化妆品中7种染发剂的检测方法起草说明及编制说明.docx
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化妆品中7种染发剂的检测方法起草说明及编制说明
附件7:
化妆品中7种染发剂的检测方法
(征求意见稿)
1适用范围
本方法规定了化妆品中酸性紫43(CAS:
224-618-7,CI42510);碱性紫14(CAS:
632-99-5,CI42510);酸性橙3(CAS:
228-921-5);碱性黄87(CAS:
116844-55-4);碱性蓝26(CAS:
2580-56-5,CI44045);碱性红51(CAS:
12270-25-6);碱性橙31(CAS:
97404-02-9)7种染发剂含量的高效液相色谱测定方法。
本方法适用于染发类和烫发类化妆品中碱性红51、碱性紫14、酸性紫43、碱性蓝26、碱性橙31、酸性橙3、碱性黄87等7种染发剂含量的测定。
2方法提要
试样经甲醇超声提取后,过0.45μm滤膜,采用高效液相色谱系统分离,紫外检测器或二极管阵列检测器进行检测,外标法定量。
若取5.0g样品,本方法对碱性红51、碱性紫14的检出限为0.06mg/kg;酸性紫43、碱性蓝26的检出限为0.6mg/kg;碱性橙31、酸性橙3的检出限为1.2mg/kg;碱性黄87的检出限为3.0mg/kg;最低定量浓度分别为:
碱性红51、碱性紫14:
0.2mg/kg、酸性紫43、碱性蓝26为2.0mg/kg;碱性橙31、酸性橙3为3.5mg/kg;碱性黄87为10mg/kg。
3试剂和材料
除另有规定外,所用试剂均为色谱纯,水为一级水。
3.1甲醇。
3.2四氢呋喃。
3.3乙酸铵:
分析纯。
3.4乙酸铵溶液(0.02mol/L):
称取1.54g乙酸铵(3.3),加水至1000mL,溶解,经0.45μm滤膜过滤。
3.5染发剂标准物质:
酸性紫43(AcidViolet43,CAS:
224-618-7,CI42510);碱性紫14(BasicViolet14,CAS:
632-99-5,CI42510);酸性橙3(AcidOrange3,CAS:
228-921-5);碱性黄87(Basicyellow87,CAS:
116844-55-4);碱性蓝26(BasicBlue26,CAS:
2580-56-5,CI44045);碱性红51(Basicred51,CAS:
12270-25-6);碱性橙31(Basicorange31,CAS:
97404-02-9);纯度均≥90%。
3.6染发剂混合标准储备液(1.0mg/mL):
分别称取7种染发剂标准物质(3.5)0.1g(精确至0.1mg)于100mL容量瓶中,甲醇(3.1)稀释定容。
3.7染发剂混合标准系列溶液:
分别移取一定量的2种染发剂(酸性紫43;碱性紫14)标准储备液(3.6),用甲醇配制成浓度为5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/mL的标准系列溶液;分别移取一定量的5种染发剂(酸性橙3;碱性黄87;碱性蓝26;碱性红51;碱性橙31)标准储备液(3.6),用甲醇配制成浓度为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/mL的标准系列溶液。
4仪器与设备
4.1高效液相色谱仪:
配紫外检测器或二极管阵列检测器。
4.2分析天平:
感量分别为0.1mg和1.0mg。
4.3超声波清洗器。
4.4涡旋混匀器。
4.5有机微孔滤膜:
0.45μm。
5分析步骤
5.1样品预处理
准确称取试样5.0g(精确至1mg)于25ml比色管中,加入1.0ml四氢呋喃(3.2),再加入20ml甲醇(3.1),涡旋振荡2min,在超声提取30min后,放置至室温,用甲醇(3.1)定容,摇匀,过0.45μm滤膜,待测。
5.2色谱参考条件
色谱柱:
C18柱,250mm×4.6mm(内径),5μm;或相当者。
流动相:
A相(甲醇)+B相(0.02mol/L乙酸铵(pH=4.0)),梯度洗脱程序见表1。
