牛奶中三聚氰胺的含量测定最全word资料.docx

1、牛奶中三聚氰胺的含量测定最全word资料牛奶中三聚氰胺的含量测定一样品分子结构中文名英文名分子结构三聚氰胺Melamine二. 样品来源记录样品商品名：样品测定描述：主成分含量测定生产厂家：三. 液相方法条件方法来源：自主开发；具体方法： 色谱柱：AQ-C18，5um，4.6250mm流动相：10mmol/L辛烷磺酸钠和20mmol/L磷酸氢二铵（用磷酸调节pH3.3）：乙腈90：10；检测波长：236nm；温度：室温29度；流速：1.0ml/min；进样量：20ul；流动相的配制：准确称取10mmol的辛烷磺酸钠和20mmol的磷酸氢二铵溶于1000ml水中，用磷酸调节pH至3.3准确量取该

2、溶液450ml与50ml乙腈混合均匀，超声脱气；样品处理方法：标准品处理：准确称量250mg三聚氰胺标准品加入250ml容量瓶中，用一定量的水：乙腈50：50超声溶解，然后用水：乙腈50：50溶液稀释至刻度，配制成1000ug/ml的三聚氰胺溶液，得溶液BZ1；量取BZ1标准溶液1.0ml，加入100ml容量品中，用乙腈：水50：50稀释至刻度，摇匀的标准溶液BZ2(此时浓度为10ug/ml)； 样品处理：准确称取2.000g奶粉，加入到10ml容量瓶中，加入乙腈：水50：50至刻度以下，摇匀，超声20min；用乙腈：水50：50溶液稀释至刻度；离心或静置分层，取上层清夜用纯水稀释至原来浓度的

3、1/5倍，针筒过滤，进样20ul；注意事项： 1. 分析前，先用纯水以1.0ml/min流速冲洗色谱柱30min；分析完成后，先用纯水以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱45min，然后再用乙腈：水90：10以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱45min；反向冲洗，正向使用； 2. 缓冲溶液，隔天需重新配制。四. 谱图及数据处理1. 标准曲线的绘制： 1）标准溶液的配制：准确量取标准品溶液BZ2 0.25ml、0.5ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分别加入到10ml的容量瓶中，用乙腈：水50：50稀释至刻度，摇匀； 2）标准曲线：三聚氰胺标准曲线线性回归方

4、程：y = 174175x + 14323R2 = 0.9994 样品编号1234567浓度（ug/ml）0.250.5246810吸光度（mAU）2655251402180649370150538627716436878381 3)结论：本方法中三聚氰胺浓度在0.25ug/ml10ug/ml范围内线性良好，可以作为外标法定量使用；2 谱图1）标准品谱图2）样品谱图第24卷第1期2021年3月西南科技大学学报Journal of South west University of Science and Technol ogy Vol .24No .1M ar .2021收稿日期:2021-11

5、-17 项目: “十一五”科技支撑计划重大专项课题(NO.2007BAD89B15。作者简介:侯大斌(1965-,男,博士,教授,主要从事植物分子生物学及药用植物学研究。E -mail:dbhou126 。附子不同组织中生物碱含量的测定侯大斌赵祥升王惠许源(西南科技大学生命科学与工程学院四川绵阳621010关键词:附子新乌头碱次乌头碱乌头碱高效液相色谱法中图分类号:R282;S567文献标识码:A 文章编号:1671-8755(202101-0098-04D eterm i n a ti on of A lka lo i ds i n D i fferen t T issue of A con

6、 itum ca rm ichaeliHOU Da 2bin,ZHAO Xiang 2sheng,WANG Hui,XU Yuan(School of L ife Science and Eng ineering,Sou thw est U niversity of Science and Technology,M ianyang 621010,S ichuan,China Abstract:T o deter m ine the t otal alkal oids and three kinds of diester diter penoid alkal oids in different

7、tis 2sue of A conitum car m ichaeli and its na mely mesaconitine,aconitine and hypaconitine,acid dye col ori m e 2try and RP 2HP LC was used .The compounds was analyzed on Zorbax extend 2C 18colu mn (150mm 4.6mm ,5.0m and by gradient eluti on p r ogra m perf or med with acet onitrile and 0.1%ethylen

8、edia m ine as a mobile phase .The fl ow rate was 1.0m l/m in .The detecti on was done at 240nm and colu mn te mperature was 30.The alkal oids contents of monkshood 2tubers,ste m ,leaves,fibr ous tubers and mother tubers were 5.53,3.81,14.77,8.87and 4.58mg /g res pectively .The contents of three kind

