ep802613非无菌药品的微生物限度检查特殊微生物的检查中英对照.docx

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ep802613非无菌药品的微生物限度检查特殊微生物的检查中英对照

EP8.0

04/2010:

20613

MICROBIOLOGICALEXAMINATIONOFNON-STERILEPRODUCTS:

TESTFORSPECIFIEDMICRO-ORGANISMS（3）

非无菌药品的微生物限度检查：

特殊微生物的检查

1.INTRODUCTION导言

Thetestsdescribedhereafterwillallowdeterminationoftheabsenceorlimitedoccurrenceofspecifiedmicro-organismsthatmaybedetectedundertheconditionsdescribed.

下述检验方法用于检查在描述的试验条件下特定微生物的定性及限度。

Thetestsaredesignedprimarilytodeterminewhetherasubstanceorpreparationcomplieswithanestablishedspecificationformicrobiologicalquality.Whenusedforsuchpurposes,followtheinstructionsgivenbelow,includingthenumberofsamplestobetaken,andinterprettheresultsasstatedbelow.

检验的主要目的是为了确定是否原料药或制剂符合已建立的微生物限度标准，当用于这一目的时，应按照以下方式（包括取样量），进行并按照下述描述对结果进行分析。

Alternativemicrobiologicalprocedures,includingautomatedmethods,maybeused,providedthattheirequivalencetothePharmacopoeiamethodhasbeendemonstrated.

如果可证明某种试验方法（包括自动化分析法）的效果与药典中的方法等同，该方法可作为另一种供选择的试验方法。

2.GENERALPROCEDURES一般程序

Thepreparationofsamplesiscarriedoutasdescribedingeneralchapter

样品的制备方法参见（

Iftheproducttobeexaminedhasantimicrobialactivity,thisisinsofaraspossibleremovedorneutralisedasdescribedingeneralchapter

如果供试品有抗微生物活性，按照（

Ifsurface-activesubstancesareusedforsamplepreparation,theirabsenceoftoxicityformicro-organismsandtheircompatibilitywithinactivatorsusedmustbedemonstratedasdescribedingeneralchapter

如果样品的制备过程中使用了表面活性剂，其必须满足（，对微生物无毒性并且可与灭活剂兼容。

3.GROWTH-PROMOTINGANDINHIBITORYPROPERTIESOFTHEMEDIA,SUITABILITYOFTHETESTANDNEGATIVECONTROLS培养基中的生长促进作用和生长抑制作用，试验方法的适应性和阴性对照试验

Theabilityofthetesttodetectmicro-organismsinthepresenceoftheproducttobetestedmustbeestablished.Suitabilitymustbeconfirmedifachangeintestingperformance,ortheproduct,whichmayaffecttheoutcomeofthetestisintroduced.

该试验方法要有一定的检测微生物的能力，如果影响试验结果的操作或被测物品发生变化，该变化可能会影响试验结果时，该试验方法的适应性必须确认。

3-1.PREPARATIONOFTESTSTRAINS试验用菌株的制备

Usestandardisedstablesuspensionsofteststrainsorpreparethemasstatedbelow.Seedlotculturemaintenancetechniques（seed-lotsystems）areusedsothattheviablemicro-organismsusedforinoculationarenotmorethan5passagesremovedfromtheoriginalmasterseed-lot.

使用标准稳定的试验用菌株的菌悬液或按照以下方法制备，使用种子批传代次数不得超过5代。

3-1-1.Aerobicmicro-organisms.Groweachofthebacterialteststrainsseparatelyincaseinsoyabeandigestbrothoroncaseinsoyabeandigestagarat30-35°Cfor18-24h.GrowtheteststrainforCandidaalbicansseparatelyonSabouraud-dextroseagarorinSabouraud-dextrosebrothat20-25°Cfor2-3days.

3-1-1．需氧菌将试验用菌株分别接种于胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基中30-35℃培养18-24 h。

将白色念珠菌试验菌株接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基中20-25℃ 培养 2-3 天。

–StaphylococcusaureussuchasATCC6538,NCIMB9518,CIP4.83orNBRC13276;

金黄色葡萄球菌：

例如ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 或 NBRC 13276; 

–PseudomonasaeruginosasuchasATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118orNBRC13275;

铜绿假单胞菌：

例如ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 o或 NBRC 13275; 

–EscherichiacolisuchasATCC8739,NCIMB8545,CIP53.126orNBRC3972;

大肠埃希菌：

例如ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 或 NBRC 3972; 

–Salmonellaentericasubsp.entericaserovarTyphimurium,suchasATCC14028or,asanalternative,Salmonellaentericasubsp.entericaserovarAbonysuchasNBRC100797,NCTC6017orCIP80.39;

沙门氏菌：

例如ATCC 14028 或NBRC 100797, NCTC 6017 或CIP 80.39; 

–CandidaalbicanssuchasATCC10231,NCPF3179,IP48.72orNBRC1594.