流速:
1.0mL/min
柱温:
30℃
进样量:
10μL
检测器:
紫外检测器或二极管阵列检测器
检测波长:
碱性蓝26为616nm;碱性红51、碱性紫14、酸性紫43为520nm;碱性橙31、碱性黄87、酸性橙3为480nm。
表1梯度洗脱程序
时间,min
流动相A(%)
流动相B(%)
0
5
95
10
30
70
25
80
20
35
80
20
5.3测定
本方法采用外标校准曲线法定量测定。
以系列标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,作标准曲线线性回归方程,以试样的峰面积与标准曲线比较定量。
6计算
试样中染发剂的含量(μg/g),按式
(1)计算:
…………………….……………
(1)
式中:
w—试样中染发剂的含量,μg/g;
C—试样溶液中染发剂的含量,μg/mL;
V—提取溶液体积,mL;
m—样品质量,g。
7回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为85.2%~109.2%,相对标准偏差小于6%(n=6)。
8色谱图
图1在616nm下测得碱性蓝26标准高效液相色谱图
碱性蓝26标准出峰时间为30.389min
图2在520nm下测得碱性红51、碱性紫14、酸性紫43标准高效液相色谱图
标准出峰时间:
碱性红51为22.383min;碱性紫14为25.654min;酸性紫43为30.269min
图3在480nm下测得碱性橙31、碱性黄87、酸性橙3标准高效液相色谱图
标准出峰时间:
酸性橙31为13.186min;碱性黄87为22.101min;酸性橙3为29.437min
__________________________________
化妆品中7种染发剂的检测方法起草说明
为更好地服务化妆品安全监管,规范化妆品中禁限用物质检测技术要求,确保化妆品质量安全,2011年6月,国家食品药品监督管理局委托河北省保健食品化妆品协会开展《化妆品中7种染发剂的测定高效液相色谱法》方法建立和验证工作,现就起草工作有关情况说明如下:
一、起草的必要性
染发剂类化合物主要作用是增加化妆品的色泽,在染发剂等各类化妆品中最常使用的一类物质。
根据《化妆品卫生规范》2007版,染发剂属于限用物质或暂时允许使用染发剂目录,具体限量水平参见规范。
根据国内外报道,为了提升产品感官性能,部分企业超量使用染发剂,存在较大风险。
但是,当前仅有苯二胺等染发剂组分的检测技术要求,与现实生产实际使用种类相差较多,也不能涵盖当前现实使用的在规范目录以外的品种,成为行政监管的瓶颈问题,本技术要求的开发具有紧迫性和现实意义。
为此,需要建立有一种快速有效地检测化妆品中多种染发剂的方法。
本标准的制定宗旨在为化妆品中7种染发剂的测定提供更为准确的实验方法,有力的支撑未来市场化妆品的监管,同时也能够体现我国化妆品检测的水平和对化妆品监管的力度。
二、起草依据及文献
(一)《化妆品卫生规范》2007版.
(二)化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范.
(三)ThecosmeticDirectiveofCouncilEuropeanCommunities,76/768/EEC.
(四)《中国药典》2010版,第二部.
(五)李英、张琛.粉状化妆品中9种有机染发剂的高效液相色谱法测定,香精香料化妆品,2009,12(6):
29-33.
(六)孙小颖、李英.高效液相色谱法同时测定化妆品中的9种水溶性染发剂,色谱,2009,27(6):
852-855.
(七)郭桂媛、林维宣.高效液相色谱法同时测定化妆品中的4种禁用染发剂,日用化学工业,2011,41(3):
229-231.
(八)RastogISC,BaiwickVJ.IdentificationoforganiccolorantsincosmeticsbyHPLC-Diodearraydetection.Chromatographic,1997,(45):
215-228.
