药用植物组织培养期末复习.docx

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药用植物组织培养期末复习

药用植物组织培养期末复习

名词解释

植物细胞组织培养：

植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术

细胞全能性：

每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型的细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株

脱分化：

由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程

再分化：

脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官

外植体：

由活体植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。

包括各种器官、组织、细胞或原生质体等

愈伤组织：

原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。

消毒：

指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用

灭菌：

是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

接种：

在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。

MS培养基：

它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。

是目前应用最广泛的培养基。

特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。

胚胎培养：

指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。

包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

胚乳培养：

是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。

植物离体授粉：

指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。

花药培养：

是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。

花粉培养：

是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。

离体繁殖：

指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其在短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。

是工厂化育苗的技术基础。

看护培养法：

是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

平板培养法：

是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

细胞悬浮培养：

是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。

初始植板密度：

单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上的最初细胞密度。

原生质体融合：

也称体细胞杂交，就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合，像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象。

原生质体：

是指除去了细胞壁后的裸露的植物细胞。

人工种子：

亦称体细胞种子，任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。

无病毒苗：

是指不含该种植物的主要危害病毒的苗木，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

种质保存：

是利用天然或人工创造的适宜环境，保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。

增殖率：

能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。

植板率（%）=每个平板形成的细胞团数/每个平板接种的细胞总数

年生产量（Y）:

决定于每瓶苗数（m）、每周期增殖倍数（X）和年增殖周期数（n），Y=mXn

植物次生代谢产物：

植物中一大类并非植物生长发育所必须的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性。

次生产物在植物中的合成与分解过程称为次生代谢

填空

1）根据培养的材料，植物组织培养分：

离体根培养、茎尖培养、叶培养、花与果实培养、胚胎培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养等类型。

2）植物组织培养的发展分为三个阶段：

探索阶段、奠基阶段和快速发展阶段。

3）1902年，Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说，1934年，White出版了《植物组织培养手册》从而使植物组织培养为一门新兴学科。

4）培养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分、③植物生长调节物质、④水、⑤天然物质、⑥琼脂、⑦活性炭等。

5）培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5%常用3%。

6）糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的  碳源 ，而且还能维持培养基渗透压。

7）培养基灭菌一般在0.1—0.15MPa的压力下，锅内温度达121℃，维持20min。

补充：

1、组织培养实验室必要的设备有   超净工作台、   高压灭菌器 、  空调机  、   天平 、 显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等。

2、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。

3、驯化的目的：

 在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试管苗健壮，提高苗的移裁成活率  。

★4、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值

高：

有利于根的形成和愈伤组织的形成；

低：

有利于芽的形成。

5、选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。

6、诱导胚状体比诱导芽的优点：

（1）数量多、

（2）速度快、（3）结构完整。

7、试管苗的生态环境：

高温且恒温、高湿、弱光、无菌。

★8、筛选培养基的方法：

单因子试验法、多因子试验法、光谱实验法

★9、植物培养技术：

灭菌、接种、培养、驯化四个环节

★10、试管苗的驯化注意：

基质、温、光、水、肥、气的综合管理

11、绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段。

★12、愈伤组织形成大致经历诱导期、分裂期和分化期三个时期。

13、使用植物生长调节物质时要注意：

种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值。

★14、愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式。

15、组织培养细胞再分化包括四个水平：

细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化（器官发生）和植株水平的分化

16、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。

★17、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。

前者主要是对茎尖长度不超过0.1mm，最小只有几十微米的茎尖进行培养，目的是获得无病毒植株；后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是离体快繁。

