柱压问题 文档.docx
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柱压问题文档
色谱柱在HPLC中是非常关键的部件。
一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了。
色谱柱是消耗品，有一定寿命，使用中也非常容易出问题。
普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年。
使用不得当用两、三个月就可能损坏。
所以使用中应该非常注意。
1.
在使用一根新的色谱柱之前，一定要看柱说明书，将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚。
接触最多的是C18色谱柱，它对试剂应用的范围非常广，甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用。
但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求，有的色谱柱只能使用水，不能使用有机试剂，有的色谱柱只能使用有机试剂，而且使用指定是某一种，象GPC色谱柱。
这些事情一定搞清楚，如果流动相使用不对，柱子很快会损坏。
另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子。
2.
柱子是有方向的，柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向。
当换新柱子时，不要马上就接到检测器上使用。
将柱子入口处接在进样器的出口，柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器，按箭头方向垂直朝上，用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右。
将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上，否则小气泡跑到检测池里，就很难赶走，检测器产生噪声信号，基线也就走不好。
3.
关于压力对色谱柱的影响：
常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间，生产厂家不同，耐压也不同，从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高，但柱效高低不仅与耐压的高低有关，还有其他因素。
从使用中看，在保证柱效的同时，耐压不要太高，仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力，检查柱压力应分段检查。
压力过高不仅柱子受不了，其他的部件也会出问题，例如自动进样器。
4.
色谱柱对pH值是有一定的使用范围。
以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH。
耐碱性能不太好，流动相的pH大于8会使硅胶溶解。
有些分析条件须用碱性流动相，这时一定要选耐碱性好的色谱柱，流动相的PH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。
5.
色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度。
一般使用温度在60℃以下，典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间，高温使用会缩短柱寿命。
6.
色谱柱使用过程中压力的骤然波动，温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响。
进样过程中，进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免。
一般说来，在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失。
这种问题是不可修复的
7.
色谱柱内存在缓冲盐时，如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱，会导致柱内缓冲盐结晶析出，造成柱压明显升高。
出现该问题时，反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱，使柱内的盐全部溶解冲出，再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相。
8.
样品的预处理，许多样品，特别是生物样品与中药材，其组分复杂，样品预处理是影响色谱柱寿命的关键。
样品经过常规的前处理后，进样前还需进行以下步骤：
a.用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒，以免赌塞柱头筛板及柱内填充床，使柱压升高。
b.将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解。
9.
为了保护色谱柱，在色谱柱前接了一个保护柱。
保护柱通常是比较短的分析柱，通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质，达到保护色谱柱的目的。
保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质。
为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变，最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱。
10.
色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱推荐用甲醇保存。
在日常分析中，流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中，随着分析时间的延长，吸附量会越多，所以柱子要经常清洗，一般柱子使用一两个星期洗一次，柱子不同清洗的流动相就不同，C18柱子常用甲醇清洗，不要用水清洗这对柱子不好，一般清洗3～4小时，另外色谱柱长时间不用，存放时要将柱子洗干净，脏柱子放置时间越长，柱效会大大降低。
存放时，柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈），两端封死。
影响柱压的因素一般有这样几种：
1、流动相的配比（如甲醇水体系在50：
50附近柱压是最大的）；
2、流速的影响，流速越大柱压越高；
3、使用的溶剂，特别是水一般不应该超过一周（最好2～3天就换一次），水很容易生细菌从而堵掉系统的（不知道楼主用的是什么水，最好用二次蒸馏水或娃哈哈也行）；
4、整个色谱系统有三重防堵措施，一是溶剂瓶中的砂心过滤，二是两种溶剂混合后有个过滤器，三是进柱子之前有个保护柱（不知楼主的色谱装了保护柱没有，很重要的，否则柱子寿命会缩短很多，有些柱子有保护柱可用400h还没问题,而没保护柱使用不到100h就不行了，当然，保护柱有好几种功能的），前两个地方一般因为溶剂不纯（包括前面讲的水生细菌）而堵，而保护柱前则会因为前面的原因与所分析的样品性质共同影响而堵，所以每次分析完后一定要先用水冲洗，再用甲醇冲洗（一般各为20分钟左右，冲到柱压不变，像分析专业的一般都会冲洗过夜），一定要冲洗干净，否则用一次下次就会堵了！
近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多，所用色谱柱的种类也越来越多，问题出的也较多，值得注意的是，不论怎样对色谱柱进行处理，一般都很难恢复到原有水平，因此，大家再使用色谱柱之前一定要看说明书，把以上几项问题搞清楚后再使用，尽量避免发生如上问题。
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：
（1）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
（2）、色谱柱头的填料被样品污染；
（3）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；
（4）、流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：
（1）、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
（2）、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3）、如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4）、如果因PH值使用不当，很难恢复。
