核酸分子杂交试题全打印Word文件下载.docx
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21.一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以象核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。
这些标记物称为（）。
A.半抗原B.配体C.荧光素D.化学发光探针
22.SephadexG—50柱析法中，随着流动相流出的是（）。
A.小分子物质B.dATP
C.大分子探针D.dGTP
23.下列DNA分子的组成中，哪种是核酸变性的最主要的因素（C）。
A.ATB.AGC.GCD.TC
24.在探针的纯化时，无水乙醇可以沉淀（）。
A．DNA片段B.蛋白质分子
C．RNA片段D.小分子物质
25.待测DNA样品的电泳分离中，作为分子量标准的λDNA是用（）酶消化的。
A.HindⅢB.BglIC.ApaID.BamHI
三.多项选择题:
1.导致DNA变性的常用方法有（）。
A.热变性B.碱变性C.酸变性D.化学试剂变性
2.影响核酸杂交的因素有（）。
A.核酸分子的浓度和长度B.温度
C.离子浓度D.核酸分子的复杂性
3.核酸分子处于何种情况下，核酸的双链可以完全打开成为单链（）。
A.PH＜3B.3＜PH＜5C.5＜PH＜10D.PH＞10
4.在杂交液中加入甲酰胺，其目的是（）。
A.在低温下探针更稳定
B.使杂交液为中性
C.能更好的保留非共价结合的核酸
D.减少核酸杂交的副反应
5.为减少非特异性杂交反应，在杂交前将非特异性杂交位点进行封闭，常用的封闭物有（）。
B.复性的非特异性RNA
C.变性的非特异性DNA
D.高分子化合物
E.低分子化合物
6.下列哪些步骤属于Southern印迹杂交（）。
A.待测核酸样品的制备
B.待测DNA样品的电泳分离
C.凝胶中核酸的变性
D.Southern转膜
7.Southern转膜时常用的膜是（）。
A.化学活化膜B.尼龙膜C.硝酸纤维素膜D.滤纸
8.常用的Southern转膜方法有哪几种（）。
A.硝酸纤维素膜法B.毛细管虹吸印迹法
C.电转印法D.真空转移法
9.用于Southern印迹杂交的探针可以是（）。
A.纯化的DNA片段B.纯化的RNA片段
C.多核苷酸D.寡核苷酸片段
10.原位杂交可以用来检测（）。
A.DNAB.RNAC.cDNAD.RNA和DNA
11.原位杂交所用的探针可以是（）。
A.mRNAB.DNAC.RNAD.cDNA
12.Northern印迹杂交中转膜时可采用的方法有（）。
A.毛细管虹吸印迹法B.电转印法
C.真空转移法D.凝胶分离法
13.核酸原位杂交包括（）。
A.组织细胞的固定B.预杂交C.杂交D.冲洗
14.下列哪些属于核酸原位杂交的常用固定液（）。
A.10%甲醛B.4%多聚甲醛
C.乙醇：
冰醋酸（3：
1）D.戊二醛
15.RNA酶保护分析法可用于（）。
A.mRNA定量B.mRNA定性
C.mRNA末端定位D.确定内含子在相应基因中
16.核酸酶S1能降解（）。
A.DNA单链B.DNA双链
C.RNA单链D.DNA/RNA杂交双链
17.根据检测方法的不同，非核素标记物可分为以下几类（）。
A.半抗原B.配体C.荧光素D.化学发光探针
18.下列物质属于半抗原的是（）。
A.亲和素B.罗丹明C.生物素D.地高幸
19.核酸分子杂交所用探针采用体外标记法的优点是（）。
A.安全系数高
B.需要活体生物或细胞培养系统
C.探针，核酸分离和纯化及储存很方便
D.体外标记一般比体内标记的比放射活性高
20.化学法体外标记核酸探针最常用的是（）。
A.125IB.光敏生物素C.3HD.32P
21.DNA探针的酶促标记法包括（）。
A.缺口平移法B.随机引物法
C.PCR标记法D.末端标记法
22.探针的纯化包括（）。
A．乙醇沉淀法B.SephadexG-50
C.甲醇沉淀法D.丝柱离心法
23DNA变性后的理化性质的变化有（）。
A.粘度降低B.密度增加
C.紫外吸收值增加D.熔点减小
24.Southern杂交结果检测包括（）。
A．放射自显影B.比色或化学发光检测
C.酶切图谱分析D.凝胶电泳分离
25.Southern杂交在医学中的应用包括（）。
A.酶切图谱分析B.特定基因定性和定量
C.基因突变分析D.限制性片段长度多态性的分析
四.填空题:
1.核酸分子杂交中，杂交的双方分别称为与。
2.核酸分子杂交中已知的核酸序列称为。
3.适当的电泳缓冲液中，DNA在电场作用下，由负极向正极泳动，分子越大，泳动速度。
4.当促使变性的因素解除后，两条DNA又通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构，称为 。
5.在DNA的碱基组成中，AT之间是氢键，GC之间是氢键。
6.鉴别DNA靶分子的杂交称为，鉴别RNA靶分子的杂交称为。
7.根据检测对象的不同，可将原位杂交分为和。
8.常用的液相杂交有和。
9．RNA酶保护分析法（RPA）的基本程序包括：
、、、、。
10.液相杂交的核酸酶S1保护分析法可用于、、和。
11.核酸探针包括：
、、和。
12.在用核酸标记的探针，大多数标记方法需要的是α-32P，末端标记必须使用。
13.核酸的体外标记法分为和。
14.核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。
五、简答题
1、DNA变性的常用方法有哪几种？
2、简述DNA的复性过程。
3、一个良好固相支持物应具备哪些特性？
4、试比较硝酸纤维素膜、尼龙膜和化学活化膜的优缺点。
5、核酸原位杂交的理想固定液应具备哪些特点？
6、一种理想标记物应具备哪些特性？
7、随机引物法标记DNA探针有哪些优点？
六、论述题
1、试述核酸分子杂交的原理。
2、试述影响核酸分子杂交的因素。
3、试述Southern印迹杂交的基本步骤。
