Millipore超滤管保养方法_精品文档.doc

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超滤管保养和使用方法

超滤管的作用：

1）浓缩；2）脱盐；3）换Buffer；4）具有部分纯化的效果。

1、新的超滤管可以直接使用，不需要其他处理；

2、超滤管不能高温灭菌；

3、换浓缩蛋白时超滤管的处理

超滤管可以重复使用，用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，再在离心机上用相关溶液（灭菌水或PBS）清洗3次，即可用于浓缩新的蛋白；

4、平常放置超滤管的处理

经常使用的超滤管，在用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，用灭菌水浸泡，务必保持滤膜润湿，不能长菌；

5、长时间放置超滤管的处理

较长时间不使用的超滤管，在用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，用20％的乙醇浸泡保存，务必保持滤膜润湿，不能长菌；

6、超滤管使用的离心转速

离心转速一般采用4000rpm（一般建议为3000g，最大不能超过4000g）离心5－8分钟，即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升；速度过高，目的蛋白会离下，导致目的蛋白丢失；速度过低，耗时，工效低；

7、枪头伸入超滤管中时注意事项

加蛋白液或Buffer到超滤管时，可以用蓝枪头；但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入超滤管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜；

8、减少超滤管对蛋白的吸附损失

超滤管的滤膜能吸附蛋白，会导致目的蛋白减少可达30％左右；为减少蛋白损失，在吸尽目的蛋白液后，再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底，可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失；如纯化的蛋白较浓时，注意浓缩的体积不可过小；一般无论如何离心，底部会保留有200µl左右的蛋白液；

9、如何界定超滤管失效

在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低（包括目的蛋白），而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的超滤管。

不同MWCO的离心转速要求不同。

当然转速越大，时间越长，透过就越多。

而且速度也和料液性质有关，一般只能根据你的蛋白溶液进行试验，看flux是多少，而且随着透过体积增加，flux会逐渐降低。

以使其达到想要的浓缩倍数。

sartorius的离心管保证有最小体积不会滤干，具体要看不同的厂家。

离心条件说明书上应该有推荐值，一般至少要3000g以上，注意控制过程中的温度以保证蛋白活性。

可以反复用几次，次数多了就不行了，管和膜都可能会破。

不用的时候，20%EtOH保存以免长菌。

我用的是millpore的超滤离心管

要求的分之量10k的，体积15ml

要求的转速低于4000g

不过这个很容易破

基本上是一次性的

另外注意不要让膜干了