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：
（1）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
（2）、色谱柱头的填料被样品污染；
（3）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；
（4）、流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：
（1）、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
（2）、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3）、如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4）、如果因PH值使用不当，很难恢复。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法（申请加分）1色谱柱跑干了，处理方法：
将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：
检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：
检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：
检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：
多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：
更换预柱。
7塔板数低：
色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响
8色谱柱易变性：
色说柱选择不对，二次保留的影响
9色谱柱寿命短：
色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）
10保留值变化：
色谱柱平衡不够，流动相比例改变
11出现新的干扰峰：
初始分离不够或初始样品无代表性
选择波长要从以下几个方面考虑：
1.检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2.对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
（一）涡流扩散（Eddydiffusion）
流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
（二）分子扩散（Moleculardiffusion）
分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。
要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。
同时在操作时，如果流速太慢，被分离物质停留时间长，则扩散严重。
（三）质量转移（Masstransfer）
被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。
在液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。
当流速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。
四）动相流速
当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。
如将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。
在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。
五）固定相颗粒大小
定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动。
1、开泵后压力即升高至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试，确定为检测池堵塞。
2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查，排除，最后确定为，检测波长的显示值和实际值不符。
由气味、景象和声音可以发现的问题
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。
你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。
例如：
在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。
大部分的问题是可以通过眼睛看到。
A、溶剂的气味
原因 解决方法
1、漏液 1、见前
2、溅出 2、a、检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净
B、热气味
原因 解决方法
1、仪器过热 1、a、检查并调节通风设施b、检查并调节温度设定
c、关掉仪器，查找维修手册
C、读数不正常
原因 解决方法
1、压力不正常 1、见前
2、柱温箱问题 2、a、检查并调节设定b、参照用户手册
3、检测器灯失效 3、更换灯
D、灯警告
原因 解决方法
1、压力超出极限值 1、a、检查是否阻塞b、检查并调节极限值的设定
2、其它警示灯 2、见用户手册
E、警告音
原因 解决方法
1、溶剂泄漏/溅出 1、找到并解决
2、其它警告音 2、见用户手册
F、刺耳的短音或长音
原因 解决方法
1、轴承失效 1、见用户手册
2、润滑不够 2、进行恰当的润滑
3、机械故障 3、见用户手册
进样阀可能发生的问题
A、手动进样阀，转动不灵
原因 解决方法
1、转子密封损坏 1、更换或调整转子密封
2、转子太紧 2、调整转子的松紧度
B、手动进样阀，载样困难
原因 解决方法
1、进样阀安装不当 1、重新安装
2、定量环阻塞 2、清洗或更换定量环
3、进样器污染 3、清洗或更换进样器
4、管路阻塞 4、清洗或更换管路
C、自动进样阀，不能转动
原因 解决方法
1、无压力（或电源） 1、提供恰当的压力（电源）
2、转子太紧 2、调整转子的松紧度
3、进样阀安装不当 3、重新安装
D、自动进样阀，其它问题
原因 解决方法
1、阻塞 1、清洗或更换阻塞部件
2、机械故障 2、见随机维修手册
3、控制器故障 3、维修或更换控制器
HPLC柱压过高：
1.拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
2.把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用10倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱压仍不降，再检查
3.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高，可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器
基线不稳，上下波动或漂移
1。
流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟
2。
单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物
3。
泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封
4。
系统存在漏液点，确定漏液位置并维修
5。
流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物
6。
柱后产生气泡，流通池出液口加负压调节器
7。
检测器没有设定在最大吸收波长处
8。
柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。
用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的心流动相对柱子进行冲洗
1.检测信号出现倒峰，检查检测器与主机相连接是否有松动，可以把下重新连接。
2.夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。
3.由甲醇换到流动相平衡时，压力先稍稍下降，然后慢慢回升，可能是混合池混合效果不好，也可能是B泵轻度堵塞。
