高效液相色谱仪验证方案.docx

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高效液相色谱仪验证方案

高效液相色谱仪验证方案

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高效液相色谱仪"]bOpkT

验证方案vkLKzsN']

c;,-I

12V-EGi

类别：

编号：

Y%_!

k'\n[2

部门：

验证委员会页码：

共16页，第1页~J0r%P

j|>^wB

vW0U~（XlN

版次：

•新订•替代：

DFb_hy

起草部门：

年月日g'9~T8i&^

审核：

年月日PB）vE

审阅会签：

`[h&Q0Du6

（验证委员会）a{Y8hR

批准：

年月日"$3~）:

o

实施日期：

年月日6%V#_]

（[A%>u>h

复印数：

批准：

）h,}v（）qc#

分发至：

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T}N]

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目录BQ{'_r^u

N8U_n42

1．概述………………………………………………………………………………………………………3Q[bIkvr|

2．验证目的…………………………………………………………………………………………………3X'5+）dj

3．验证依据及验证范围……………………………………………………………………………………3=@k3*#\

4．验证工作小组……………………………………………………………………………………………3a;0$fRy

5．验证方案审批……………………………………………………………………………………………3（<#NsW!

z

5.1验证方案起草……………………………………………………………………………………………3|y2cI,&

5.2验证方案会签……………………………………………………………………………………………3z（beTe

5.3验证方案批准……………………………………………………………………………………………3<*&2b

5.4验证方案实施……………………………………………………………………………………………3|y7#D9m

6．验证的准备………………………………………………………………………………………………3>5-]Ur~

6.1文件资料的确认…………………………………………………………………………………………3ek4?

|!

kQD

6.2售后服务…………………………………………………………………………………………………4[+v}V,jb

6.3关键性仪表及消耗性备品备件…………………………………………………………………………4'|N9xLm

6.4安装检查…………………………………………………………………………………………………41~P^g`

6.5计算机的安装情况检查………………………………………………………………………………4p!

[CH

6.6安装确认结论及批准……………………………………………………………………………………5BpKgUwf;C

7．安装验证内容……………………………………………………………………………………………5Px））O&w{

7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求…………………………………………5Ka\%kB>*`

7.1.1评价仪器的安装条件是否符合GMP及供应商提议的要求…………………………………………5hol54）7$3:

7.1.2起草标准操作规程……………………………………………………………………………………50oi=}lV

7.1.3仪器校正………………………………………………………………………………………………5V/G'{q

7.2运行确认（也即功能试验）……………………………………………………………………………5AhARBgf<

7.2.1测试项目和认可标准…………………………………………………………………………………5dZ7+Iw;m

7.2.2验证所需的材料………………………………………………………………………………………5"oYyeT,?

7.2.2.1玻璃仪器设备………………………………………………………………………………………5

7.2.2.2试剂、标准溶液……………………………………………………………………………………5hb"t8_--c

7.2.2.3其它辅助设备………………………………………………………………………………………5_h&Ehp

7.2.3软件系统安全性确认（必要时）………………………………………………………………………5#s1O（rLRl

7.2.4运行确认的实施………………………………………………………………………………………6EW{z?

/

7.2.5运行确认评价及结论…………………………………………………………………………………73Bz0Ba

8.性能确认（适用性预试验）…………………………………………………………………………………74?

X#d）L（

9.拟订再验证项目及周期……………………………………………………………………………………8A:

1O:

LB=!

10.验证结论…………………………………………………………………………………………………8hq/\'Z&!

+P

1<^"OjQ

0yXUVKq3

1.概述Y2j>lf?

8

高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

_Ywt_h;:

高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，在调研的基础上，公司于年月购置的精密仪器，其生产厂为，主要用于样品的分析测试。

该仪器>\8Bu#&s4

为双泵型高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。

应用软件为，版本号。

n4;

2.验证目的3`J?

as@^8

按照GMP的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。

_$0<]O$

3.验证范围及验证依据Wk'KNo

3.1本方案适用于对理化室高效液相色谱仪的验证。

;Mc\_>i/

3.2本方案验证依据,$mnD@）

3.2.1JJG705-2002高效液相色谱仪检定规程u1ggLH!