三、起草原则
本检测方法兼具先进性、准确性以及可操作性强的特点,采用目前一般检测实验室普遍具备的分析技术,选择适宜、可行、便于实际操作的分析条件,保证检测方法的精确性和重现性。
四、起草过程
依据国家食品药品监督管理局检验方法起草的有关要求,参考国家标准起草规范,该方法起草共分六个阶段:
1、任务下达。
2011年6月,正式获批开展《化妆品中7种染发剂的测定高效液相色谱法》方法建立和验证工作,项目组查阅了国内外相关技术标准和文献资料,调研了国内主要省区的行业情况;2、方法开发。
2012年5月,完成了该方法的建立工作;3、专家论证。
2012年6月,邀请食品、化妆品、质监等相关行业专家,对方法的可行性和实用性等技术指标以及资料完整性等进行了论证,专家一致认为该方法准确、简捷、可行,适用于作为标准化的检验方法;4、方法验证。
2012年7月,组织了方法验证单位(河北省药包材所、河北省疾控中心、河北出入境检验检疫局技术中心)的相关负责人和行业专家,召开了验证研讨会,介绍了检测方法建立过程、详细阐述了该方法的使用范围、原理、试剂材料、仪器设备、测定步骤等内容,并当场交接了验证技术资料、验证用标准品和样品。
三家验证单位按照签订的验证协议书要求,于8月底陆续将验证材料报送,将多家实验室方法验证材料进行总结和分析;5、审定会。
2010年9月向国家食药监局上报全部项目材料,召开项目审定会,论证该方法的技术指标和文本材料等;6、修改报批。
根据审定会专家意见,对材料进一步补测完善,形成最终报批稿材料上报国家食药监局。
五、重点说明的问题
(一)关于体例。
本检测方法的体例主要参照现行2007版《化妆品卫生规范》的卫生化学检验方法的体例,便于化妆品检验领域相关检验人员的阅读和实际操作。
(二)关于7种染发剂。
见附页。
(三)关于检测方法的建立和验证。
经过对化妆品中7种染发剂样品前处理方法的选择,分析条件的优化,最终建立了化妆品中7种染发剂的液相色谱检测方法。
图1在616nm下测得碱性蓝26标准高效液相色谱图
图2在520nm下测得碱性红51、碱性紫14、酸性紫43标准高效液相色谱图
图3在480nm下测得碱性橙31、碱性黄87、酸性橙3标准高效液相色谱图
表17种染发剂的出峰时间表
染发剂名称
碱性红51
碱性紫14
酸性紫43
碱性橙31
碱性黄87
碱性橙3
碱性蓝26
出峰时间(min)
22.383
25.654
30.269
13.186
22.101
29.437
30.389
方法验证表明,本方法中各种染发剂在一定线性范围内均有较好的线性相关系数(>0.999),具体见表2,7种染发剂的方法检出限见表3,在5.0mg/kg,50.0mg/kg两个添加水平时,提取回收率在85.5~104.3%之间,方法回收在84.2~99.5%之间。
日内精密度在0.83~4.33%之间(n=6),日间精密度在1.78~5.39%之间(n=3);日内(24h)和日间(5天)稳定性符合要求。
上述结果证实,本方法可以满足化妆品中7种染发剂的检测要求,并最终确定采用外标法计算样本中7种染发剂的含量。
三家实验室验证结果表明,回收率、精密度、标准曲线均符合要求,证实所建立方法可作为化妆品中7种染发剂的检测方法.
