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牛奶中三聚氰胺的含量测定最全word资料
牛奶中三聚氰胺的含量测定
一．样品分子结构
中文名
英文名
分子结构
三聚氰胺
Melamine
二.样品来源记录
样品商品名：
样品测定描述：
主成分含量测定
生产厂家：
三.液相方法条件
方法来源：
自主开发；
具体方法：
色谱柱：
AQ-C18，5um，4.6×250mm
流动相：
10mmol/L辛烷磺酸钠和20mmol/L磷酸氢二铵（用磷酸调节pH＝3.3）：
乙腈＝90：
10；
检测波长：
236nm；
温度：
室温29度；
流速：
1.0ml/min；
进样量：
20ul；
流动相的配制：
准确称取10mmol的辛烷磺酸钠和20mmol的磷酸氢二铵溶于1000ml水中，用磷酸调节pH至3.3准确量取该溶液450ml与50ml乙腈混合均匀，超声脱气；
样品处理方法：
标准品处理：
准确称量250mg三聚氰胺标准品加入250ml容量瓶中，用一定量的水：
乙腈＝50：
50超声溶解，然后用水：
乙腈＝50：
50溶液稀释至刻度，配制成1000ug/ml的三聚氰胺溶液，得溶液BZ1；量取BZ1标准溶液1.0ml，加入100ml容量品中，用乙腈：
水＝50：
50稀释至刻度，摇匀的标准溶液BZ2（此时浓度为10ug/ml）；
样品处理：
准确称取2.000g奶粉，加入到10ml容量瓶中，加入乙腈：
水＝50：
50至刻度以下，摇匀，超声20min；用乙腈：
水＝50：
50溶液稀释至刻度；离心或静置分层，取上层清夜用纯水稀释至原来浓度的1/5倍，针筒过滤，进样20ul；
注意事项：
1.分析前，先用纯水以1.0ml/min流速冲洗色谱柱30min；
分析完成后，先用纯水以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱45min，然后再用乙腈：
水＝90：
10以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱45min；反向冲洗，正向使用；
2.缓冲溶液，隔天需重新配制。
四.谱图及数据处理
1.标准曲线的绘制：
1）标准溶液的配制：
准确量取标准品溶液BZ20.25ml、0.5ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分别加入到10ml的容量瓶中，用乙腈：
水＝50：
50稀释至刻度，摇匀；
2）标准曲线：
三聚氰胺标准曲线
线性回归方程：
y=174175x+14323
R2=0.9994
样品编号
1
2
3
4
5
6
7
浓度（ug/ml）
0.25
0.5
2
4
6
8
10
吸光度（mAU）
26552
51402
180649
370150
538627
716436
878381
3）结论：
本方法中三聚氰胺浓度在0.25ug/ml～10ug/ml范围内线性良好，可以作为外标法定量使用；
2．谱图
1）标准品谱图
2）样品谱图
第24卷 第1期 2021年3月 西 南 科 技 大 学 学 报 JournalofSouthwestUniversityofScienceandTechnology Vol.24No.1 Mar.2021
收稿日期:
2021-11-17
项目:
“十一五”科技支撑计划重大专项课题（NO.2007BAD89B15。
作者简介:
侯大斌（1965-,男,博士,教授,主要从事植物分子生物学及药用植物学研究。
E-mail:
dbhou@126。
附子不同组织中生物碱含量的测定
侯大斌 赵祥升 王 惠 许 源
（西南科技大学生命科学与工程学院 四川绵阳 621010
关键词:
附子 新乌头碱 次乌头碱 乌头碱 高效液相色谱法
中图分类号:
R282;S567 文献标识码:
A 文章编号:
1671-8755（202101-0098-04
DeterminationofAlkaloidsinDifferentTissueofAconitumcarmichaeli
HOUDa2bin,ZHAOXiang2sheng,WANGHui,XUYuan
（SchoolofLifeScienceandEngineering,SouthwestUniversityofScienceandTechnology,
Mianyang621010,Sichuan,China
Abstract:
Todeterminethetotalalkaloidsandthreekindsofdiesterditerpenoidalkaloidsindifferenttis2sueofAconitumcarmichaelianditsnamelymesaconitine,aconitineandhypaconitine,aciddyecolorime2tryandRP2HPLCwasused.ThecompoundswasanalyzedonZorbaxextend2C18column（150mm×4.6mm,5.0μmandbygradientelutionprogramperformedwithacetonitrileand0.1%ethylenediamineasamobilephase.Theflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwasdoneat240nmandcolumntemperaturewas30℃.Thealkaloidscontentsofmonkshood2tubers,stem,leaves,fibroustubersandmothertuberswere5.53,3.81,14.77,8.87and4.58mg/grespectively.Thecontentsofthreekindsofdiesterditerpe2noidalkaloidsindifferenttissueofAconitumcarmichaeliwereinthesequenceof:
fibroustubers>monkshood2tubers>mothertubers>leaves>stem.AlltissuesofAconitumcarmichaelicontainedalka2loids.ThisstudycanprovideascientificbasisfortheresourcesutilizationofAconitumcarmichaeli.