U

3.2.2高效液相色谱仪操作规程wtetB'）yD

4.验证工作小组y^pk）`y8

组长]P（:

z

姓名职务/职称部门（X,Ua+{_

2+TCFpv

成员8*H_-

tjBs>w

4cRF3$amd

>t）vQ&:

;u

5.验证方案审批=GL}\I

5.1验证方案起草Yewn

起草部门签名日期bvuoGG*

设备动力部年月日WM.JoQ

质管部年月日F^7qLvh

5.2验证方案会签}=z_3JfO

部门签名日期]|it&4l

质管部年月日

设备动力部年月日K#rfQ0QK/!

5.3验证方案批准_ui03veA1

批准人签名日期!

O6e,l

质量部部长年月日MGzeIrV

5.4验证方案实施g@wF2=

实施部门职责=F'p#N0_2

设备动力部负责仪器的安装确认。

CF"$&+s9

质管部负责仪器的运行确认、性能的确认。

_OV\W'RrA

6.验证的准备mkgGX|k;

6.1文件资料的确认Tlrr02>B{

下列文件资料是否齐全，是否符合GMP要求Ay）q%:

qx

序号文件/资料编号存放地

1设备采购定单Y.`{]rC

2原版操作说明书安装手册和维修手册（如必要）lOIBX@KE

3仪器操作规程SOPr~cmrLQa

4仪器使用、维修记录1d/-SxhZ

5中华人民共和国国家计量检定规程JJG705-2002&_v!

=\Fig4

6仪器档案（如必要）f[,9WkC_

7中国药典（2005版）附录_A?

"（5da.

8标准物质证书'[#a-8-JY_

9验证方案36>pa

结论：

rkhQoYZ[

检查人检查日期34VyRa

复核人复核日期{zoUU

6.2售后服务rQiX7

维修单位：

联系电话：

gyH'92ck

地址：

传真：

>}QRMn|@H

联系人：

~ZU;0#

检查人日期3nuf3）

6.3关键性仪表及消耗性备品备件：

见附件2D^Dm,_-

检查人日期lJ]r%YlF

6.4安装检查mY-Z$8r

对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。

8o8FL~&]

检查内容要求方法结果IVy,A7f

环境室内不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性的物质，无强烈的机械震动和电磁干扰。

目测:

NU-C!

eT

环境温度5℃-35℃温湿度仪测Ff>Y<7CQv

环境相对湿度20%～85%温湿度仪测1=#r$H

安装位置仪器应平稳而牢固地安置在工作台上按要求安装L1BpkB

电压220V±22V电压仪测Wy#`*h,

频率50Hz±0.5Hz[2w3c4K

接地接地良好接地电阻表测定4W9!

_:

j（j

电源线与插孔吻合按要求安装7tAWPSwf

液体管路液路管路选材正确，连接处密封良好，检漏合格按要求安装zq!

2）;,

__`m<="No

检查人日期?

d+B]VYw

6.5计算机的安装情况检查$O}glQ

项目8g>jz8

安装的主要软件（i*1M

文件格式2IjqTL

安装位置_p00\C

数据文件保存位置!

LIWoa[F.

密码复杂性yrsP'th

工作站安装,}{E+e5jh7

6.6安装确认结论及批准;uoH+`pf

结论：

所有物品与检查清单相符，实验室电、气设计安装合理，实验室环境良好，符合仪器安装要求。

气、电及管路连接符合供货方的要求。

ZlO@PlZ）

仪器安装。

SF.,sCk

检查人日期QyHUuG|g

批准人日期Opjt?

]

7．安装验证内容JpuW!

I

7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求：

见附件3。

9l,Gd

7.1.1评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求;Rnb^t6Z

查阅设备采购定单、操作手册等，列出设备安装、使用所需条件，包括温度、湿度、通风条件、电路等。

检查仪器安装与使用所处的环境条件，是否符合上述要求。

检查结果记录于附件4。

%

7.1.2起草标准操作规程（可验证后补充）dUe"qH29s

标准操作规程x65e,'

维护保养规程;l`8w3fDt

校正规程@ym7hk.

7.1.3仪器校正,U7hzBj8k

由厂商技术人员现场安装、调试，进行运行确认前的校正。

{K|{a

7.2运行确认（功能试验）k,@1rOf

7.2.1测试项目和认可标准）b-G2

整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。

验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。

4B>l|%

根据中华人民共和国国家计量检定规程JJG705-2002、中国药典（2005版）附录确定。

X:

e'@]Z）?