18、不定芽产生的途径：

一是从外植体上直接产生

二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生。

19、离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。

20、在离体叶培养中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织的形成

21、离体胚的培养分为二种类型：

成熟胚培养和幼胚培养。

★22、胚珠培养分二类：

受精胚珠的培养和未受精胚珠的培养。

受精胚珠培养目的一是打破种子的休眠；二是挽救胚的发育，以获得杂交种。

未受精胚珠培养的目的是获得单倍体植株。

23、子房培养分授粉子房培养和未授粉子房的培养。

前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是获得单倍体植株。

24、离体授粉的类型有离体柱头授粉、离体子房授粉、离体胚珠授粉。

★25、离体胚培养方法：

成熟胚和幼胚培养

26、胚珠培养的培养基：

Nitsch或N5,B5,MS，子房培养的培养基：

N6,MS

27、花药和花粉培养的共同特点是利用花粉（小孢子）染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。

28、花药和花粉培养时，花粉发育的最适宜时期是单核中、晚期（单核靠边期）。

29、MS和H培养基适合双子叶植物花药培养；B5培养基适合豆科和十字花科花药培养；N6培养基适合禾谷类作物的花药培养。

30、花药培养前的预处理:

低温冷藏是最常用的方法。

31、压片染色法是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。

32、花药培养包括：

选择材料-消毒-接种培养-愈合组织生成-分化出单倍体植株。

33、花粉的四大发育途径包括：

营养细胞发育、生殖细胞发育、营养和生殖细胞同时发育及花粉均等分裂发育

★34、花粉培养大致过程包括：

花粉的分离-预处理-培养过程

35、花药培养一般选择花粉的单核期进行接种

36、较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织；较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗

37、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103个。

★38、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。

★39、细胞悬浮培养主要应用于植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。

40、由植物叶片分离单细胞的方法有机械法和酶解法。

★41、细胞悬浮培养方法：

成批培养；连续培养

★42、连续培养的种类：

（1）半连续培养；

（2）连续培养

★43、连续培养的方法:

（1）浊度恒定法;

（2）化学恒定法

★44、原生质体的分离方法有机械分离法和酶法分离法。

45、原生质体培养基常用的渗透剂是甘露醇和山梨醇。

★45、原生质体的纯化方法有：

沉降法、漂浮法和界面法。

★46、原生质体活力的测定：

形态识别；染色识别。

★47、原生质体融合的方法：

无机盐诱导融合；高pH高钙离子法；PEG法；聚乙二醇与高pH高钙相结合的诱导融合；电融合技术

★48、杂种细胞的筛选与鉴定：

互补选择；机械分离杂种细胞法；双荧光标记选择法

★49、杂种植株的鉴定：

形态学鉴定；细胞学观察；DNA内切图谱分析；同工酶分析

50、原球茎发生型是兰科植物特有的一种快繁方式。

51、离体快繁商业化生产应注意的问题是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黄化。

52、根据繁殖体的类型人工种子可分为两类：

一类是体细胞胚人工种子；另一类是非体细胞胚人工种子。

53、人工种子包裹方法离子交换法；干燥法；冷却法。

54、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。

★55、通过茎尖培养脱毒时，常以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.3—0.5mm）作外植体较合适。

56、无病毒苗的保存分：

隔离保存和长期保存两种方法。

57、种质保存分为原生境保存和非原生境保存两种方式；

★58、超低温保存冷冻处理的方法包括：

快冻法、慢冻法、预冻法和干冻法四种方法；

59、预冻法即分步冷冻法分为：

两步冷冻法和逐级冷冻法两种方式；

★60、冷冻保存后细胞和器官最基本的活力检测方法是再培养法。

61、种质资源离体保存方法有两种：

限制生长保存和超低温保存。

简答

简述植物组织培养的理论依据？

植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。

植物组织培养有哪些特点？

（1）培养条件可以人为控制

（2）生长周期短，繁殖率高

（3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制

植物组织培养的分类？

（1）根据培养对象不同：

组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等；

（2）根据培养物培养过程：

初代培养、继代培养；

（3）根据培养基的物理状态：

固体培养、液体培养。

植物组织培养主要应用于哪些方面？

（1）快速繁殖：

运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株

（2）种苗脱毒：

针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可有效地培育出大量的无病毒种苗

（3）培育和创制新品种：

利用组织培养可以克服远缘杂交的不亲和，从而育成一些罕见的新物种

（4）大量生产次生代谢物质：

可以通过植物细胞培养获得生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物，其中有多种次生物质的含量在人工培养时已达到或超过亲本植物的水平

