实验七土壤无机磷的测定_精品文档.doc
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实验七：
土壤无机磷的测定
一、实验方法及目的
采用SMT法测定土壤无机磷；掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。
二、实验原理
1）样品的前处理：
用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。
2）提取液中正磷酸盐的测定：
在酸性条件下，试液中的P（正磷酸盐）与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸（又叫磷钼酸杂聚配合物）。
H3PO4+12H2MoO4=H3P（Mo3O10）4+12H2O
P多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo被还原，产生特殊兰色（钼兰），其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+，或Mo3+、Mo5+都有。
在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰（660nm或880nm）。
测定时可以根据分光光度计的性能选用。
我国国标采用700nm波长。
三、实验仪器与药品
1仪器：
多用调速振荡器，离心机，分光光度计。
2试剂：
1）1mol•L-1HCl溶液：
准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L；
2）（1+1）硫酸溶液
3）磷标准贮备液（50.0μg.mL-1）：
称取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾（KH2PO4），用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。
1.00mL此标准溶液含50.0μg磷。
4）抗坏血酸（10%）：
溶解10g抗坏血酸（C6H8O6）于水中，并稀释至100mL。
此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。
如不变色可长时间使用。
5）钼酸盐溶液：
溶解13g钼酸铵[（NH4）6Mo7O24•4H2O]于100mL水中。
溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7•½H2O]于100mL水中。
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸（1+1）中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。
此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。
6）过100目筛土样0.2g。
四、实验步骤
1）土壤干样前处理：
称取0.2g土壤样品于50ml离心管中，加入1mol•L-1HCl溶液20mL，塞紧塞子。
在多用调速振荡器上振荡30mim，取出在离心机上以3000r/min的转速离心10mim，得到上清液。
如果不能在24h内进行，将上清液储存在冰箱中备用。
2）标准曲线的绘制：
A磷标准使用溶液的配制（含磷2.0μg/mL）：
将10.0mL的磷标准溶液（磷标准贮备溶液：
含磷50.0μg/mL）转移至250mL容量瓶中，用水稀释至标线并混匀。
B取数支25mI具塞比色管，分别加入磷酸盐标准使用液0、0.5（1μg）、1.00、3.00、5.00、10.0、15.0ml，加水至25mL
C显色：
向比色管中加入0.5mL10%抗坏血酸溶液，混匀。
30s后加1mL钼酸盐溶液充分份昆匀，放置l5min。
D测量：
用10mm比色皿，于700nm波长处，以零浓度溶液为参比，测量吸光度，以其测定的吸光值为纵坐标，相应磷浓度为横坐标，绘制标准曲线。
磷标准溶液吸光度值
磷浓度（mg/L）
0
0.04
0.08
0.24
0.4
0.8
1.2
吸光度
0
0.008
0.016
0.056
0.097
0.194
0.294
3）样品测定
取上清液2ml（使含磷量不超过30μg）加入25mL比色管中，用水稀释至标线。
以下按绘制校准曲线的步骤进行显色和测量。
减去空白试验的吸光度，并从校准曲线上查出含磷量。
五、实验结果
土壤中无机磷含量（g·kg-1）=C×0.025×（20/V）/m式中：
C——上清液正磷酸盐浓度；V——取上清液体积（ml）；m——土壤质量（g）
结果记录表
样品编号
平行测定次数
1
2
3
空白
称样重（g）
吸光度
无机磷含量（g/kg）
平均值（g/kg）
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