免疫组化试题有答案.docx

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免疫组化试题有答案

免疫组织化学试题参考答案

一、名词解释：

1.PAS反应：

即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称证。

PAS反应。

其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，7.诱发荧光：

组织细胞中的某些物质本身不发荧

使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出醛基，光，但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分

与碱性品红反应，生成紫红色化合物沉淀。

子。

此技术目前主要应用在生物胺的显示中。

其中

2.Feulgen法：

即福尔根反应显示DNA法。

其原最重要的是甲醛和乙醛酸诱发多巴胺、去甲肾上腺

理是组织用1NHCl60℃水解，将DNA分子中脱氧素、肾上腺素和5—羟色胺荧光，以及邻苯二醛诱

核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与发组织胺荧光的反应。

碱性品红发生反应，生成紫红色化合物沉淀。

8.定量分析：

定量判断是结果判断中最重要也是具

3.PAP法：

即过氧化物酶一抗过氧化物酶法，该技有意义的判断，其判断结果有助于统计学的分析处

术原理与其他免疫定位技术相同，即通过抗体使标理。

组织细胞化学结果的定量分析又称定量组织细

记分子（抗辣根过氧化物酶）定位于抗原附件。

其胞化学，指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对

不同点为三步法，且有放大作用，反应完全依赖于阳性结果（最终阳性产物）进行测量，以数值反应

免疫学结合，不需要标记任何抗体，反应灵敏度高，被检测物质的含量。

此法是阳性结果的进一步检测

背景低。

注意一抗与复合物中的抗体必须来源于同和分析，更加直观地反应实验结果，更有力地说明

一种动物，且二抗必须过剩。

实验结果。

常用有人工定量分析与仪器定量分析两

4.核酸探针：

指能与特定核酸序列发生特异性互补类。

的已知标记的核酸片段，可检测待测样品中特定的9.固定：

为了更好的保持细胞和组织原有的形态结

基因序列。

无标记的探针称裸探针。

构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定，

5.核酸分子杂交：

指具有互补序列的两条核酸单链其作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或抵制外

在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。

杂源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度的保存

交的双方分别为待测的核酸序列和已知核酸序列，细胞和组织的抗原性，使水溶性抗原转变为非水溶

后者通常用核素或非核素示踪标记，称为探针性抗原，防止抗原弥散。

（probe），杂交后形成的异源双链分子称为杂交分10.组织化学：

指在形态学基础上研究组织或细胞

子。

中物质的化学成分和活性，并进行定性、定位、定

6.质量控制：

指组织化学反应各环节中获得最佳效量及其代谢状态的学科。

其目的是联系形态、化学

果的技术把握，是组织化学的关键环节，是取得满万分和功能来了解组织或细胞的代谢变化。

意效果的必要条件，是提高结果可信度的根本保11.ABC法：

即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物

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法，其基本原理是在抗生物素和生物素之间形成共适的第二抗体。

