高效液相色谱仪验证方案.docx

1、高效液相色谱仪验证方案 高效液相色谱仪验证方案Qef5eih t- tXCgRU 高效液相色谱仪 bOpk T 验证方案 vkLKzsN c;,-I 12V-EG i 类 别： 编 号： Y%_!kn2 部 门：验证委员会 页 码： 共16页，第1页 J0r%P j|wB vW0U(XlN 版 次： 新订 替代： DFb_ hy 起草部门： 年 月 日 g9T8i& 审核： 年 月 日 PB)vE 审阅会签： h&Q0Du6 （验证委员会） aY8 hR 批 准： 年 月 日 $3):o 实施日期： 年 月 日 6%V#_ (A%uh 复印数： 批准： )h,v()qc# 分发至： : T N

2、 a fB?js6 hh*R 目 录 BQ _ru N8U_n42 1 概述3 QbIkvr| 2 验证目的3 X5+)dj 3 验证依据及验证范围3 =k 3*# 4 验证工作小组3 a;0$fRy 5 验证方案审批3 (#Ns W!z 5.1验证方案起草3 |y2cI,& 5.2验证方案会签3 z(beT e 5.3验证方案批准3 5-Ur 6.1文件资料的确认3 ek4?|!kQD 6.2售后服务4 +vV ,jb 6.3关键性仪表及消耗性备品备件4 |N9xL m 6.4安装检查4 1P g 6.5计算机的安装情况检查 4 p!CH 6.6安装确认结论及批准5 BpKgUwf;C 7安

3、装验证内容 5 Px)O&w 7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求5 Ka%kB* 7.1.1评价仪器的安装条件是否符合GMP及供应商提议的要求5 hol54)7$3: 7.1.2起草标准操作规程5 0oi =lV 7.1.3仪器校正5 V/G q 7.2 运行确认（也即功能试验）5 AhARBgf 7.2.1 测试项目和认可标准5 dZ7+Iw;m 7.2.2 验证所需的材料5 oYyeT ,? 7.2.2.1 玻璃仪器设备5 DwUrX5 7.2.2.2 试剂、标准溶液5 hbt8_-c 7.2.2.3 其它辅助设备5 _h&Ehp 7.2.3 软件系统安全性确认(必要

4、时)5 #s1O(rLRl 7.2.4 运行确认的实施6 EWz?/ 7.2.5 运行确认评价及结论7 3Bz0B a 8.性能确认(适用性预试验)7 4?X#d)L( 9.拟订再验证项目及周期8 A:1O:LB=! 10.验证结论 8 hq/Z&!+P 1lf?8 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒

5、填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 _Ywt_h;: 高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，在调研的基础上，公司于 年 月购置的精密仪器，其生产厂为 ，主要用于样品的 分析测试。该仪器 8Bu#&s4 为双泵型高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。应用软件为 ，版本号 。 n4; 2.验证目的 3J?as8 按照 GMP 的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。 _$0i/ 3.2本

6、方案验证依据 ,$mnD) 3.2.1 JJG705-2002 高效液相色谱仪检定规程 u1ggLH!U 3.2.2 高效液相色谱仪操作规程 wtetB)yD 4. 验证工作小组 ypk)y8 组 长 P(:z 姓 名 职务/职称 部门 (X,Ua+_ 2+TCFpv 成 员 8*H_-w 4cRF3$a md t)vQ&:;u 5.验证方案审批 =GLI 5.1 验证方案起草 Yew n 起草部门 签名 日 期 bvuoGG* 设备动力部 年 月 日 WM.JoQ 质管部 年 月 日 F 7qLvh 5.2验证方案会签 =z_3JfO 部门 签 名 日 期 |it&4l 质管部 年 月 日

7、kB 下列文件资料是否齐全，是否符合GMP要求 Ay)q %:qx 序号 文件/资料 编号 存放地 pa 结论： rkhQoYZ 检查人 检查日期 34VyR a 复核人 复核日期 zoUU 6.2售后服务 rQiX7 维修单位： 联系电话： gyH92ck 地址： 传真： QRMn|H 联系人： ZU;0# 检查人 日期 3nuf3) 6.3关键性仪表及消耗性备品备件：见附件2 DDm, _- 检查人 日期 lJr %YlF 6.4安装检查 mY-Z$8r 对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。 8 o8FL& 检查内容 要求 方法 结果 I Vy,A7f 环境 室内不得存放与实