Keywords:
Hypaconitine;Aconitumcarmichaeli;Mesaconitine;HPLC
附子是我国常用的中药和四川道地药材,其性大热,味辛、甘,有毒,入心、脾、肾,通行十二经,具有回阳
救逆、温里助阳、祛寒止痛的功效[1],近年来现代药理学研究证明,附子提取液还具有抗癌、抗衰老和增强免
疫机能等作用[2]。
根据人们对附子中次生代谢产物研究表明其主要有附子脂酸、附子磷脂酸钙、
β-谷甾醇、脂肪酸酯、生物碱等成分,主要活性成分为生物碱,其中大多是二萜型生物碱,包括C18,C19和C20三大类。
其中C19类型属去甲基二萜生物碱,大部分含有1~2个酯化的醇羟基,酯基多由醋酸、苯甲酸及其衍生
物或黎芦酸等构成,双酯型生物碱毒性很大,为附子中主要的毒性和活性成分[3-5]。
附子中双酯型生物碱最
具代表性的为:
乌头碱（aconitine、新乌头碱（mesaconitine与次乌头碱（hypaconitine[6]等。
附子在我国
主要产地为四川江油和陕西汉中,其中四川江油为附子的道地产地[7]。
根据人们长期的用药习惯,子根和
母根是药材的主要收获组织,而茎秆、叶片和须根通常都被遗弃。
本文主要研究附子不同组织中乌头类总生物碱与新乌头碱、乌头碱、次乌头碱3种双酯型生物碱的含量,为附子栽培和资源综合利用提供科学依据。
1 材料、方法与设备
1.1 材料
试验材料购于江油附子GAP基地收获的新鲜附子全植株。
附子各组织用纯水清洗2次,装入牛皮纸袋放入烘箱,在105℃下烘30min,再在60℃~70℃下烘干至恒重,粉碎过60目筛,4℃冰箱保存,备用。
1.2 仪器与设备
Varian1200LC/MS液相色谱—质谱联用仪（带紫外检测器,美国Varian公司;旋转蒸发仪（Buchi公司;电子分析天平（Sartorius公司;优普超纯水制造系统（上海优普实业;超声波清洗器（昆山市超声仪器;T6普析通用新世纪紫外分光光度计（北京普析;中草药粉碎机（天津泰斯特仪器;电热恒温鼓风干燥箱（上海福玛实验设备。
1.3 试剂
乙腈,乙二胺为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯;乌头碱（NO.110797-200404,
新乌头碱（NO.110799-200404,次乌头碱（NO.110798-200404对照品购于中国药品生物制品检定所。
2 方法
2.1 乌头类总生物碱含量测定
3.0±0.1的HAC-NaAC缓冲液20mL,浸泡过夜,用干燥滤纸滤过,用HAC-NaAC缓冲液定容到20mL,为供试溶液。
标,以吸光度X为横坐标,绘制标准曲线。
2.2 新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量测定
定容到10mL的容量瓶,取适量用0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液
美国Zorbaxextend-C18（150mm×4.6mm,5.0μm色谱柱;流动相为乙腈—0.1%乙二胺;梯度洗脱,时间程序为0→15→30→35→60min,乙腈体积分数相应为35%→50%→75%→35%→35%;流速为1mL/min;柱温为30℃;检测波长240nm。
3 结果与分析
3.1 乌头类总生物碱的测定
99 第1期 侯大斌,等:
附子不同组织中生物碱含量的测定
的线性关系。
4.77mg/g;茎秆中含量最低为:
3.81mg/g;子根和母根中乌头类总生物碱含量处于中等水平,含量分别为:
5.53mg/g,4.58mg/g;叶片中乌头类总生物碱显著高于其他组织,含量是子根和母根的近三倍,比须根的含量高出6
6.5%。
各组织中乌头类总生物碱含量顺序为:
叶片>须根>子根>母根>茎秆。
3.2 新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量
表1 附子不同组织中乌头类总生物碱的含量（n=5
Table1Thecontentoftotalalkaloidsindifferent
tissueofAconitumcarmichaeli（n=5项目平均含量/mg・g-1
差异显著性5%1%叶片
14.77AA须根8.87BB子根5.53CC
