福建省科技计划项目Word文件下载.docx

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相对于国外而言，我国光敏剂的发展略显滞后……（省略）

福大赛因注射液

目前国内正在开发的具有独立知识产权的第二代光敏剂主要有金属酞菁、血卟啉单甲醚、竹红菌素类和二苯基卟吩（DPCOH）等。

其中，……（省略）

1.4、项目的特色与创新点：

（即化学新药“光汰净”的先进性）

首先，理想的药物应该具有单一的组成与结构，……（省略）

“光汰净”（ZnPc-5K）的化学结构

其次，……（省略）

最后，……（省略）

，原因有：

a）改变了……（省略）

b）使药物带正电荷。

……（省略）

c）聚赖……（省略）

参考文献：

1.DoughertyTJ,Kautoradiationtherapyfortreatmentofmalignant-tumors.CancerResearch,1978,38（8）:

2628～2635

2.RaduA,WagnieresG……（省略）

3.SavaryJF,MonnierP,Photodynamictherapyforearlysquamouscellcarcinomasoftheesophagus,bronchi,thm-tetra（hydroxyphenyl）chlorin.ArchOtolaryngolHeadNeckSurg,1997,123

（2）:

162～168

4.GilsonD,AshD,DriverI,etal.Therapeuticratioofphotodynamictherapyinthetreatmentofsuperficialkinandsubcutaneman.BrJCancer,1988,58（5）:

665～667

5.Moriwak……（省略）

6.RisHB,……（省略）

7.Sharman……（省略）

8KennedyJC,PottierRHlinicallyusefulphotosensitizerforphotodynamictherapochemPhotobiolB,1992,14（4）:

275～292

9.AzabM,BoyerDrNM,etal.Verteporfintherapyofsubfovealminimallyclassiscularizationinage-relatedmaculardegeneration:

2-yearresultsofarandomizedclinicaltrial.ArchOphthalmol,2005,123（4）:

448～457

二、研究开发内容及结果

2.1、“光汰净”的实验室合成及中试化生产

2.1.1、β-单羧基取代酞菁锌（β-ZnPcCOOH）的实验室合成及纯化

图（略）

β-ZnPcCOOH化学结构

β-ZnPcCOOH是……（省略）摸索出一条较为理想的实验室制备路线：

β-ZnPcCOOH实验室合成路线图

在带有回流装置和搅拌子的

取15.00g上述所制备的β-单……（省略）

酰胺取代酞菁锌于250ml的三颈瓶中，……（省略）

2.1.2、“光汰净”（即ZnPc-5K）的实验室合成及纯化

“光汰净”（即ZnPc-5K）的化学结构

“光汰净”的合成我们……（省略）

，其制备方法如下图所示：

“光汰净”实验室合成路线图

取β-单羧基取代酞菁锌（β-ZnPcCOOH）0.05mmol，……（省略）

依利特P230高效液相分析半制备系统

ZnPc-5K的纯化……（省略）

，半制备方法及最终得到的样品纯度分析如下所示：

表1：

半制备梯度洗脱方法

时间（min）

流速（ml/min）

流动相A（水，含1‰TFA）百分比

流动相B（甲醇：

乙腈=1：

1，含1‰TFA）百分比

检测波长（nm）

经过半制备纯化后的样品HPLC分析谱图

2.1.3、“光汰净”（即ZnPc-5K）的中试生产路线

“光汰净”的产业化生……（省略）

Wang树脂的制备。

福建省功能材料工程研究中心中试生产线（坐落于福建省龙华药业）

β-ZnPcCOOH中间产品的制备工艺已获得专利授权（相关证明请查阅附件），……（省略）

（1）五聚赖氨酸Wang树脂的制备，根据下一步的合成要求，我们通过自主设计并委托上海吉尔生化有限公司进行生产，第一批产量50g。

为了保证“光汰净”的质量，我们在完成了……（省略）

（2）最后的偶联合成及分离纯化，

中试生产工艺流程图

生产过程实景图

2.2、“光汰净”的结构表征及杂质鉴定

2.2.1、结构表征-紫外可见光谱：

“光汰净”在DMF溶剂中的紫外最大吸收峰在678nm

“光汰净”在DMF中的紫外-可见吸收光谱图

2.2.2、结构表征-红外光谱：

分析“光汰净”的红外光谱图显示：

………….（省略）

“光汰净”的红外光谱图

2.2.3、结构表征-质谱

“光汰净”理论上分子量[M]为1262.8，该化合物的质谱图显示该化合物m/z1263.6的峰为[M+H]+，m/z632.1的峰为[M+2H]2+。

“光汰净”的质谱图

2.2.4、结构表征-1H核磁共振

“光汰净”的质子核磁共振谱图的分类归属所示………….（省略）

“光汰净”的1H核磁共振谱图及其指认

2.2.5、制备过程中的杂质鉴定

为了确定制备过程中，到底产生了那些主要杂质及副产物。

我们对。

。

进行了液质联用分析，从图中发现。

经过分析及检验，我们判断。

知道了主要杂质成分，使得我们制备分离的目标变得更加明确简单。

“光汰净”粗产品的HPLC分析图

主峰的质谱分析图

次峰的质谱分析图

2.3、“光汰净”的体外光动力药效学研究

2.3.1、细胞摄取光敏剂含量的测定：

……….（省略）

（1）以……….（省略）

（2）收集对数期细胞，……….（省略）

（3）37℃、5%CO2条件下孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），……….（省略）

（4）置37℃，5%CO2恒温箱中孵育2小时后，……….（省略）

（5）细胞所摄取光敏剂的含量测定……….（省略）

（6）细胞消化液总蛋白含量的测定：

根据lowry蛋白测定法，在96孔……….（省略）

（7）同上法测定细胞提取……….（省略）

（8）根据上述……….（省略）

ZnPc-5K与ZnPc-S4对不同细胞的摄取比较（ZnPc-CO-（Lys）5代表ZnPc-5K）

2.3.2、亚细胞定位测定：

的步骤如下：

（1）收集……….（省略）

（2）弃去培养液，……….（省略）

（3）孵育……….（省略）

（4）利用激光扫描共聚焦显微镜……….（省略）

（5）亚细胞定位测定结果表……….（省略）

ZnPc-5K与ZnPc-S4的亚细胞定位（ZnPc-CO-（Lys）5代表ZnPc-5K）

2.3.3、体外抗肿瘤光动力学：

展“光汰净”的体外光动力学实验研究。

实验步骤如下：

（2）其中六组细胞……….（省略）

（3）共同……….（省略）

（4）在37℃、5%CO2的条件下培养……….（省略）

（5）加入100µ

l含10%SDS的0.01NHCl溶液终止反应后，……….（省略）

（6）确定光敏药物在特定条件下对特定细胞的半数抑制量。

……….（省略）（7）ZnPc-5K与ZnPc-S4对不同细胞……….（省略）

ZnPc-5K与ZnPc-S4的体外光动力学研究（ZnPc-（Lys）5代表ZnPc-5K）

2.4、“光汰净”的体内光动力学研究

2.4.1、小鼠S180肉瘤模型的建立及光动力抗肿瘤活性：

具体操作步骤如下：

（a）将……….（省略）

（b）用无菌生理盐水……….（省略）

（3）给药12小时后，……….（省略）

（4）10天后，……….（省略）

（5）实验结果显示：

ZnPc-5K对S180肉瘤的生长抑制作用

2.4.2、小鼠肝癌H22肿瘤模型的建立及光动力抗肿瘤活性：

……….（省略）具体操作步骤如下：

（a）选择……….（省略）。

（b）接种后四天，……….（省略）

“光汰净”（ZnPc-5K）小鼠体内抗H22肝癌肿瘤光动力学实验步骤：

（1）接种后……….（省略）

（2）实验……….（省略）

（3）实验结果显示：

ZnPc-5K对小鼠肝癌肿瘤H22的生长抑制作用

2.4、“光汰净”的代谢动力学研究：

…….（省略）

在建立荷瘤小鼠模型的基础上

具体步骤如下：

（1）…….（省略）

（2）…….（省略）

（3）…….（省略）

（4）…….（省略）

（5）…….（省略）

ZnPc-5K在S180荷瘤小鼠的血药浓度曲线

ZnPc-5K在S180荷瘤小鼠各组织脏器的分布