价和不可逆的结合，通过抗生物素在辣根过氧化物12.细胞骨架：

指细胞内的结构网架，由一些细丝

酶和第二抗体之间建立生物素桥联，使酶定位于所成分组成，包括微丝、微管、中间丝和微梁网格。

需测定的特异性抗体周围。

其优点在于易于找到合

二、问答题

1.简述酶组织化学的基本原理。

⑶杂交后处理①冲洗：

用一系列浓度不同的和温度

答：

在酶组织细胞化学方法中，从原理上讲，可分不等的平衡盐液冲洗（一般原则是盐液的浓度由高

为两在类型。

一类是酶是活性——酶组织细胞化学到低，温度由低到高），并在冲洗的过程中防止切

方法，属于一般组织细胞化学方法。

一类是酶蛋白片干燥；②RNA酶消化处理：

仅使用于RNA杂交。

质的存在及存在的部位——免疫酶组织细胞化学⑷显示/杂交体的检测：

①同位素标记者：

用放射

方法，属于免疫组织细胞化学的内容。

目前，通常自显影技术显示。

②非同位素标记者：

应选择相应

是将两者结合起来，即显示酶活性，又酶蛋白的存的方式显示。

⑸对照实验：

根据核酸探针和靶核苷

在、分布及代谢情况。

酸的种类在现有可能条件下选定。

2.用箭头表示免疫电镜技术（包埋前法）的过程。

4.组织化学质量控制有哪些方法？

答：

包埋前法实用于酶标法和PAP法。

具体过程答：

组织化学质量控制的方法有：

⑴实验过程的质

如下：

取材→→固定→→冰冻切片（40~150μm）量控制：

①试剂的质量控制，包括：

试剂的特异性

→→免疫染色（同酶标法和PAP法）→→选择和敏感性；最佳的稀释度；在已知阳性和阴性的标

阳性部位，在解剖显微镜下，取下阳性部位，裱于本上，观察其染色结果的复合情况；要确定染色的

盖玻片上→→1%的锇酸固定，1~1.5h→→脱水温度和时间；保存的时间和有效期的时间。

②操作

→→平板包埋聚合→→修块、超薄切片步骤的质量控制，包括：

组织标本制备的质量控制；

（50~80nm）、裱于铜网→→重金属盐双重染色→操作过程各环节的质量控制a.各种溶液的浓度、

→电镜观察、记录、照片。

成分、PH值的控制，容器的质量标准。

b.特殊试

3.简述核酸分子原位杂交组织化学的过程。

剂的配制：

c.步骤中间环节的控制；⑵背景染色

答：

此过程包括：

⑴杂交前准备：

取材和固定→玻的控制①疏水作用②离子作用—电荷作用③内原

片及盖片的处理（粘附剂的使用）→器皿处理和溶性酶活性作用④抗体污染或/抗体纯度不高⑤内原

液配制容器的处理→增加组织的通透性和核酸探性抗生物素/生物素蛋白结合活性⑥抗原的扩散⑦

针的穿透性→减低背景染色→防止RNA酶的污交差反应⑧其它原因。

染；⑵杂交过程（杂交反应）：

包括变性与杂交；5.比较PAP法和ABC法的异同。

PAPABC

灵敏性低（1倍）高（20倍）

特异性高更高

背景一般有背景一般很少或无背景

复合物特点

PAP复合物

只用于PAP法，且抗体与一抗的种族相同

ABC复合物

用途广，可通用，用生物素标记的均可

用途免疫组织化学（IHC）IHC、ELISA、原位杂交

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6.简述PAP法的过程。

的多聚甲醛4-5h（4℃）固定后直接进行冰冻切片。

答：

⑴处理切片，封闭内源性物质和避免交叉反应；9.简述结果的判断的类型及意义。

⑵抗孵育切片，湿室，37℃，30-60分钟；⑶PBS答：

结果的判断类型：

⑴定性判断，即实验结果真