表2标准溶液标准曲线和线性范围
目标物质
线性范围
线性方程
线性相关系数
碱性蓝26
5~100mg/L
Y=26000X-3500
R=0.9998
酸性橙3
5~100mg/L
Y=1240X+304
R=0.9989
碱性黄87
5~100mg/L
Y=1030X+208
R=0.9982
碱性橙31
5~100mg/L
Y=18400X-1920
R=0.9998
酸性紫43
5~50mg/L
Y=2890X-938
R=0.9998
碱性紫14
5~50mg/L
Y=23900X-14500
R=0.9999
碱性红51
5~100mg/L
Y=21000X-7080
R=0.9999
表37种染发剂的检出限和定量限
染发剂名称
碱性红51
碱性紫14
酸性紫43
碱性橙31
碱性黄87
酸性橙3
碱性蓝26
检出限(mg/kg)
0.06
0.06
0.6
1.2
3.0
1.2
0.6
定量限(mg/kg)
0.2
0.2
2.0
3.5
10
3.5
2.0
六、专家意见与反馈(会议时间:
2012年9月)
根据国家食品药品监督管理局保化司(以下称保化司)有关化妆品中禁限用物质检测方法委托工作的要求,河北省保健食品化妆品协会组织完成了化妆品中马来酸二乙酯、环氧乙烷、环氧丙烷、17种着色剂的检测方法研究。
并于2012年9月20日,就上述检测方法,组织召开专家论证会。
与会专家认真听取了项目承担单位关于检测方法、编制说明、验证报告的汇报,审阅了检测方法,并进行了讨论,一致认为:
一、河北省保健食品化妆品协会建立的化妆品中马来酸二乙酯、环氧乙烷、环氧丙烷、17种着色剂的检测方法,基本满足现阶段化妆品中上述禁限用物质的检测要求。
二、检测方法的书写较规范、内容较全面。
与会专家对上述检测方法分别提出了具体修改建议。
建议项目承担单位按照本次会议意见,对化妆品中马来酸二乙酯、环氧乙烷、环氧丙烷、17种着色剂的检测方法,进行修改完善后报国家食品药品监督管理局保化司。
七、国家食药监局保化司组织专家论证会(2012年11月16日)
专家建议进一步补充完善后,提交国家食药监局保化司。
化妆品中7种染发剂的检测方法编制说明
第一部分基本信息
1简介
染发剂由于其功能性的作用,被广泛的应用于化妆品尤其是染发剂和烫发剂。
化妆品中使用的染发剂多数是化学合成,长期或过量使用都会对人体健康产生潜在的危害,有的染发剂会引起人的过敏反应,有的染发剂会引起皮肤发炎,还有的会透过皮肤被人体吸收,有明显的致突变作用,长期使用此类产品甚至可以诱发癌症。
为了安全起见,世界上很多国家对化妆品用染发剂做了法律性规定。
我国《化妆品卫生规范》中对化妆品用染发剂品种、使用范围和限制条件也都作了明确的规定。
目前对化妆品中常用染发剂的检测尚未形成完整和成熟的方法,非常不利于对化妆品市场的监管和管理。
本项旨在借助高效液相色谱法,建立化妆品中可能添加的染发剂类物质的检测方法。
同时为了保障化妆品质量安全,也为了化妆品中禁用物质行政监管和企业自检控制提供技术依据,特制定该批标准。
2属性信息
2.1碱性橙31
2.1.1中文名:
碱性橙31
2.1.2英文名称:
BASICORANGE31
2.1.3INCI名称:
BASICORANGE31
2.1.4分子式:
C11H14ClN5
2.1.5分子量:
251.71536
2.1.6CAS号:
97404-02-9
2.1.7结构式:
2.1.8限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品染发剂中最大允许使用浓度0.2%。
当与氧化乳混合使用时,最大使用浓度应为0.1%。
2.2碱性黄87
2.2.1中文名:
碱性黄87
2.2.2英文名称:
BasicYellow87
2.2.3INCI名称:
Basicyellow87
2.2.4分子式:
C15H19N3O4S
2.2.5分子量:
337.39406