4.色谱柱长期不用，应用甲醇冲洗2h以上后，宁上两端螺丝保存。
岛津机器易出现的毛病是：
1、压力不稳：
单向阀堵塞，可拆下，用甲醇水超声；或漏液；管路过滤器损坏；
2、基线噪音变大：
未接地线，可在检测器的外壳外接一根铁丝连地；灯能量不足，可在funk功能中查找灯的使用时间，或拆开机器外壳，观看紫外灯的强度；检测池污染，拆下柱子，用无体积连接器连接泵和检测器，用异丙醇小流速冲洗半个小时即可；流动相污染或进气泡。
3、泵头有盐析出：
应经常用5％异丙醇清洗柱塞杆，否则易磨损。
4、进样口漏液：
可能是标准针头变形或损坏，使得进样器磨损，不好的针头应及时扔掉。
液相色谱常见问题及处理方法
液相色谱常见问题及处理方法
HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
1、样品量不足，解决办法为增加样品量
2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。
调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；
4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化
漂移现象
1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
快速变化现象
1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
HPLC仪器问题
1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？
答：
流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。
2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？
答：
a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气
b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物
c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封
d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修
f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器
g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处
h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
3、接头处为何经常漏液，如何处理？
答：
接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。
接头被污染或磨损；建议更换接头。
接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。
4、进样阀漏液是如何造成的？
答：
a.转子密封损坏；更换转子密封
b.定量环阻塞；清洗或更换定量环
c.进样口密封松动；调整松紧度
d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）
e.废液管中产生虹吸；清空废液管
谱图问题
1、问：
造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？
答：
a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板
b.色谱柱塌陷；填充色谱柱
c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱
e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱
2、问：
造成峰分叉的原因是什么，如何消除？
答：
保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。
3、问：
K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？
答：
反相模式，二级保留效应；
a.加入三乙胺（或碱性样品）
b.加入乙酸（或酸性样品）
c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品）
d.更换一支柱子
4、问：
保留时间的波动有几种可能的原因？
答：
温控不当；调节好柱温。
流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。
色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
1、样品量不足，解决办法为增加样品量
2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改变检测器
4、检测器衰减太多。
调整衰减即可
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气泡
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可
9、流动相流量不合适，调整流速即可
10检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重做校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，且常常不是柱子本身的问题，可按下面步骤检查问题的起因
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压还高，再检查；
2、把色谱柱从仪器上取下来，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再继续检查；
4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请联系厂家。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反相冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换流动性好的柱子
如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化？
漂移现象
1、温度控制不好，解决方法时采用恒温装置，保持柱温恒定
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3、柱子为平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
保留时间快速变化
1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出
3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内适当混合
HPLC仪器问题
1、HPLC泵压明显偏高的可能原因？
答：
流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。
2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？
答：
a流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用氦气脱气
b单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去除堵塞物
c泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封
d系统存在漏液点；确定漏液位置并维修
e柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器
f检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处
h柱平衡慢特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，用10-20倍体积新流动相对
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