1、实验七:土壤无机磷的测定一、 实验方法及目的采用SMT法测定土壤无机磷;掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。二、 实验原理1)样品的前处理:用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。2)提取液中正磷酸盐的测定:在酸性条件下,试液中的P(正磷酸盐)与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸(又叫磷钼酸杂聚配合物)。 H3PO4 + 12H2MoO4 = H3P(Mo3O10)4 + 12H2O P多时呈黄色,少时无色在一定酸度下,加入还原剂后,杂多酸中的Mo被还原,产生特殊兰色(钼兰),其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+,或Mo3+、Mo5+都有。在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(
2、660nm或880nm)。测定时可以根据分光光度计的性能选用。我国国标采用700nm波长。三、 实验仪器与药品1仪器:多用调速振荡器,离心机,分光光度计。2试剂:1)1molL-1HCl溶液:准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L;2)(1+1)硫酸溶液3)磷标准贮备液(50.0 g.mL-1):称取0.21970.001g于110干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KH2PO4),用水溶解后转移至1000mL容量瓶中,加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。1.00mL此标准溶液含50.0 g磷。4)抗坏血酸(10%):溶解10g抗坏血酸(C6H8O6)于水中,并稀
3、释至100mL。此溶液贮于棕色的试剂瓶中,在冷处可稳定几周。如不变色可长时间使用。5)钼酸盐溶液:溶解13g钼酸铵(NH4)6Mo7O244H2O于100mL水中。溶解0.35g酒石酸锑钾KSbC4H4O7H2O于100mL水中。在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸(1+1)中,加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。此溶液贮存于棕色试剂瓶中,在冷处可保存二个月。6)过100目筛土样0.2g。四、实验步骤1)土壤干样前处理:称取0.2g土壤样品于50ml离心管中,加入1molL-1HCl溶液20mL,塞紧塞子。在多用调速振荡器上振荡30mim,取出在离心机上以3000r/min的转速离心10m
4、im,得到上清液。如果不能在24h内进行,将上清液储存在冰箱中备用。2)标准曲线的绘制:A磷标准使用溶液的配制(含磷2.0g/mL):将10.0mL的磷标准溶液(磷标准贮备溶液:含磷50.0g/mL)转移至250mL容量瓶中,用水稀释至标线并混匀。 B取数支25mI具塞比色管,分别加入磷酸盐标准使用液0、0.5(1g)、1.00、3.00、5.00、10.0、15.0ml,加水至25mLC 显色:向比色管中加入0.5mL10%抗坏血酸溶液,混匀。30s后加1mL钼酸盐溶液充分份昆匀,放置l5min。D 测量:用10mm比色皿,于700nm波长处,以零浓度溶液为参比,测量吸光度,以其测定的吸光值
5、为纵坐标,相应磷浓度为横坐标,绘制标准曲线。磷标准溶液吸光度值磷浓度(mg/L)00.040.080.240.40.81.2吸光度00.0080.0160.0560.0970.1940.2943)样品测定取上清液2ml(使含磷量不超过30g)加入25mL比色管中,用水稀释至标线。以下按绘制校准曲线的步骤进行显色和测量。减去空白试验的吸光度,并从校准曲线上查出含磷量。五、实验结果土壤中无机磷含量(gkg-1)=C0.025(20/V)/m 式中:C上清液正磷酸盐浓度;V取上清液体积(ml);m土壤质量(g)结果记录表样品编号平行测定次数123空白称样重(g)吸光度无机磷含量(g/kg)平均值(g/kg)