2.2.6CAS号:
116844-55-4
2.2.7结构式:
2.2.8限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品中最大允许使用浓度:
0.2%。
当与氧化乳混合使用时,最大使用浓度应为0.1%。
2.3碱性红51
2.3.1中文名:
碱性红51
2.3.2英文名称:
BASICRED51;
2.3.3INCI名称:
Basicred51
2.3.4分子式:
C14H18CIN5
2.3.5分子量:
279.77
2.3.6CAS号:
12270-25-6
2.3.7结构式:
2.3.8限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品中最大允许使用浓度:
0.2%。
当与氧化乳混合使用时,最大使用浓度应为0.1%。
2.4碱性紫14
2.4.1中文名:
碱性紫14,碱性品红
2.4.2英文名称:
FUCHSINBASIC
2.4.3INCI名称:
BasicViolet14
2.4.4分子式:
C20H20ClN3
2.4.5分子量:
337.85
2.4.6CAS号:
632-99-5
2.4.7CI号:
CI42510
2.4.8结构式:
2.4.9限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品中最大允许使用浓度:
0.3%。
当与氧化乳混合使用时,最大使用浓度应为0.15%。
2.4.10理化特性
黄绿色闪光结晶块状或砂状物。
溶于冷、热水中呈红紫色,极易溶于酒精中呈红色。
遇浓硫酸呈黄棕色,稀释后几乎无色。
其水溶液加氢氧化钠液呈带有红色沉淀的几乎无色液体。
2.5酸性紫43
2.5.1中文名:
酸性紫43
2.5.2英文名称:
JAROCOLVIOLET43
2.5.3INCI名称:
AcidViolet43
2.5.4分子式:
C21H14NNaO6S
2.5.5分子量:
431.39
2.5.6CAS号:
224-618-7
2.5.7CI号:
CI60730
2.5.8结构式:
2.5.9限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品中最大允许使用浓度:
1.0%。
当所用染发剂纯度不得<80%,其杂质含量必须符合以下要求:
挥发性成分(135℃)及氯化物和硫酸盐(以钠盐计)小于18%,水不溶物不得小于0.4%,1-羟基-9,10-蒽二酮(1-hydroxy-9,10-anthracenedione)小于0.2%,p-甲苯胺(p-toluidine)小于0.1%,p-甲苯胺磺酸钠(p-tolluidinesulfonicacids,sodiumsalts)小于0.2%,其它染发剂(subsidiarycolors)小于1%,铅小于20mg/kg,砷小于3mg/kg,汞小于1mg/kg。
2.5.10理化特性
溶于乙醇。
于浓硫酸中呈蓝色,稀释后呈橄榄棕色,并伴有紫色沉淀产生。
2.6酸性橙3
2.6.1中文名:
酸性橙3
2.6.2英文名称:
ACIDORANGE3
2.6.3INCI名称:
AcidOrange3
2.6.4分子式:
C18H13N4NaO7S
2.6.5分子量:
452.37319
2.6.6CAS号:
228-921-5
2.6.7结构式:
2.6.8限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定在化妆品中最大允许使用量:
0.2%。
2.6.9理化特性
橙黄色粉末。
极易溶于冷水和热水中,在水中溶解度为50g/L(90℃),水溶液呈黄色。
易溶于乙醇,呈橙棕色。
于浓硫酸中呈黄色,稀释后转呈暗黄色,有沉淀产生。
2.7碱性蓝26
2.7.1中文名:
碱性蓝26
2.7.2英文名称:
BasicBlue26