8、验无关的易燃、易爆和强腐蚀性的物质，无强烈的机械震动和电磁干扰。 目测 :NU-C!eT 环境温度 5-35 温湿度仪测 FfY7CQ v 环境相对湿度 20%85% 温湿度仪测 1=#r$H 安装位置 仪器应平稳而牢固地安置在工作台上 按要求安装 L1BpkB 电压 220V22V 电压仪测 Wy#*h, 频率 50Hz0.5Hz 2w3c4K 接地 接地良好 接地电阻表测定 4W9!_:j(j 电源线 与插孔吻合 按要求安装 7tAWPSwf 液体管路 液路管路选材正确，连接处密封良好，检漏合格 按要求安装 zq!2);, _mjz 8 安装的主要软件 (i*1M 文件格式 2IjqT L

9、 安装位置 _p00C 数据文件保存位置 !LIWoa F. 密码复杂性 yr sPth 工作站安装 ,E+e5jh7 6.6安装确认结论及批准 ;uoH+pf 结论：所有物品与检查清单相符，实验室电、气设计安装合理，实验室环境良好，符合仪器安装要求。气、电及管路连接符合供货方的要求。 ZlOPlZ) 仪器安装 。 SF.,sCk 检查人 日期 QyHUuG|g 批准人 日期 Opjt? 7安装验证内容 J puW !I 7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求：见附件3。 9l,Gd 7.1.1评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求 ;Rnbt6Z 查阅设备采购定单、

10、操作手册等，列出设备安装、使用所需条件，包括温度、湿度、通风条件、电路等。检查仪器安装与使用所处的环境条件，是否符合上述要求。检查结果记录于附件4。 % W1y 7.1.2起草标准操作规程(可验证后补充) dUeqH29s 标准操作规程 x65e, 维护保养规程 ;l8w3fDt 校正规程 ym7hk. 7.1.3仪器校正 ,U7hzBj8k 由厂商技术人员现场安装、调试，进行运行确认前的校正。 K|a 7.2 运行确认（功能试验） k,1rOf 7.2.1 测试项目和认可标准 )b-G2 l|% 根据中华人民共和国国家计量检定规程JJG705-2002、中国药典（2005版）附录确定。 X:

11、eZ)? 验证部件 验证项目 合格标准 HwGtLeB 输液泵 流量设定值误差SS 0.5ml/min:5%；1.0ml/min:3%；2.0ml/min:2% TxiJ?sDh* 流量稳定性误差SR 0.5ml/min:3%；1.0ml/min:2%；2.0ml/min:2% 1rKR=To 梯度误差GC： 不超过3 % 3gMlSh# 柱温箱 柱箱温度设定值误差TS 2 LNg1q1 P3 柱箱控温稳定性TC 1 dn5v|dJ 自动进样器 进样量准确度误差 2% F+6ZD5/ 检测器 基线噪声 2105AU K4rr.f6 最小检测浓度 1107g/mL(萘的甲醇溶液) lAGxE-B

12、a 基线漂移 5104AU/h q#qT&QU 波长示值误差 不超过2nm lz*PNTE 波长重复性 优于2nm WG gST 整机性能 定性测量重复性误差 RSD1.5% m=, RfUUd 定量测量重复性误差 RSD3.0% BOWTHKR F同一组测量值的算术平均值(mL/min)。 Q.-iq 输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录。见附件5。 Gw V 7.2.4.2 梯度误差的检定 L;/9Ls, 由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%。将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A

13、溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A，B溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。从B溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci 最大者作为仪器梯度误差。见附件5。 WGH%92 Gci =（Li Lm）/ Lm100% ppAmN0=G 式中：Gci 第i段梯度误差 ( % ) ； 0CPxIF&_ Li 第i段输出信号值（或记录仪读数）平均值； KMUKtbaI Lm 各段输出信号（或记录仪读数）平均值的平均值。 *8z7?= 7.2.4.3 柱温箱柱箱温度设定值误差TS和控温稳定性TC的检

