.0
67.0
7.2
28.0
72.0
7.3
23.0
67.0
7.4
19.0
81.0
7.5
16.0
84.0
7.6
13.0
87.0
7.7
10.5
89.5
7.8
8.5
91.5
7.9
7.0
93.0
8.0
5.3
94.7
关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不
能确定正确的答案。
现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。
PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1•磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution>
2.磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsaline及
3.磷酸盐缓冲钠（phosphatebufferedsodium,
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。
如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution）。
无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/LPH7.2）
NaCl8.Og
KC10.2g
Na2HP041.15g
（如为Na2HP0412H20,则为2.89g）
KH2PO40.2g
将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115C高压灭菌10min^l5min,存在4C冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
我们用的都是第二种
问题1：
磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsodium）,为什么用第
三种或第一种呢：
这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。
不同的汉语翻译倒是第一次听说。
我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HP04+KH2PO4按
照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多；用于活细胞或者细菌处理的，为了保
持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCI和KCI调节离子浓度。
以上是个人的理解，欢迎批评。
：
问题2:
既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？
需要平衡渗透压吗？
还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我没说血清撒。
。
。
。
。
。
我们用的又没加K,我是说加了K的的问题3:
不加NACL会怎么样啊？
多省钱啊
在中和磷酸盐缓冲液中，NaCI的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。
在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。
ps:
哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%o称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸憾水中，稀释到100毫升。
鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%O称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸憾水稀释到100毫升。
两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%o称取0.65克氯化钠，溶解后
用蒸憾水稀释到100毫升。
[/size][/font]
升级会员 