漂洗，3次，5分钟/次；⑷2抗孵育切片，湿室，实性判断；⑵定位判断，即结果出现的部位的确定，

室温，37℃，30-60分钟；⑸PBS漂洗，3次，5可以协助定性判断；⑶定量判断是结果判断中最重

分钟/次；⑹加入PAP复合物，孵育30分钟；⑺要也最具有意义的判断。

意义：

实验结果的判断直

PBS漂洗，3次，5分钟/次；⑻染色0.01～接关系着实验的成败，因此，结果判断是整个实验

0.02%H2O2+0.01～0.05%DAB+0.05～

工作的核心和结论，必须是真实的结果，特别是一

0.10UMTris-Hcl（PH7.40）室温，3-5分钟，避光；些实验结果与前人或与其它文献报道差异较大时，

⑼漂洗，双蒸馏水洗涤；⑽复染；⑾漂洗，双蒸馏作出结果判断时应特别慎重。

水洗涤；⑿脱水、透明、封片；⒀光镜观察，记录。

10.简述核酸原位杂交技术的特点。

7.定量分析有哪些方法？

答：

核酸原位杂交技术的特点如下：

①特异性与敏

答：

⑴人工定量分析；⑵仪器定量分析：

①显微荧感性高。

②在组织细胞内定位可检测的靶序列。

③

光分光光度计；②显微分光光度计/仪；③显微图能够将组织学表现与基因功能的变化相结合。

④可

像分析仪：

灰度、长度、周边、面积、曲线长等；完好的保存组织与细胞的形态结构。

⑤不需要从组

④流式细胞计数仪；⑤激光扫描共聚焦显微镜技织细胞中提取核酸，避免了抽提中核酸量的损失。

术。

⑥对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感性，

8.增强组织化学染色的方法有哪些？

可在1%细胞中检出目的核酸序列。

⑦可用于研究

答：

⑴酶消化在抗原暴露中的作用：

①胃蛋白酶：

个别细胞中的核酸，而不受组织中其他细胞的影

0.4%、37℃、20～30分钟。

②胰蛋白酶：

0.1%、37响。

⑧不需要破裂细胞，经适当处理后探针可进入

℃、5～40分钟。

③链霉蛋白酶：

0.06%、室温、细胞，与细胞内核酸杂交。

10分钟。

⑵微波炉处理在暴露抗原中的作用：

其11.用箭头表示石蜡切片技术的步骤。

原理在于通过微波管发射较高频率的电磁波而使答：

石蜡切片技术步骤：

①取材→②固定→③脱水

组织内部的分子发生高速振荡，使组织温度升高，→④透明→⑤浸蜡→⑥包埋→⑦切片。

同时加速分子交联，促使组织中抗原决定簇暴露。

12.简述免疫组织细胞化学技术的全过程。

步骤：

脱蜡、水化的标本微波处理10～20分钟，答：

免疫组织细胞化学技术全过程：

抗原提取和纯

功率600W→室温冷却15分钟以上→常规免疫细胞化→→免疫动物→→抗体的分离、提取、纯化和

化学染色。

⑶不同抗原组织准备方法的检测：

主要效价的确定→→标记抗体→→标本制备→→免

在固定方法和固定剂上存在差异。

①细胞外和基底疫反应过程→→观察及结果判断与分析。

膜相关蛋白抗原：

交联固定剂碳二亚胺和蛋白沉淀13.常见的免疫组织化学方法有哪些？

类固定剂乙醇。

②细胞膜和胞浆相关免疫球蛋白：

答：

常见的免疫组织化学方法：

①免疫荧光组织/

首选蛋白沉淀类固定剂乙醇。

③胞浆酶和胞浆激细胞化学技术；②免疫酶标组织/细胞化学技术；

素：

醛类固定剂。

④各类组织和细胞抗原：

低浓度③过氧化物酶一抗过氧化物酶法（PAP法）；④抗

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生物素—生物素复合技术（ABC法）；⑤SPA免疫性和复性的原理，用已知碱基序列的单链核酸片段