14、定 3;v5D: 将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35和45进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为TS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。 &|)hCJu 柱温箱柱箱温度设定值误差TS和控温稳定性TC的检定原始记录。见附件5。 1Fv8T 7.2.4.4 自动进样器进样量准确度误差的检定 vkJ)FEar 取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50l。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度。 gr

15、rd+_e 自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录。见附件5。 m+?N7 7.2.4.5检测器的检定 zJ;Rt97- 7.2.4.5.1检测器基线噪声和基线漂移的测定 _g-=yBb 取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。 (4# )K2g% 7.2.4.5.2检测器最小检测浓度的测定 joqWh!kv7U 取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，

16、待仪器稳定后取110-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20l，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。公式如下： /prYSRn8 CL=(2NdC)/H OW;Cyh 式中 CL最小检测浓度，g/ml； 6W&_2a7_* Nd基线噪声峰峰高，mm； eCWPhB 6l C 标准溶液浓度，g/ml； z C=a3 H 标准溶液峰峰高，mm。 Ja|1&J. 检测器的检定原始记录。见附件5。 eF q)_ 7.2.4.5.3波长示值误差和重复性检定 eh(m8I 仪器通电稳定后，用注射器将紫外波长标准溶液（波长为235nm、257nm、313nm、350nm）注入检测器样品池

17、，使用仪器光谱扫描功能，分别记录各标准溶液的光谱图，光谱图最大值对应的波长与标准溶液标准波长之差为波长示值误差。 !:3.D, 每个波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。见附件5。 19t|wO 取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm（当选用萘时）或272nm（当选用咖啡因时）,柱温设定为40。开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液进样10l，连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。 h/)_) r.x

18、整机性能的检定原始记录。见附件5。 ,SUToETP 7.2.5 运行确认评价及结论。见附件5。 UzG:ic% 8性能确认(适用性试验)： pQa:pX 使用对照品或供试品，确认仪器性能符合使用要求。对各类不同物质进行验证的方法可以不同，由质量部确定具体验证方法并组织实施。 n3KI+I%nQ 8.1 系统适用性试验： h6:#!Rg 8.1.1 色谱柱的理论板数（n），在选定的色谱条件下，注入 供试品溶液（或内标溶液），记录色谱图，量出供试品或内标物质峰的保留时间tR和半峰宽Wh/2，按n=5.54(tR/Wh/2)2计算出理论板数，符合具体品种项下规定的理论板数。 bHE2,;o 8.1

19、.2 分离度（），按下式计算，应大于.5 GVGlVAo| R=(tR1tR2)/(W2W1) oUZoj2G1 式中：tR1相邻后一峰的保留时间； D8PQ2x tR2相邻前一峰的保留时间； C1kYl0 zR W1、W2此相邻二峰的宽度。 yLE748 8.1.3 拖尾因子（）按下式计算，应在0.951.05之间 tBbOY.VD T=W0.05h/2d1 Mj#-j/x5 式中：W0.05h0.05峰高处的峰宽 -VKS d1峰极大对峰前沿之间的距离 8Me:Yp_Xt 理论板数、分离度、拖尾因子测试结果 Fx.)C# 品种名称 理论板数(n) 分离度(R) 拖尾因子(T) 2WX7nK

20、;I 规定值 实测值 规定值 实测值 规定值 实测值 gIo U 4mq 1.5 0.951.05 cB|KhDk 附原始记录及图谱 CYYkzcc 测试人 日期 r.3/F. 8.2 定量重复性试验 pyLRgD0 g 相对标准差：取 对照品溶液连续进行5次，峰面积相对标准差应2.0。试验结果如下： 3vcO!6Z5 品种 进样次数 峰面积 平均峰面积 偏差 相对标准差 5N%93L 1 3a.kBzus 2 G&Sle 3 0- W( 4 CPNL 94x 5 zZVfj:i8 附原始记录及图谱 &H nKhI 测试人 日期 6Cn+e.j 8.3 性能确认结论及批准（附件5） (V4 i4V 9. 拟订再验证项目及周期 liXdN