4、试述Southern印迹的常用方法及原理。
5、试述核酸原位杂交的基本过程。
6、试述探针的种类及其制备。
7、试述切口平移法标记DNA探针的原理。
名词解释：
SiRNA:
利用双链小片段RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。
Blue/whitescreen:
蓝白斑筛选。
即β-半乳糖苷酶基因失活筛选。
其原理是：
某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因，该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α－肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α－互补，形成完整的β－半乳糖苷酶。
该酶能催化指使剂底物X－gal形成蓝色菌落。
当外源基因插入lacZ’基因中MCS（多克隆位点），lacα－肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无β－半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。
Knockdown:
（基因）敲除。
是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。
基因敲除除可以终止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变，既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。
G-protein:
G蛋白。
是三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜内胞浆的一侧，由α，β，γ三个亚基组成，βγ二聚体通过共价结合锚定于膜上起稳定α亚基的作用，而α亚基本身具有GTP酶活性。
G蛋白在信号转导过程中起着分子开关的作用，当G蛋白α亚基与GDP结合，处于关闭态；
当胞外配体与受体结合形成复合物时，导致受体胞内结构域与α亚基偶连，并促使α亚基结合的GDP被GTP交换而被活化，即处于开启状态，从而传递信号。
DNA-chip:
DNA芯片。
指通过微阵列技术将高密度DNA片断阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面作为探针，荧光标记的样品DNA/RNA借助碱基互补作用与探针进行杂交，从而进行大量的基因表达及检测等方面的研究。
Off-targeteffect:
脱靶效应。
指的是与一个内源性基因某一位点并不完全同源的RNA亦能通过抑制翻译而导致基因表达的静默。
Supergenefamily:
超基因家族。
指一个共同的祖先基因通过各种各样的变异，产生了结构大致相同但功能却不尽相似的一大批基因，这一大批基因分属于不同的基因家族，但可以总称为一个超基因家族。
Environmentgeneticproject:
环境基因工程，指专门鉴定体积暴露在特定环境下的那些显示易感或抗性基因的DNA多态性。
Tumorvaccine:
肿瘤疫苗。
肿瘤疫苗的本质是将某一抗原组份作用于生物体，从而激发该机体对该抗原或抗原载体的免疫保护，这种抗原形式或抗原的载体形式即是疫苗。
肿瘤疫苗的形式有细胞性疫苗和可溶性抗原疫苗两大类。
细胞疫苗是将肿瘤细胞进行某些处理灭活后直接作用于机体。
可溶性抗原或多肽疫苗则是在体外通过基因工程的方法制备出已知某肿瘤的抗原成分，与不同的佐剂联合应用达到免疫激发的目的。
问答题：
1.请从“一条基因一条蛋白”到“一条蛋白一条基因”说说你对基因概念的变化的理解。
2.基因诊断的优缺点及发展前景。
3.逆转录酶在RNA病毒感染宿主及自身复制中的意义。
4.PCR与细胞内DNA复制的异同点。
（不少于5点）
5.试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。
答：
1.基因概念演变过程如下：
基因一次是1909年丹麦生物学家W.Johannsen首先使用，以代替在此之前所用的“遗传因子”这个术语。
在开始使用“基因”一词时，基因是遗传性状的符号，并未设计到基因的物质概念。
1926年Morgan发表了“基因论”，指出基因实在特定染色体上，而且是呈直线排列在染色体上的遗传颗粒，位于同源染色体的同一位置的相对基因叫做等位基因；
基因是世代相传的，基因决定了遗传性状的表达。
20世纪40年代，Bendle和Tatum用X射线照射链孢霉菌使其产生不同的突变体，发现突变可以影响代谢反应，故认为突变可致催化代谢的酶发生缺陷，因而提出了“一个基因，一个酶”的学说。
20世纪50年代初，Benzer在研究T4噬菌体的一群紧密连锁的突变群时发现了顺反效应，从而提出了“顺反子”概念。
一个顺反子即是一个基因。
但后来“顺反子”多用于指RNA分子中对应于一个结构基因的序列，现代分子生物学中所称单顺反子RNA和多顺反子RNA,即是由此而来。
20世纪60年代，遗传密码的破译使人们对基因表达的机制有了更多的了解，认识到基因是基因组中的一个区域（一段DNA序列），其转录产物是编码一条多肽链的RNA分子或者是一个有独力功能的RNA分子（tRNA或rRNA）。
20世纪90年代以来，对基因的结构与功能的研究不断深入，许多基因的核苷酸序列被测定，对基因的认识更加丰富，逐渐形成了基因的现代概念。
基因的现代分子生物学概念是：
基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，是RNA和蛋白质相关遗传信息的基本存在形式，是指贮存RNA序列信息和有功能蛋白质多肽链序列信息、以及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
大部分生物中构成基因的核苷酸物质是DNA，少数生物（如RNA病毒）中是RNA.