9、s of diester diter pe 2noid alkal oids in different tissue of A conitum car m ichaeli were in the sequence of:fibr ous tubers monkshood 2tubers mother tubers leaves ste m.A ll tissues of A conitum ca r m ichaeli contained alka 2l oids .This study can p r ovide a scientific basis f or the res ources

10、utilizati on of A conitum ca r m ichaeli .Key words:Hypaconitine ;A conitum car m ichaeli ;M esaconitine ;HP LC附子是我国常用的中药和四川道地药材,其性大热,味辛、甘,有毒,入心、脾、肾,通行十二经,具有回阳救逆、温里助阳、祛寒止痛的功效1,近年来现代药理学研究证明,附子提取液还具有抗癌、抗衰老和增强免疫机能等作用2。根据人们对附子中次生代谢产物研究表明其主要有附子脂酸、附子磷脂酸钙、-谷甾醇、脂肪酸酯、生物碱等成分,主要活性成分为生物碱,其中大多是二萜型生物碱,包括C 18,C 19

11、和C 20三大类。其中C 19类型属去甲基二萜生物碱,大部分含有12个酯化的醇羟基,酯基多由醋酸、苯甲酸及其衍生物或黎芦酸等构成,双酯型生物碱毒性很大,为附子中主要的毒性和活性成分3-5。附子中双酯型生物碱最具代表性的为:乌头碱(aconitine 、新乌头碱(mesaconitine 与次乌头碱(hypaconitine 6等。附子在我国主要产地为四川江油和陕西汉中,其中四川江油为附子的道地产地7。根据人们长期的用药习惯,子根和母根是药材的主要收获组织,而茎秆、叶片和须根通常都被遗弃。本文主要研究附子不同组织中乌头类总生物碱与新乌头碱、乌头碱、次乌头碱3种双酯型生物碱的含量,为附子栽培和资源

12、综合利用提供科学依据。1材料、方法与设备1.1材料试验材料购于江油附子G AP 基地收获的新鲜附子全植株。附子各组织用纯水清洗2次,装入牛皮纸袋放入烘箱,在105下烘30m in,再在6070下烘干至恒重,粉碎过60目筛,4冰箱保存,备用。1.2仪器与设备Varian 1200LC /MS 液相色谱质谱联用仪(带紫外检测器,美国Varian 公司;旋转蒸发仪(Buchi 公司;电子分析天平(Sart orius 公司;优普超纯水制造系统(上海优普实业;超声波清洗器(昆山市超声仪器;T 6普析通用新世纪紫外分光光度计(北京普析;中草药粉碎机(天津泰斯特仪器;电热恒温鼓风干燥箱(上海福玛实验设备。

13、1.3试剂乙腈,乙二胺为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯;乌头碱(NO.110797-200404,新乌头碱(NO.110799-200404,次乌头碱(NO.110798-200404对照品购于中国药品生物制品检定所。2方法2.1乌头类总生物碱含量测定3.00.1的HAC -Na AC 缓冲液20mL ,浸泡过夜,用干燥滤纸滤过,用HAC -Na AC 缓冲液定容到20mL,为供试溶液。标,以吸光度X 为横坐标,绘制标准曲线。2.2新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量测定定容到10mL 的容量瓶,取适量用0.45m 微孔滤膜滤过,作为供试品溶液美国Z orbax extend -C 18(1

14、50mm 4.6mm ,5.0m 色谱柱;流动相为乙腈0.1%乙二胺;梯度洗脱,时间程序为015303560m in,乙腈体积分数相应为35%50%75%35%35%;流速为1mL /m in;柱温为30;检测波长240nm 。3结果与分析3.1乌头类总生物碱的测定99第1期侯大斌,等:附子不同组织中生物碱含量的测定的线性关系。4.77mg/g;茎秆中含量最低为:3.81mg/g;子根和母根中乌头类总生物碱含量处于中等水平,含量分别为:5.53mg/g,4.58mg/g;叶片中乌头类总生物碱显著高于其他组织,含量是子根和母根的近三倍,比须根的含量高出66.5%。各组织中乌头类总生物碱含量顺序为

15、:叶片须根子根母根茎秆。3.2新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量表1附子不同组织中乌头类总生物碱的含量(n =5Table 1The con ten t of tot a l a lka lo i ds i n d i fferen ttissue of A con itum ca r m ichaeli (n =5项目平均含量/mg g -1差异显著性5%1%叶片14.77A A 须根8.87B B 子根5.53C C母根4.58D D见图1。表明新乌头碱、乌头碱、次乌头碱能达到基线分离,3种生物碱的分离效果较好 醇稀释到刻度,配成不同浓度的溶液,振荡均匀,作为对照品稀释液。在同一色谱条件下分