组织/细胞化学技术；⑥免疫电镜技术。

作为探针检测样品中是否存在与其互补的同源核

14.影响核酸杂交的因素有哪些？

酸序列的方法。

即双链核酸分子（DNA双链）分

答：

影响核酸杂交的因素：

①核酸分子的浓度和长子分解为单链—变性（采用加热/提PH值来实现）

度：

核酸浓度大，单链核酸间的碰撞几率大，复性→→杂交后单链聚合为双链—退火/复性。

几率大。

单链探针浓度越大，杂交效率高，但双链16.简述组织化学的基本要求。

探针浓度过高会影响杂交的效率。

②温度：

温度过答：

组织化学的基本要求：

①保持组织细胞良好的

高不利于核酸的复性，温度过低不利于少数碱基配形态结构。

②具备高度的特异性。

③应有一定的灵

对形成的局部双链分离。

③离子强度：

离子强度低，敏性。

④可重复性。

⑤生物反映的产物必须在原位

杂交速度慢，随着离子强度增高杂交反应率增加。

沉淀、色深、不溶和具有稳定性的特点。

④杂交液中的甲酰胺：

甲酰胺是一种变性剂，能干17.简述免疫组化在人体研究中的主要用途。

扰碱基堆积力和氢键的形成，因此可减低核酸杂交答：

免疫组化在人体研究中的主要用途：

㈠免疫组

的Tm。

⑤核酸分子的复杂性：

核酸的复杂性是指化在肿瘤病理学的研究和诊断中的主要应用：

（1）

存在于反应体系中不同顺序的总长度，复杂性越组织起源不明肿瘤的研究；

（2）研究病原体与肿瘤

高，形成正确配对难度越大，反应速度越慢。

⑥非的关系；（3）协助确定肿瘤的良恶性；（4）测定肿

特异性杂交反应：

为减少非特异性杂交反应，在杂瘤细胞的增殖活性；（5）分化差的癌和肉瘤的鉴别；

交前将非特异性杂交位点进行封闭，以减少对探针（6）确定转移性恶性肿瘤的原发灶；（7）恶性淋

的非特异性吸附作用。

巴瘤的诊断和分型；（8）为制定肿瘤的治疗方案提

15.简述核酸分子原位杂交的基本原理。

供依据。

㈡免疫组化技术在病原微生物的鉴定中的

答：

核酸分子杂交是依据DNA双链碱基互补、变应用；㈢免疫性皮肤疾病在诊断中的应用。

三、填空题

1.影响酶催化反应的因素是酶浓度、底物浓度、物素—HRP、金属。

激活剂浓度、抑制剂浓度、PH值、温度。

7.根据探针的核酸性质分基因组DNA探针，cDNA

2.核酸杂交的一般步骤是待测核酸的制备与变性探针，RNA探针，寡核苷酸探针四类。

→探针的制备及标记→固相支持物的选择与处理8.仪器定量分析技术有显微荧光分光光度计、显微

→预杂交、杂交、漂洗→检测显示杂交信号→结果分光光度计/仪、显微图像分析仪、流式细胞计数

的判断分析。

仪、激光扫描共聚焦显微镜技术。

3.增强特异免疫染色的方法有①蛋白酶消化法②9.组织化学的基本要求是保持组织细胞良好的形

合适的抗体稀释液③温育的时间长短30~60℃4态结构，具备高度的特异性，应有一定的灵敏性，

℃过夜④多层染色，提高敏感度。

可重复性，生物反映的产物必须在原位沉淀、色深、

4.常用的固定剂是醛类、非醛类、金属类。

不溶和具有稳定性的特点。

5.核糖体是核糖核酸和蛋白质组成。

10.石蜡切片的5大步骤是①取材→②固定→③脱

6.抗体常用的标记物有荧光素、酶、抗生物素—生水→④浸蜡、包埋→⑤切片。

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11.组化中常用的酶类：

辣根过氧化物酶（HRP）、22.实验过程的质量控制是试剂的质量控制、操作

小牛肠碱性磷酸酶（CIAP）、葡萄糖氧化酶、β-步骤的质量控制、背景染色的控制。

半乳糖苷酶。

23.在酶组织化学中，根据其反应原则，显示酶的

12.固定基本原则是组织块要尽量小，固定要及时方法，可分为沉淀反应法和电子传递法两大

和适时，选择合适的固定剂，要注意固定剂的浓度、类。

PH值和温度。

24.辣根过氧化物酶（HRP）显色原有DAB、AEC、

13.固定方法是浸入法和灌注法。

CN、H-Y试剂。

14.免疫组织/细胞化学特点是高度特异性，高度敏25.荧光组织化学分为自发荧光、诱发荧光、荧光

感性，方法和过程统一，形态、机能、新陈代谢等染色、免疫荧光、酶促荧光。

生命活动相结合。

26.荧光图象的记录方法有描述法、荧光照相、暴

15.核酸原位杂交技术的特点是光时间测定法、强弱表示法、显微荧光测定法。

特异性、敏感性高；可检测的靶序列在组织细胞内27.免疫反应的形成可分致敏阶段、反应阶段和

定位；能够将组织学表现与基因功能的变化相结效应阶段三个阶段。

合；可完好的保存组织、细胞的形态结构；不需要28.PAP法的特点是抗体活性高；灵敏度高；背景

从组织细胞中提取核酸，避免了抽提中核酸量的损染色浅，有利于观察和记录。

失；对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感29.ABC法的优点是①敏感性强；②特异性强，背