2.7.3INCI名称:
BasicBlue26
2.7.4分子式:
C33H32ClN3
2.7.5分子量:
506.09
2.7.6CAS号:
2580-56-5
2.7.7CI号:
CI44045
2.7.8结构式:
2.7.9限定标准
《化妆品卫生规范》2007年版规定化妆品中最大允许使用浓度:
0.5%。
当与氧化乳混合使用时,最大使用浓度应为0.25%。
。
2.7.10理化特性
深紫色(或灰绿色闪光)粉末。
溶于冷水、热水均呈蓝色。
溶于乙醇呈蓝色。
于浓硫酸中呈红光棕色,稀释后由黄变绿再变为蓝色。
于浓硝酸中呈橄榄绿色。
其水溶液加入氢氧化钠产生暗红棕色沉淀;加入盐酸产生蓝色沉淀。
第二部分方法选择与优化
1分析方法及其条件的选择与优化
1.1分析方法的选择
根据文献报道化妆品中染发剂适用于高效液相色谱分离与检测。
2007版《化妆品卫生规范》中只是规定了“化妆品组分中暂时允许使用的染发剂”的种类,并未对其方法进行限定。
目前国内外的检测方法有高效液相色谱-紫外可见检测法、高效液相色谱-串联质谱法及高效液相色谱-二极管阵列检测法等,本方法参考文献中有关染发剂含量的检测方法,确定了采用高效液相色谱-二极管阵列检测法。
1.2前处理优化实验
1.2.2提取溶剂选择
对于样品采用超声方式对样品进行提取,分别考察了乙醇、甲醇、乙腈、异丙醇-水(1:
1)以及四氢呋喃-水(1:
1)等多种提取溶剂对含有染发剂的加标样品测定结果的影响。
结果表明,甲醇和四氢呋喃-水(体积比为1:
1)体系的提取效率相当。
考虑到四氢呋喃毒性较大,最终选择甲醇为最佳提取溶剂。
表1试样提取回收率实验结果汇总表
提取溶剂
添加浓度/mg/kg
回收率范围/%
RSD范围//%
乙醇
20.0
82.9~93.8
0.68~2.47
甲醇
20.0
92.1~99.2
1.52~3.81
乙腈
20.0
78.9~94.2
2.34~5.41
异丙醇-水(1:
1)
20.0
74.8~89.8
3.68~4.47
四氢呋喃-水(1:
1)
20.0
91.3~102.2
2.53~3.395
1.2.1超声时间的优化
选择不同的提取时间(5,10,15,20,30,45,60min)进行实验。
结果表明,30min就可将样品中的染发剂类化合物提取完全,见图1。
图1不同提取时间的影响
1.3.1四氢呋喃的加入量
考虑到色淀的提取复杂性,加入一定量的四氢呋喃,促进提取的回收率。
四氢呋喃加入量分别为0.5、1.0、1.5、2.0,以碱性黄色淀为目标物,加入1.0ml四氢呋喃时,使用本方法测定其含量达到标称含量。
1.2定量方法的建立
1.2.1液相色谱条件的建立
甲醇是液相色谱常用的溶剂。
我们通过对不同浓度的甲醇,0.02mol/L乙酸胺溶液进行对比实验,最终确定实验方案,结果表明甲醇(A)+0.02mol/L乙酸铵(B)梯度洗脱(见表1)时可以较好的分离目标物。
通常为保护色谱柱填料,选用流速为1.0mL/min。
由于在该条件下,随柱温升高,会影响定性和定量准确度,故选用常温(25℃)作为色谱温度较为合适。
表2梯度洗脱程序
时间,min
流动相A(%)
流动相B(%)
0
5
95
10
30
70
25
80
20
35
80
20
1.2.2色谱柱的选择
实验比较了C18柱、C8柱和苯基柱对7种染发剂的分离效果及峰形,结果表明使用C18目标峰形尖锐,而且目标物与杂质能够完全分离,排除了基质的干扰。
1.2.3柱温的选择
实验比较了柱温在20℃、30℃、40℃、50℃下对目标物保留时间和色谱峰形的影响,结果表明在不同柱温下色谱峰形及保留时间无明显变化,因此选择常温的30℃为分析温度。
1.2.4检测波长的确定
1.2.4.1紫外检测器波长
在616nm下测得碱性蓝26;在520nm下测得碱性红51、碱性紫14、酸性紫43;在480nm下测得碱性橙31、碱性黄87、酸性橙3。
1.2.4.2最大吸收波长