白色念珠菌：

例如ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 或 NBRC 1594. 

Usebufferedsodiumchloride-peptonesolutionpH7.0orphosphatebuffersolutionpH7.2tomaketestsuspensions.Usethesuspensionswithin2horwithin24hifstoredat2-8°C.

使用pH为7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH为7.2的磷酸盐缓冲液制备试验用菌悬液。

应在2小时内使用菌悬液，如果保存在2-8 ℃条件下应在24小时内使用。

3-1-2.Clostridia.UseClostridiumsporogenessuchasATCC11437（NBRC14293,NCIMB12343,CIP100651）orATCC19404（NCTC532orCIP79.03）orNBRC14293.Growtheclostridialteststrainunderanaerobicconditionsinreinforcedmediumforclostridiaat30-35°Cfor24-48h.AsanalternativetopreparingandthendilutingdownafreshsuspensionofvegetativecellsofCl.sporogenes,astablesporesuspensionisusedfortestinoculation.Thestablesporesuspensionmaybemaintainedat2-8°Cforavalidatedperiod.

3-1-2 梭菌使用梭状芽孢杆菌，例如ATCC 11437 （NBRC 14293,NCIMB 12343, CIP 100651） 或 ATCC 19404 （NCTC 532 或 CIP 79.03） 或 NBRC 14293，在厌氧条件下将梭菌试验用菌株接种于增菌培养基中，在30-35℃条件下培养24-48 小时。

将新鲜的有活性的梭状芽孢杆菌孢子悬液稀释后用于接种。

稳定的孢子悬液可保存在2-8 ℃条件下，在经过验证的贮存期内使用。

3-2.NEGATIVECONTROL阴性对照试验

Toverifytestingconditions,anegativecontrolisperformedusingthechosendiluentinplaceofthetestpreparation.Theremustbenogrowthofmicro-organisms.Anegativecontrolisalsoperformedwhentestingtheproductsasdescribedinsection4.Afailednegativecontrolrequiresaninvestigation.

为检测试验条件是否符合要求，取试验用稀释剂代替供试品做一阴性对照试验，阴性对照试验应无微生物生长。

按照第四部分检测供试品时，也要做一阴性对照试验。

当阴性对照试验结果不符合要求时，需要进行偏差调查。

3-3.GROWTHPROMOTIONANDINHIBITORYPROPERTIESOFTHEMEDIA培养基的生长促进作用和生长抑制作用

Testeachbatchofready-preparedmediumandeachbatchofmediumpreparedeitherfromdehydratedmediumorfromingredients.