性，可在1%细胞中检出目的核酸序列；可用于研景染色浅；③方法简单，节约时间；④ABC试剂

究个别细胞中的核酸，而不受组织中其它细胞的影盒国内已大量生产，价格适中；⑤生物素具有与多

响；不需破裂细胞，经适当处理后探针可进入细胞，种显示剂结合的能力，可用作双重或多重免疫染

与细胞内核酸杂交。

色。

16.内质网分粗面内质网和滑面内质网两类。

30.免疫电镜技术的基本要求是保持超微结构完

17.根据试剂或标记物的不同分一般组织化学、荧好，结构不改变；保存最多的抗原及抗原活性。

光组织化学、免疫组织化学、核酸分子原位杂交组31.免疫电镜技术分铁蛋白标记免疫电镜技术、酶

织化学四类。

标记免疫电镜技术、PAP法和胶体金免疫电镜技

18.核糖体分游离核糖体、附着核糖体、多聚核糖术四类。

体三类。

32.胶体金免疫电镜技术优点是①金颗粒电子密度

19.溶酶体分初级溶酶体、次级溶酶体、残余体三高，清晰可辩，形态规则；②方法简单一些，不如

类。

PAP法复杂；③同一组实验，可用不同直径的金颗

20.细胞骨架是微丝、微管、中间丝和微梁网架粒可作多种抗原的区别研究，双标；④金标抗体能

组成。

发生二次电子，可作用扫描电镜观察。

21.确定最适PH的方法是查阅文献，根据前人的经33.免疫电镜技术包埋后法缺点是①抗原及活性损

验，预实验印证和实验测定最适PH值。

失大；②部位不准；③得到阳性结果难度大。

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四、实验设计题

（一）某实验室拟采用ABC法研究缺血性心肌损

（二）某实验室拟采用PAP法研究缺血性脑损伤

伤时ANP（ANF）的变化。

请设计此课题。

时NPY的变化。

请设计此课题。

1、准备哪些试剂和药品。

1、准备哪些试剂和药品。

二甲苯；30%H2O2和浓盐酸；ABC免疫复合物试二甲苯；30%H2O2和浓盐酸；PAP免疫复合物试

剂；抗大鼠ANP的特异性兔抗体（一抗）；生物素剂（来自于兔）；抗大鼠NPY的特异性兔抗体（一

标记羊抗兔免疫球蛋白（二抗）；正常羊血清PBS抗）；猪抗兔免疫球蛋白（二抗）；正常猪血清PBS

液；DAB显色剂；梯度酒精溶液（100%、95%、液；DAB显色剂；梯度酒精溶液（100%、95%、

90%、80%、70%）；蒸馏水；磷酸盐缓冲液PBS；90%、80%、70%）；蒸馏水；磷酸盐缓冲液PBS；

复染液（如苏木精）；封片剂（中性树胶）等。

复染液（如苏木精）；封片剂（中性树胶）等。

2、写出实验的思路或过程。

2、写出实验的思路或过程。

⑴实验动物与分组：

取大鼠（同种、同窝别、相近⑴实验动物与分组：

取大鼠（同种、同窝别、相近

体重）20只，随机分为2组，实验组（缺血组）体重）20只，随机分为2组，实验组（缺血组）

10只，对照组10只。

10只，对照组10只。

⑵实验组大鼠采用结扎冠状动脉方法制作缺血性⑵实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉方法制作全