16、别加入对照品稀释液20.0L,确定标准物质的保留时间。然后各取一定体积储备液配成不同浓度的混合标准溶液,分别平行测定3次(均进样20.0L ,以平均峰面积Y 为纵坐标,质量浓度X (g/mL 为横坐标进行线性回归,各物质的回归方程、相关系数及线性范围见表2。表23种生物碱的回归方程、相关系数和线性范围Table 2Regressi on equa ti on s,correl a ti on coeff i c i en tsand li n ear ranges of three k i n ds of a lka lo i ds化合物回归方程相关系数线性范围(n =5分别为:99.1%,9

17、9.4%,99.2%;RS D 分别为:1.64%,1.97%,1.75%。001西南科技大学学报第24卷生物碱含量(2441.89g/g 显著偏高,比子根和母根高3倍左右;须根中乌头碱和次乌头碱含量比其它组织显著高,而其新乌头碱含量与子根和母根相当;茎杆双酯型生物碱含量明显低于其它组织。叶片中新乌头碱母根的含量相当,但次乌头碱含量比子根和母根的含量高约100g,但低于须根的含量。4讨论附子中3种双酯型生物碱含量的测定目前常用的方法是高效液相测定法,在试验中我们比较了3种生物碱样品制备中的提取方法:药典法、乙醚超声法、乙醇加热回流法等(另文发表发现,乙醚超声提取法具有步骤较少、简单、条件容易控

18、制、提取率高等优点,该制备方法适合用于此类生物碱高效液相的定量分析。附子不同组织中的生物碱呈现了明显的差异性,叶片中的乌头类总生物碱含量最高,茎秆的含量最低,两组织在利用上应区别对待;母根和子根含量低于须根,处于中等水平。从新乌头碱,乌头碱,次乌头碱的含量来看,除须根外的组织中,新乌头碱是主要成分,这与陈嬿11研究的新乌头碱是附子生物碱中的主要成分相同。茎秆中3种生物碱含量均低于其它组织,可能茎秆中纤维组织含量比其它组织的纤维含量高,双酯型生物碱含量明显低于其它组织。叶片中的3种生物碱含量只有348.67g/g,低于子根、母根和须根的含量,但是它的总生物碱的含量最高,说明其非双酯型生物碱的含量

19、特别高,叶片中非双酯型生物碱含量和种类需要进一步实验的证实和研究。须根中次乌头碱含量显著高于子根,可能的原因是须根的木质部、韧皮部和周皮等组织所占比例较大,而子根因富含淀粉、糖类等物质而导致木质部、韧皮部和周皮等组织所占比例较小。这可从前人研究其他药用植物发现次生代谢产物主要分布在木质部、韧皮部和周皮等组织12-13得到一定支持。但由于附子的组织化学、次生代谢产物的具体的合成途径还不清楚,因此生物碱在不同组织中的差异性还有待进一步研究,该结果也为附子组织化学的研究提供了基础。附子收获的主要组织是子根和母根,但是茎叶和须根占生物量约44%左右,须根中3种生物碱和乌头类总生物碱的含量都比较高;叶片

20、中3种双酯型生物碱的含量很低,但是总碱的含量很高,也有较高的研究价值和利用价值,应该是以后附子研究的对象。该研究为附子各组织的收获提供了科学依据,也为附子资源的充分利用奠定了基础。参考文献1 药典委员会.中华人民共和国药典(一部M .北京:化学工业出版社,2005.132133.States Phar macopoeia Comm issi on .The Peop le s Republic of China Phar macopoeia (M .Beijing:Che m ical I ndustry Press,2005.132133.(in Chinese 2董兰凤,张英俊,刘京生,等

21、.附子多糖与阿霉素长循环热敏脂质体的抗肿瘤作用及其机制探讨J .细胞与分子免疫学杂志,2006,22(4:458462.DONG Lan 2feng,ZHANG Ying 2jun,L I U J ing 2sheng,et al .Anti 2tu mor Effect of Monkshood Polysaccharide with Adria myc in Long Circulating Te mperature 2sensitive L i pos ome and Its M echanis m J .China Journal of Cell Molecule I m munol,

22、2006,22(4:458462.(in Chinese 3刘永刚.附子及附子理中丸中乌头类生物碱的化学和代谢研究D .吉林大学,2007.L I U Yong 2gang .Che m ical and Metabolic Study on A conitum A lkaloids of R adix A coniti L ateralls Preparata and Fuzilizhong PollD .J ilin University,2007.(in Chinese 4徐暾海,赵洪峰,徐雅娟,等.四川江油附子强心成分研究J .中草药,2004,35(9:964966.XUN Tun