每一批成品培养基，以及由脱水培养基或由规定的处方配制的培养基都应进行适用性检查。

VerifysuitablepropertiesofrelevantmediaasdescribedinTable

按照表（，检测相关培养基的特性。

Table–Growthpromoting,inhibitoryandindicativepropertiesofmedia

培养基的生长促进作用、生长抑制作用和指示作用

Medium 培养基

Property 特性

Test strains 试验菌株

Test for bile-tolerant gram-

negative bacteria 

耐胆盐革兰氏阴性菌的检测

Enterobacteria enrichment broth- Mossel 

肠道菌增菌肉汤培养基

Growth promoting 生长促进

E. coli 大肠埃希菌

P. aeruginosa 铜绿假单胞菌 

Inhibitory 生长抑制 

S. aureus 

金黄色葡萄球菌

Violet red bile glucose Agar 

紫红胆汁葡萄糖琼脂培养基 

Growth promoting  + indicative 生长促进和指示作用 

E. coli 大肠埃希菌P. aeruginosa 铜绿假单胞菌

Test for Escherichia Coli 

大肠埃希菌的检测

MacConkey broth 

麦康凯肉汤培养基

Growth promoting 生长促进

E. coli 

大肠埃希菌

Inhibitory 生长抑制

S. aureus 

金黄色葡萄球菌

MacConkey agar 

麦康凯琼脂培养基 

Growth promoting + indicative 

生长促进和指示作用

E. coli 

大肠埃希菌

Test for Salmonella 

沙门氏菌的检测

Rappaport Vassiliadis Salmonella enrichment Broth 

沙门氏菌琼脂培养基

Growth promoting 生长促进 

Salmonella enterica subsp.enterica serovar 

Typhimurium or  Salmonella en-terica  subsp. enterica serovar  Abony 沙门氏菌

Inhibitory 生长抑制

S. aureus 

金黄色葡萄球菌

Xylose, lysine, deoxycholate 

agar  

木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂培养基

Growth promoting + indicative 

生长促进和指示作用 

Salmonella enterica subsp.enterica serovar 

Typhimurium or  Salmonella enterica  subsp. enterica serovar  Abony 沙门氏菌

Inhibitory 指示作用

E. coli 

大肠埃希菌

Test for 

Pseudomonas Aeruginosa 

铜绿假单胞菌的检测

Cetrimide agar 

溴棕三甲铵琼脂培养基

Growth promoting 生长促进 

P. aeruginosa 铜绿假单胞菌

Inhibitory 生长抑制

E. coli 大肠埃希菌

Test for     

Staphylococcusaureus 

金黄色葡萄球菌的检测

Mannitol salt agar 

甘露醇氯化钠琼脂培养基

Growth promoting + indicative 

生长促进和指示作用

S. aureus 

金黄色葡萄球菌

Inhibitory 生长抑制剂 

E. coli 

大肠埃希菌

Test for clostridia  梭菌的检测

Reinforced medium for clostridia  增菌培养基

Growth promoting 生长促进

Cl. Sporogenes 梭状芽孢杆菌

Columbia agar 

哥伦比亚琼脂培养基

Growth promoting 生长促进

Cl. Sporogenes 梭状芽孢杆菌

Test for Candida  albicans 

白色念珠菌的检测 

Sabouraud dextrose Broth 

沙氏葡萄糖肉汤培养基 

Growth promoting 生长促进 

C. albicans 白色念珠菌 

Sabouraud dextrose agar  

沙氏葡萄糖琼脂培养基

Growth promoting + indicative 生长促进和指示作用

C. albicans 白色念珠菌

Testforgrowthpromotingproperties,liquidmedia:

inoculateaportionoftheappropriatemediumwithasmallnumber（notmorethan100CFU）oftheappropriatemicro-organism.Incubateatthespecifiedtemperaturefornotmorethantheshortestperiodoftimespecifiedinthetest.Clearlyvisiblegrowthofthemicro-organismcomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.

液态培养基的促生长能力检查：

将适量的微生物（<100 CFU）接种于培养基中,在指定温度下培养，培养时间应小于微生物试验时规定的最短时间。

微生物的生长清晰可见，并且与已批准合格的培养基中微生物的生长情况类似，说明该液体培养基符合要求。

Testforgrowthpromotingproperties,solidmedia:

performthesurface-spreadmethod,inoculatingeachplatewithasmallnumber（notmorethan100CFU）oftheappropriatemicro-organism.Incubateatthespecifiedtemperaturefornotmorethantheshortestperiodoftimespecifiedinthetest.Growthofthemicro-organismcomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.

固态培养基的促生长能力检查：

使用表面涂布法，将适量的微生物（<100 CFU）接种于每个平皿上，在指定温度下培养，培养时间应小于微生物试验时规定的最短时间。

微生物的生长清晰可见，并且与已批准合格的培养基中微生物的生长情况类似，说明该固培养基符合要求。

Testforinhibitoryproperties,liquidorsolidmedia:

inoculatetheappropriatemediumwithatleast100CFUoftheappropriatemicro-organism.Incubateatthespecifiedtemperaturefornotlessthanthelongestperiodoftimespecifiedinthetest.Nogrowthofthetestmicro-organismoccurs.

固体或液体培养基的抑制能力检查：

将适量的微生物（>100 CFU）接种于培养基中，在指定温度下培养，培养时间应大于微生物试验时规定的最长时间，微生物不生长。

Testforindicativeproperties:

performthesurface-spreadmethod,inoculatingeachplatewithasmallnumber（notmorethan100CFU）oftheappropriatemicro-organism.Incubateatthespecifiedtemperatureforaperiodoftimewithintherangespecifiedinthetest.Coloniesarecomparableinappearanceandindicationreactionstothosepreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmedium.

培养基中指示能力的检查：

使用表面涂布平皿法，将适量的微生物（<100 CFU）接种于每个平皿上，在指定温度下培养，培养时间应在微生物试验时规定的时间范围内。

菌落的外观和指示反应与已批准合格的培养基的指示反应结果相似，说明该培养基的指示作用符合要求。

3-4.SUITABILITYOFTHETESTMETHOD试验方法的适应性

Foreachproducttobetested,performthesamplepreparationasdescribedintherelevantparagraphinsection4.Addeachteststrainatthetimeofmixing,intheprescribedgrowthmedium.Inoculatetheteststrainsindividually.Useanumberofmicro-organismsequivalenttonotmorethan100CFUintheinoculatedtestpreparation.

对于每一种供试品按照第四部分中相关的方法制备，将每种试验用菌株加入到指定的培养基中，每种试验用菌株分别接种。

接种用微生物的量应小于100 CFU。

Performthetestasdescribedintherelevantparagraphinsection4usingtheshortestincubationperiodprescribe