心肌损伤模型，对照组（即假手术组）只暴露冠状脑缺血性动物模型，对照组（即假手术组）只暴露

动脉但不结扎。

颈总动脉但不结扎。

⑶实验过程：

①从实验组大鼠心肌损伤组织中按设⑶实验过程：

①从实验组大鼠大脑皮质组织中按设

计好的不同时间点取材（对照组取材部位、时间与计好的不同时间点取材（对照组取材部位、时间与

实验组相同），制备石蜡切片标本；②石蜡切片脱实验组相同），制备石蜡切片标本；②石蜡切片脱

蜡下水；③3%H2O2室温避光封闭20min，蒸馏水蜡下水；③3%H2O2室温避光封闭20min，蒸馏水

洗；④TBS微波修复抗原，0.01mLMPBS洗3min洗；④TBS微波修复抗原，0.01mLMPBS洗3min

×3次；⑤正常羊血清37℃，孵育20min，甩干不×3次；⑤正常猪血清37℃，孵育20min，甩干不

洗；⑥兔抗ANP37℃孵育1h，0.01MPBS洗3min洗；⑥兔抗NPY37℃孵育1h，0.01MPBS洗3min

×3次；⑦生物素化羊抗兔IgG37℃孵育30min，×3次；⑦猪抗兔IgG37℃孵育30min，0.01MPBS

0.01MPBS洗3min×3次；⑧加ABC复合物37℃洗3min×3次；⑧加PAP复合物37℃孵育30min，

孵育30min，0.01MPBS洗4min×4次；⑨DAB室0.01MPBS洗4min×4次；⑨DAB室温避光显色

温避光显色5～10min（镜下控制显色时间），自来5～10min（镜下控制显色时间），自来水终止；○10

水终止；○10切片脱水，透明封片。

切片脱水，透明封片。

⑷实验组与对照组均按上述实验过程进行。

⑷实验组与对照组均按上述实验过程进行。

⑸观察记录结果：

出现棕黄色颗粒即为阳性结果。

⑸观察记录结果：

出现棕黄色颗粒即为阳性结果。

⑹将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得⑹将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得

出结论。

出结论。

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（三）某实验室拟采用核酸原位杂交技术研究缺血⑷实验组与对照组均按上述实验过程进行。

⑸观察

性脑损伤时SPmRNA的变化。

请设计此课题。

记录结果：

出现棕黄色颗粒即为阳性结果。

1、准备哪些试剂和药品。

⑹将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得

二甲苯；30%H2O2和浓盐酸；梯度酒精溶液

出结论。

（100%、95%、90%、80%、70%）；蒸馏水；复（四）某实验室拟采用免疫电镜技术（包埋前法）

染液（如苏木精）；封片剂（中性树胶）；0.1MPBS研究缺血性脑损伤时NPY的变化。

请设计此课题。

（pH7.2）；0.2MPB（（pH7.2）；0.1M甘氨酸；4%多1、准备哪些试剂和药品。

聚甲醛；16×Denhardt溶液；预杂交液；20×SSC；二甲苯；30%H2O2和浓盐酸；梯度酒精溶液

抗体稀释液；TSM1；DIGDNA标记检测试剂盒。

（100%、95%、90%、80%、70%）；蒸馏水；0.01M

2、写出实验的思路或过程。

PBS缓冲液；复染液（如苏木精）；封片剂（中性

⑴实验动物与分组：

取大鼠（同种、同窝别、相近树胶）；0.5%戊二醛-2%多聚甲醛；30%蔗糖/PBS

体重）20只，随机分为2组，实验组（缺血组）溶液；1%牛血清；抗大鼠NPY的特异性兔抗体（一

10只，对照组10只。

⑵实验组大鼠采用结扎双侧抗）；生物素标记羊抗兔免疫球蛋白（二抗）。

颈总动脉方法制作全脑缺血性动物模型，对照组2、写出实验的思路或过程。

（即假手术组）只暴露颈总动脉但不结扎。

⑴实验动物与分组：

取大鼠（同种、同窝别、相近

⑶实验过程：

①麻醉大鼠后，用4%多聚甲醛灌流体重）20只，随机分为2组，实验组（缺血组）

固定后取材，制备冰冻切片。

②随机引物制备10只，对照组10只。

⑵实验组大鼠采用结扎双侧

cDNA核酸探针，并用DIGDNA标记检测试剂盒颈总动脉方法制作全脑缺血性动物模型，对照组

检测探针敏感性。

③预杂交：

滴加适量预杂交液，（即假手术组）只暴露颈总动脉但不结扎。

42℃30min。

④杂交：

倾去预杂交液，在每张切⑶实验过程：

①麻醉大鼠后，经主动脉灌流0.5%

片上滴加10-20μl杂交液（将探针变性后稀释在戊二醛-2%多聚甲醛固定后取材，制成厚切片。

②

预杂交液中，0.5ng/μl），覆以盖玻片或蜡膜，PBS漂洗3次，每次15min。

③30%蔗糖/PBS溶液

42℃过夜。

（注意阴性对照）⑤洗片：

4×SSC、2中室温下静置至沉底。

④液氮冻融，增加细胞膜通

×SSC、1×SSC、0.5×SSC37℃各洗20min；0.2透性。

⑤1%牛血清孵育组织块30min后PBS漂洗

×SSC37℃洗10min；0.2×SSC与0.1MPBS