23、2hai,ZHAO Hong 2feng,XU Ya 2juan,et al .Cardi ot onic Constituents of A conitum Car m ichaeli J .Chinese Traditi on 2101第1期侯大斌,等:附子不同组织中生物碱含量的测定201西南科技大学学报第24卷al and Herbal D rugs,2004,35(9:964966.(in Chinese5周远鹏.附子及其主要成分的药理作用和毒性J.药学学报,1983,18(5:394400.ZHOU Yuan2peng.The Phar macol ogical Effect and

24、 Toxicity of the M ain Contents of A conitum Car m ichaeliJ.Acta Phar maceu2 tica Sinica,1983,18(5:394400.(in Chinese6胡熙明,张文康,朱庆先,等.中华本草(3M.上海:上海科技出版社,1999.101114.HU Xi2m ing.ZHANG W en2kang,ZHU Q ing2xian,etal.Chinese Materia Medica(3M.Shanghai:Shanghai Scientific and Technical Publishers,1999.1011

25、14.(in Chinese7肖培根.新编中药志(第1卷.北京:化学工业出版社,2002.536.X I A O Pei2gen.Modern Chinese M ateria M edica(M.Beijing:Chem ical I ndustry Press,2002.536.(in Chinese 8李云霞,孙照,郭艳玲.酸性染料比色法测定川乌、草乌中总乌头生物碱的含量J.中成药,2000,22(9:662663.L I Yun2xia,S UN Zhao,G UO Yan2ling.Deter m inati on of Total A lkal oids in A conitum

26、Car m ichaili D ebx,Radix A coniti Kus2 nezoffii by Acid Dye Col ori m etryJ.Chinese Traditi onal PatentMedicine,2000,22(9:662663.(in Chinese9黄建明,郭济贤,孙明明,等.草乌中生物碱含量测定方法的研究J.中药材,2002,25(12:878880.HUANG J ian2m ing,G UO,J i2xian,S UN M ing2m ing,etal.The Method f or Deter m inati on of A conitum A lka

27、loids in Radix A coniti KusnezoffiiJ.Journal of Chinese M edicinalMaterials,2002,25(12:878880(in Chinese10张启云,朱战杰,余日跃,等.RP2HP LC法测定白附片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱J.中国实验方剂学杂志,2007,13(12:13.Z HANG Q i2yun,ZHU Zhan2jie,Y U R i2yue,et al.Deter m inati on of A conitine,M esaconitine,Hypaconitine in Radix A coniti2 lat

28、eralis Preparata by I P2LCJ.Chinese Journal of Experi m ental Traditi onal Medical Fomnulae,2007,13(12:13.(in Chinese11陈嬿,朱元龙,朱任宏.中国乌头的研究.川乌、附子中的生物碱J.药学学报,1965,12(7:435439.CHE N Yan,ZHU Yuan2l ong,ZHU Ren2hong.A lkaloids of the Chinese D rugs,Aconitu m SPP.A lkalids fr om Chuan2wu and Fu2zi,A conitu

29、m Car m ichaeli D ebxJ.Acta Phar maceutica Sinica,12(7:435439.(in Chinese12高玲玲,刘文哲.远志根的形态发生及组织化学研究J.热带亚热带植物学报,2021,16(1:19.G AO L ing2ling,L I U W en2zhe.Mor phogenesis and H ist oche m istry of Root in Polygala tenuiloliaJ.Journal of Tr op ical andSubtr op ical Botany,2021,16(1:19.(in Chinese13卜晓英.

30、虎杖营养器官与愈伤组织结构及白藜芦醇组织化学定位研究D.湖南农业大学,2007.BU Xiao2ying.Study on the Anat omy Structure of Vegetative O rgans in Polybonum cuspidatun and Its Callus and H ist oche m ical Localizati on of Resveratr olD.Hunan University of Agriculture,2007.(in Chinese 实验一 硫酸铜晶体中结晶水含量的测定教案5（1-3-1：硫酸铜结晶水含量测定） （1）测定原理：CuSO45H2O中，Cu(H2O)42+与 SO42-H2O，其中前者是蓝色的，后者是_色的。5个水分子与CuSO4结合力是_，在383 K时，Cu(H2O)42+失去4个水分子，在531 K时，才能使_中的水失去。 （2）测定标准记量： 如果用w为托盘天平称量坩埚的质量，w2为坩埚与晶体的总质量，w3是无水CuS04与坩埚再加热，放在干燥器中冷却后的质量。设x为结晶水的物质的量，则计算x的数学表达式为值只有在4.9-5.1之间，才表明实验是成功的。 （3）测定误差分析： 你认为在_