PBS缓冲液的配制方法.docx
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PBS缓冲液的配制方法
PBS缓冲液配方
不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。
我们实验室的配方：
A液：
0.1mol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾（KH2PO4，MW
136.09）
1.361g，加双蒸水至100ml。
B液：
0.1mol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠（Na2HPO
4.2H2O，MW
177.99）
1.78g，加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠（Na2HPO
4.12H2O，MW
358.14）
3.58g，加双蒸水至100ml。
pH－－A液（ml）－－B液（ml）
5.60－－
9.50－－
0.25
5.91－－
9.00－－
1.00
6.24－－
8.00－－
2.00
6.47－－
7.00－－
3.00
6.64－－
6.00－－
4.00
6.81－－
5.00－－
5.00
6.98－－
4.00－－
6.00
7.17－－
3.00－－
7.00
7.38－－
2.00－－
8.00
7.73－－
1.00－－
9.00
8.04－－
0.50－－
9.50
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl
用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
称取8gNaCl、
0.2gKCl、
1.44gNa2HPO4和
0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至
7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可
0.01M
PBS缓冲液
称取NaCl8g，KCl
0.2g，Na2HPO4•12H2O
3.63g,KH2PO4
0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至
7.4，加水定容至1L，常温保存备用。
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。
以下是我的总结：
母液的配制：
0.2MNa2HPO4：
称取
71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水
0.2MNaH2PO4：
称取
31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB（pH=
7.4）的配制：
先配
0.2MPB（pH=
7.4，100ml）：
取19ml
0.2mol/L的NaH2PO4，81ml
0.2mol/L的Na2HPO4,即可。
然后只需将
0.2MPB（pH=
7.4）按相应比例适当稀释即可，如：
0.1MPB（PH=
7.4）：
取500ml
0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
0.01MPB（PH=
7.4）：
取50ml
0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
0.02MPB（PH=
7.4）：
取100ml
0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
若需要NaCL的话，加入NaCL至
0.9%（g/100ml）即可。
另：
其它各种另PH值的
0.2MPB（100ml）配方：
pH
0.2MNaH2PO4（ml）
0.2MNa2HPO4（ml）
5.7
93.5
6.5
5.8928
5.99010
6.0
87.7
12.3
6.18515
6.2
81.5
18.5
6.3
77.5
22.5
6.4
73.5
26.5
6.5
68.5
31.5
6.6
62.5
37.5
6.7
56.5
43.5
6.85149
6.94555
7.03862
7.13367
7.22872
7.32377
7.419ml81ml
7.51684
7.61387
7.7
10.5
0.5
7.8
8.5
91.5
7.9793
8.0
5.3
94.7
磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer,PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方
磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer,PB）
试剂：
NaH2PO4·2H2ONa2HPO4·12H2O
配制方法：
配制时，常先配制
0.2mol/L的NaH2PO4和
0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成
0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）
0.2mol/L的Na2HPO4；称取Na2HPO
4.12H2O
31.2g（或NaH2PO4·H2O
27.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（2）
0.2mol/L的Na2HPO4：
称取NaHPO
4.·12H2O
71.632g（或Na2HPO4·7H2O
53.6g或Na2HPO4·2H2O
35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）
0.2mol/LpH
7.4的PB的配制：
取19ml
0.2mol/L的NaH2PO4和81ml
0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即为
0.2mol/L的PB（pH约为
7.4～
7.5）。
若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH
5.7～
8.0）
pH
0.2mol/LNaH2PO4（ml）
0.2mol/LNa2HPO4（ml）
5.793.
56.5
5.892.
08.0
5.990.
010.0
6.087.
712.3
6.185.
015.0
6.281.
518.5
6.377.
522.5
6.473.
526.5
6.568.
531.5
6.662.
537.5
6.756.
543.5
6.851.
049.0
6.945.
055.0
7.039.
061.0
7.133.
067.0
无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/LPH
7.2）
NaCl
8.0g
KCl
0.2g
Na2HPO
41.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为
2.89g）
KH2PO
40.2g
将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
我们用的都是第二种
问题1：
磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsodium），为什么用第三种或第一种呢:
这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。
不同的汉语翻译倒是第一次听说。
我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多；用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl和KCl调节离子浓度。
以上是个人的理解，欢迎批评。
:
问题2：
既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？
需要平衡渗透压吗？
还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我没说血清撒。
。
。
。
。
。
我们用的又没加K，我是说加了K的的
问题3：
不加NACL会怎么样啊？
多省钱啊
在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。
在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。
ps:
哺乳类需用生理盐水浓度是
0.9%。
称取
0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
鸟类需用的生理盐水浓度是
0.75%。
称取
0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类需用的生理盐水浓度是
0.65%。
称取
0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
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