母根4.58DD
见图1。
表明新乌头碱、乌头碱、次乌头碱能达到基线分离,3种生物碱的分离效果较好
醇稀释到刻度,配成不同浓度的溶液,振荡均匀,作为
对照品稀释液。
在同一色谱条件下分别加入对照品稀释液20.0μL,确定标准物质的保留时间。
然后各取一定体积储备液配成不同浓度的混合标准溶液,分别平行测定3次（均进样20.0μL,以平均峰面积Y为纵坐标,质量浓度X（μg/mL为横坐标进行线性回归,各物质的回归方程、相关系数及线性范围见表2。
表2 3种生物碱的回归方程、相关系数和线性范围
Table2Regressionequations,correlationcoefficients
andlinearrangesofthreekindsofalkaloids
化合物回归方程相关系数线性范围
（n=5分别为:
99.1%,99.4%,99.2%;RSD分别为:
1.64%,1.97%,1.75%。
001 西 南 科 技 大 学 学 报 第24卷
生物碱含量（2441.89μg/g显著偏高,比子根和母根高3倍左右;须根中乌头碱和次乌头碱含量比其它组织显著高,而其新乌头碱含量与子根和母根相当;茎杆双酯型生物碱含量明显低于其它组织。
叶片中新乌头碱
母根的含量相当,但次乌头碱含量比子根和母根
的含量高约100
μg,但低于须根的含量。
4 讨论
附子中3种双酯型生物碱含量的测定目前常
用的方法是高效液相测定法,在试验中我们比较
了3种生物碱样品制备中的提取方法:
药典法、乙
醚超声法、乙醇加热回流法等（另文发表发现,乙醚超声提取法具有步骤较少、简单、条件容易控制、提取率高等优点,该制备方法适合用于此类生物碱高效液相的定量分析。
附子不同组织中的生物碱呈现了明显的差异性,叶片中的乌头类总生物碱含量最高,茎秆的含量最低,两组织在利用上应区别对待;母根和子根含量低于须根,处于中等水平。
从新乌头碱,乌头碱,次乌头碱的含量来看,除须根外的组织中,新乌头碱是主要成分,这与陈嬿[11]研究的新乌头碱是附子生物碱中的主要成分相同。
茎秆中3种生物碱含量均低于其它组织,可能茎秆中纤维组织含量比其它组织的纤维含量高,双酯型生物碱含量明显低于其它组织。
叶片中的3种生物碱含量只有348.67μg/g,低于子根、母根和须根的含量,但是它的总生物碱的含量最高,说明其非双酯型生物碱的含量特别高,叶片中非双酯型生物碱含量和种类需要进一步实验的证实和研究。
须根中次乌头碱含量显著高于子根,可能的原因是须根的木质部、韧皮部和周皮等组织所占比例较大,而子根因富含淀粉、糖类等物质而导致木质部、韧皮部和周皮等组织所占比例较小。
这可从前人研究其他药用植物发现次生代谢产物主要分布在木质部、韧皮部和周皮等组织[12-13]得到一定支持。
但由于附子的组织化学、次生代谢产物的具体的合成途径还不清楚,因此生物碱在不同组织中的差异性还有待进一步研究,该结果也为附子组织化学的研究提供了基础。
附子收获的主要组织是子根和母根,但是茎叶和须根占生物量约44%左右,须根中3种生物碱和乌头类总生物碱的含量都比较高;叶片中3种双酯型生物碱的含量很低,但是总碱的含量很高,也有较高的研究价值和利用价值,应该是以后附子研究的对象。
该研究为附子各组织的收获提供了科学依据,也为附子资源的充分利用奠定了基础。
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实验一硫酸铜晶体中结晶水含量的测定
教案5（1-3-1：
硫酸铜结晶水含量测定）
（1）测定原理：
CuSO4·5H2O中，Cu（H2O）42+与SO42-·H2O，其中前者是蓝色的，后者是_______色的。
5个水分子与CuSO4结合力是__________，在383K时，Cu（H2O）42+失去4个水分子，在531K时，才能使_________中的水失去。
（2）测定标准记量：
如果用w为托盘天平称量坩埚的质量，w2为坩埚与晶体的总质量，w3是无水CuS04与坩埚再加热，放在干燥器中冷却后的质量。
设x为结晶水的物质的量，则计算x的数学表达式为值只有在4.9-5.1之间，才表明实验是成功的。
（3）测定误差分析：
你认为在________
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