各种缓冲液的配制方法.docx
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各种缓冲液的配制方法
各种缓冲液的配制办法之公保含烟创作
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
0.2mol/LNa2HPO4
（ml）
0.1mol/L柠檬酸钠（ml）
PH
0.2mol/LNa2HPO4
（ml）
0.1mol/L柠檬酸钠（ml）
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.1mol/L）
PH
（ml）
钠（ml）
PH
（ml）
0.1mol/L柠檬酸钠（ml）
醋酸缓冲液（0.2mol/L,18C）
PH
0.2mol/LNaAC（ml）
0.2mol/LHAC（ml）
PH
0.2mol/LNaAC（ml）
0.2mol/LHAC（ml）
（1）醋酸盐溶液的配制：
醋酸一醋酸钠缓冲液（pH3.6）
取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH3.7）
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加漠酚蓝指示液1ml及冰醋酸60〜80ml,至溶液从蓝色转酿成纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH3.8）
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH4.5）
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH4.6）
取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH6.0）
取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得.
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C（NaAc）/C（HAc）]（在此，C（HAc）指醋酸的浓
度，C（NaAc）指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数
=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75,将
PH=5.5代入，可得C（NaAc）/C（HAc）=5.6通常我们配制时
会使C（HAc）=0.1mol/L，或是C（HAc）=0.2mol/L等若是配制C（HAc）=0.1mol/L，贝UC（NaAc）=0.56mol/L称虽醋
酸钠固体质虽为82*0.56=46克虽取冰醋酸体积为
0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和虽好的冰醋酸参
加1000mL水中溶解、搅拌平均即可.当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话乂糜费试剂.
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaOH（ml）
0.2mol/L苯一甲酸氢钾（ml）
加水至（ml）
0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：
称取在硫酸枯燥器中枯燥过
24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml.
磷酸缓冲液（0.2mol/L）
PH
0.2mol/LNa2HPO4
（ml）
0.2mol/LNaH2PO4
（ml）
PH
0.2mol/LNa2HPO4（ml）
0.2mol/LNaH2PO4（ml）
5.8
磷酸盐缓冲液（PBS）配制办法
0.01MPBS
PBS（135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and
8mMK2HPO4,pH7.2）
称NaCl,KCl,KH2PO4（orNa2HPO4）和K2HPO4,溶于800ml蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸储水定容至1L.保管于4C冰箱中即可.
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中
所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.
母液的配制：
Na2HPO4:
称取Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml水NaH2PO4:
称取NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水
各种浓度PB（pH=7.4）的配制：
先配PB（pH=7.4,100ml）:
取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可.
然后只需将PB（pH=7.4）按相应比例适当稀释即可，如：
PB（PH=7.4）:
取500mlPB,加水稀释至1000ml即可.
PB（PH=7.4）:
取50mlPB,加水稀释至1000ml即可.
PB（PH=7.4）:
取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可.
若需要NaCl的话，参加NaCl至0.9%（g/100ml）即可.
另：
其它各种另PH值的PB（100ml）配方：
pHNaH2PO4（ml）Na2HPO4（ml）
5.8928
5.99010
6.18515
6.85149
6.94555
7.03862
7.13367
7.22872
7.32377
7.419ml81ml
7.51684
7.61387
7.9793
磷酸盐缓冲液（PBS）配制办法
称取8gNaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4,溶于800ml
蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸储水
定容至1L即可在15lbf/in2（1034x105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保管存于室温或4C冰箱中.
需要注意的是，通常所说的浓度指的是缓冲溶液中所有的磷
酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话，则需要
在配置的时候辨别参加100u/ml青霉素和链霉素之后再调
PH、定容、灭菌消毒.
PH7.67.47.27.0
H2O1000100010001000
NaCl8.58.58.58.5
Na2HPO42.22.2
2.22.2
依据经历来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发作了改动，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改动（我亲自
测过偏酸）.所以做实验的同学可要注意了，PH值能够会影
响实验后果，甚至能够招致阴性.所以务必记得这个时候和天气，要增强实验条件控制问题.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发作偏酸或偏碱，注意重新换新液.
PBS缓冲液
称取NaCl8g,KCl,Na2HPO4?
12H2O,KH2PO4,浴于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L,常温保管备用.
PBST缓冲液
取300plTween20参加PBS100ml中，混匀后即刻使用.现用现配.
如果是把所有固体加年夜十倍，配置为浓缩液，任务时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显
偏酸.不能用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调，然则有更方便的办法.
十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值.不需要其它任何处置.这个可以先取少虽试一试，配好之后再测一次~
2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充沛搅拌溶解.
3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后参加去离子水将溶液定容至1L.
4.低温局压火菌后，室温保管^
注意：
上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配
方中弥补1mMCaCl2和0.5mMMgCl2.
0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBS）的配制：
甲液：
0.05mol/LNa2HPO4溶液：
称取磷酸氢二钠，加蒸储水至1000ml;
乙液：
0.05mol/LKH2P04溶液：
称取磷酸二氢钾，加蒸储水至1000m1.
将甲乙液分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保管，用时甲、乙两液各按分歧比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表：
pH甲液ml乙液mI
5.59
5.0
95.0
5.91
10.0
90.0
6.24
20.0
80.0
6.47
30.0
70.0
6.64
40.0
60.0
6.81
50.0
50.0
6.98
60.0
40.0
7.17
70.0
30.0
7.38
80.0
20.0
7.73
90.0
10.0
8.04
95.0
5.0
你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可.
硼酸缓冲液（0.2mol/L硼酸盐）
PH
0.05mol/L硼砂（ml）
0.2mol/L硼酸（ml）
PH
0.05mol/L硼砂（ml）
（ml）
硼砂易失去结晶水，必需在带塞得瓶中保管；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液替代
盐酸-氯化钾缓冲液
PH
0.1mol/LHCl（ml）
0.02mol/LKCl（ml）
加水至
（ml
）
PH
0.1mol/LHCl（ml）
0.02mol/LKCl（ml）
加水
至
（ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
0.02mol/LKCl溶液：
溶7.455g氯化钾于水中，稀释至
500ml
苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液
PH
0.1mol/LHCl
0.02mol/L苯二
加
PH
0.1mol/LHCl
0.02mol/L苯二
加水
（ml）
甲酸氢钾（ml）
水
（ml）
甲酸氢钾（ml）
至
至
（
（mi）
mi）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
0.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：
称取在硫酸枯燥器中枯燥过
24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
（ml）
0.2mol/L磷酸二氢钾（ml）
加水至
（
ml）
PH
（ml）
0.2mol/L磷酸二氢钾（ml）
加水
至
（ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
25.00
100
100
0.2mol/L磷酸二氢钾溶液：
溶13.616g磷酸二氢钾于水中,
稀释至500ml
硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaO
H（ml）
0.2mol/L硼酸-
氯化钾（ml）
加
水
至
（
PH
0.1mol/LNaO
H（ml）
0.2mol/L硼酸-
氯化钾（ml）
加水
至
（ml）
ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
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