题中“一条基因一条蛋白”反应的是20世纪40年代“一个基因，一个酶”的学说，而“一条蛋白一条基因”反应的是基因的现代概念。
两种学说都是正确的，体现了对基因概念的理解的不断深化。
2.基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。
基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断（DNAdiagnosis）。
与传统的方法相比，基因诊断具有下列优点：
（1）应用范围广。
（2）简便、快速、经济。
（3）特异性强，敏感性高，且便于定量操作。
（4）可预先诊断。
基因诊断的应用：
（1）辅助遗传病的临床诊断
（2）遗传病患病风险分析，如出生缺陷的产前诊断，植入前遗传诊断，遗传筛选等。
（3）其他疾病易感性预测性诊断，如肿瘤或其他家族性疾病（糖尿病、高血压、肥胖和AD等多基因病）的易感性预测。
（4）疗效评价及用药指导，例如评价临床治疗急性淋巴细胞性白血病。
（5）法医学个体认定
（6）病原体诊断，包括病毒、细菌、真菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体以及寄生虫等的诊断。
3.逆转录酶的三种反应活性①RNA指导的DNA合成②RNA水解③DNA指导的DNA合成
逆转录酶的意义：
（1）用于合成cDNA，建立cDNA文库；
（2）获得基因或探针；
（3）用于RT-PCR。
4.原理相同，都是利用碱基配对互补的原则而且复制的时候都是半保留复制，都需要引物，底物都是dNTP。
不同点：
所处的反应环境不同，复制方式不同，所需酶原料不同，复制起始点不同，聚合酶不同，终止方式不同
1。
一个体内一个体外
2。
聚合酶链式反应（PCR）不会产生冈崎片断
3。
一个细胞只在有丝和减数分裂的时候进行DNA复制而PCR可以反复进行
4。
细胞中的DNA复制受到许多复杂的因子的调控
5。
两者进行的温度不同
6。
PCR产物短小，DNA复制不精确;
体内DNA复制是整体染色体的复制
4.试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。
分子生物学考题汇总
基因治疗
SiRNA
基因免疫
卫星DNA
假基因
超基因家族
环境基因组计划
基因芯片
G蛋白
基因封闭
基因敲除
脱靶效应
癌基因
抑癌基因
原癌基因
细胞癌基因
基因组
回文结构
微卫星或简单串联重复（STR）
基因组文库
感受态细胞
蓝白斑筛选试验
载体
多克隆位点
荧光原位杂交（fluorescencein-situhybridization,FISH）
基因表达
表达调控
SelfishDNAsiRNA
bluewhitescreen
knockdown
offtargeteffect
supergenefamily
gprotein
DNA-chip
enviromentgeneticproject
tumorvaccine
请从一条基因一条蛋白到一条蛋白一条基因谈谈基因概念的变化
基因诊断的优缺点及其发展前景
逆转录酶在RNA病毒感染宿主及自身复制中的意义
PCR与细胞内DNA复制的异同点（至少五条）
是从肿瘤的多基因多机制谈谈肿瘤的基因筛选
基因治疗的主要内容和三个核心
基因治疗的应用研究范围及其前景
人类基因组计划的主要内容
原癌基因激活的机理
谈谈你对癌基因和抑癌基因的理解
真核生物基因组的特点和功能
原核生物病毒基因组的特点
真核生物基因组和原核生物基因组的主要区别
卫星现象
限制性内切酶信号活性
荧光定量PCR
基因
PCR引物
基因重叠
基因诊断
质粒特性
人类基因组计划
乳糖操纵子调控机制
基因工程载体，具备的条件
DNA重组技术的基本原理
对基因治疗的认识
真核RNA聚合酶的特点
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