验证部件验证项目合格标准HwGtLeB"

输液泵流量设定值误差SS0.5ml/min:

＜5%；1.0ml/min:

＜3%；2.0ml/min:

＜2%TxiJ?

sDh*

流量稳定性误差SR0.5ml/min:

＜3%；1.0ml/min:

＜2%；2.0ml/min:

＜2%1rKR=To

梯度误差GC：

不超过±3%3gM{lS}h#

柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS＜±2℃LNg1q1P3

柱箱控温稳定性TC≤1℃dn5v|[dJ

自动进样器进样量准确度误差≤±2%F+6ZD5/

检测器基线噪声≤2×10－5AUK4rr.f6

最小检测浓度≤1×10－7g/mL（萘的甲醇溶液）lAGxE-B^a"

基线漂移≤5×10－4AU/hq[#\qT&QU

波长示值误差不超过±2nmlz*PNT{E

波长重复性优于2nmW@G[gS\T

整机性能定性测量重复性误差RSD≤1.5%m^=,RfUUd

定量测量重复性误差RSD≤3.0%BOWTH{KR<<

7.2.2验证所需的材料Y1~SGg7（@

7.2.2.1玻璃仪器设备计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。

^"Y'zIL

7.2.2.2试剂、标准溶液xo%iL

a）萘（AR）[vi4,'wm

b）甲醇（色谱纯）=gn}_sKNE

c）咖啡因（AR）F:

g{rm[

d）去离子水:

电导率不大于0.1μs/cms,v#lJ]d0W

e）紫外波长标准物质v6VhXV6$|

7.2.2.3其它辅助设备wUeOD.;#F

a）玻璃仪器：

经检定、其它玻璃器皿PQ]9xzOg[

b）C18色谱柱Q75^7Ga_

c）铂电阻温度计（Pt100）准确度≤0.3℃a~7osRmp0

d）秒表分度值不大于0.1秒3x0wk9lND

e）注射器10μl、50μl、10mlS1`0d9ds#

f）分析天平"3|"rc&F#

g）游标卡尺15cm/0.02mm'F?

Znd2L

7.2.3软件系统安全性确认nj0AO0

打开计算机开关，待屏幕运行Windowsxp操作系统以后，由可以授权操作该仪器的检验员设定登陆用户名、密码，重新启动系统。

再让其他不知被授权人员登陆，尝试输入用户名和密码，尝试能否进入计算机系统，连续尝试5次。

不知用户名和密码的操作人，应无法登陆计算机系统。

25c!

-.5D

结论：

OG+r|.N;

检查人：

日期：

%）Uvf`Xhh4

7.2.4运行确认的实施`6N-MsP

7.2.4.1输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定ho]_!

G498

将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。

按式

（1）、式

（2）计算SS和SR。

-Bo~"q

表1RsF3#H

流量设定值（mL/min）0.51.02.0PWk?

8dL-

测量次数333X`3vSCn

流动相收集时间（min）1055[%84L@:

h

SS＝（Fm－FS）/FS×100%……

（1）~1=._?

Ho

SR＝（Fmax－Fmin）/F×100%……

（2）`\ef0

式中：

SS——流量设定值误差（％）；d{2y/

SR——流量稳定性误差（％）；-7k|6"EwM

Fm＝（W2－W1）/ρT•t，流量实测值（mL/min）；s!

@_=rq

W2——容量瓶＋流动相的重量（g）；t+3

W1——容量瓶的重量（g）；rnn2u+OG

FS——流量设定值（mL/min）；@V*ju

ρT——实验温度下流动相的密度（g/cm3）；&RKH2_R

t——收集流动相的时间（min）；t}*l?

$`

Fmax——同一组测量中流量最大值（mL/min）；{{V;:

+62

Fmin——同一组测量中流量最小值（mL/min）；je&dioZ>

F——同一组测量值的算术平均值（mL/min）。

Q`.'-iq

输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录。

见附件5。

Gw~{V

7.2.4.2梯度误差的检定L;/9L[s,

由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%。

将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。

求出A，B溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。

从B溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差。

见附件5。

WGH%92

Gci=（Li–Lm）/Lm×100%ppAmN0=G

式中：

Gci——第i段梯度误差（%）；0CPxIF&_

Li——第i段输出信号值（或记录仪读数）平均值；KMUK`tbaI

Lm——各段输出信号（或记录仪读数）平均值的平均值。

*8z"^7?

^=

7.2.4.3柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定3\;v5D:

将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。

按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。

&|）hCJu

柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录。

见附件5。

1Fv8T'

7.2.4.4自动进样器进样量准确度误差的检定vkJ）FEar

取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50μl。

进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度。

grr'd+_e

自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录。

见附件5。

m+?

N7

7.2.4.5检测器的检定zJ;Rt9<7-

7.2.4.5.1检测器基线噪声和基线漂移的测定_g[-=y{Bb

取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。

{（4#）K2g%

7.2.4.5.2检测器最小检测浓度的测定joqWh!

kv7U

取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后取1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20μl，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。

公式如下：

/prYSRn8

CL=（2×Nd×C）/H~O{W;Cyh

式中CL——最小检测浓度，g/ml；6W&_2a7_*

Nd——基线噪声峰峰高，mm；eCWPhB6l

C——标准溶液浓度，g/ml；zC=a3

H——标准溶液峰峰高，mm。

Ja|{1&J.

检测器的检定原始记录。

见附件5。

e\F}q）_

7.2.4.5.3波长示值误差和重复性检定eh（

仪器通电稳定后，用注射器将紫外波长标准溶液（波长为235nm、257nm、313nm、350nm）注入检测器样品池，使用仪器光谱扫描功能，分别记录各标准溶液的光谱图，光谱图最大值对应的波长与标准溶液标准波长之差为波长示值误差。

!

:

3.D,

每个波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。

见附件5。

19t{|w<

7.2.4.6整机性能的检定&;c>O

取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm（当选用萘时）或272nm（当选用咖啡因时）,柱温设定为40℃。

开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液进样10μl，连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。

h/）_）r.x

整机性能的检定原始记录。

见附件5。

SUT~oETP

7.2.5运行确认评价及结论。

见附件5。

UzG[:

ic%

8性能确认（适用性试验）：

pQa:

pX

使用对照品或供试品，确认仪器性能符合使用要求。

对各类不同物质进行验证的方法可以不同，由质量部确定具体验证方法并组织实施。

n3KI+I%nQ

8.1系统适用性试验：

h6:

#!

Rg

8.1.1色谱柱的理论板数（n），在选定的色谱条件下，注入供试品溶液（或内标溶液），记录色谱图，量出供试品或内标物质峰的保留时间tR和半峰宽Wh/2，按n=5.54（tR/Wh/2）2计算出理论板数，符合具体品种项下规定的理论板数。

bHE2,;o

8.1.2分离度（Ｒ），按下式计算，应大于１.5GVGlVAo|@

R=（tR1－tR2）/（W2＋W1）oUZoj2G1

式中：

tR1——相邻后一峰的保留时间；D{8PQ2x>

tR2——相邻前一峰的保留时间；C1kYl0zR[

W1、W2——此相邻二峰的宽度。

yLE7>48

8.1.3拖尾因子（Ｔ）按下式计算，应在0.95～1.05之间tBbOY}.VD

T=W0.05h/2d1Mj#-j/{x{5

式中：

W0.05h——0.05峰高处的峰宽-VKS~{

d1——峰极大对峰前沿之间的距离8Me:

Yp_Xt

理论板数、分离度、拖尾因子测试结果`]Fx.）C#

品种名称理论板数（n）分离度（R）拖尾因子（T）2WX7nK;I

规定值实测值规定值实测值规定值实测值gI^oU4mq

＞1.50.95～1.05c\B|KhDk

附原始记录及图谱CYYkzcc^

测试人日期r.3/F[.

8.2定量重复性试验pyLRgD0g

相对标准差：

取对照品溶液连续进行5次，峰面积相对标准差应≤2.0％。

试验结果如下：

3vcO!

6Z5

品种进样次数峰面积平均峰面积偏差相对标准差5N%93{L

13a.kBzus

2G}&Sle]

30-~\W（

4CPNL94x

5zZVfj:

i8

附原始记录及图谱\&HnKhI

测试人日期6Cn+e.j@

8.3性能确认结论及批准（附件5）（V4~`i4V

9.拟订再验证项目及周期liXdN