（5）植物种质资源的离体保存：

植物组织培养结合超低温保存技术，可给植物种质保存带来一次大的飞跃。

因为保存一个细胞就相当于保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要经常更新。

（6）人工种子：

人工种子繁殖速度快；固定杂种优势；植株抗逆性强；取代天然种子，节约粮食；为生物工程技术应用于生产提供桥梁；使自然条件下难结实或种子昂贵的材料能快速繁殖；便于贮藏和运输，适合机械化播种；利于工厂化生产。

一般组织培养的操作工序：

（1）培养器皿的清洗

（2）培养基的配制、分装和高压灭菌

（3）无菌操作——材料的表面灭菌和接种

（4）将培养物放到培养室培养

（5）试管苗的驯化、移栽和初期管理

如何配制MS培养基？

（1）配制母液：

一般母液配成比所需浓度高10-100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

（2）配制方法：

①将母液按顺序摆放

②取适量的蒸馏水加入配制容器中

③按需要量依次取母液及生长调节物质

④加入蔗糖（30g/L）溶解

⑤定容

⑥调pH值

⑦加琼脂（6-10g/L），完全融化后，分装至培养瓶中，封口

⑧高压灭菌

如何对外植体进行表面消毒？

（1）将需要的材料用水洗干净

（2）表面灭菌：

用70%酒精浸30-60s左右

（3）灭菌剂处理：

0.1%升汞10min或在2%次氯酸钠液中浸泡20-25min

（4）用无菌水冲洗3-5次左右

在培养基中加入活性炭有什么作用？

（1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响

（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根

（3）对形态发生和器官形成有良好的效应

组织培养中常用的灭菌方法？

分为物理的和化学两类

（1）物理方法:

如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤和大量无菌水冲洗等措施

（2）化学方法:

使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。

——外植体进行表面消毒

（1）将需要的材料用水洗净

（2）表面灭菌：

用70%酒精浸30-60s左右

（3）灭菌剂处理：

0.1%升汞10min或在2%次氯酸钠液中浸泡20-25min

（4）用无菌水冲洗3-5次左右

胚胎培养的意义

①克服远缘杂种的不育性

②使胚胎发育不完全的植株获得后代

③缩短育种年限，提高育种效率

简述离体授粉的程序

（1）确定开花、花药开裂及授粉时间

（2）去雄后将花蕾套袋隔离

（3）制备无菌子房或胚珠

（4）制备无菌花粉

（5）胚珠或子房的试管内授粉

比较花粉培养与花药培养

相同点：

（1）利用小孢子染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株

（2）成苗途径相同，即有胚状体成苗和愈伤组织再分化成苗两条途径

不同点：

（1）花粉培养属于细胞培养，花药培养属于器官培养

（2）花粉培养没有药壁组织干扰；可计数小孢子产胚率；可观察雄核发育的全过程;单倍体产量高,但技术更复杂

简述花粉分离方法

（1）自然散落法（漂浮培养散落小孢子收集法）:

将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。

（2）挤压法:

在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。

（3）机械游离

A磁搅拌法：

用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来；

B超速旋切法：

通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来

平板培养的基本技术

（1）单细胞悬浮液的制备

（2）悬浮细胞密度的调制

（3）琼脂培养基配制:

0.7%琼脂条件培养基

（4）平板制作

（5）培养

酶解法分离原生质体时使用酶的种类及特点。

1）纤维素酶类：

从绿色木霉中提取的一种复合酶制剂,可降解纤维素，得到裸露的原生质体。

2）半纤维素酶类：

降解半纤维素为单糖或单糖衍生物。

3）果胶酶类：

从根霉中提取，降解细胞间的果胶质，把细胞从组织内分离出来。

4）崩溃酶：

一种粗制酶。

5）蜗牛酶：

主要用于分离小孢子（花粉母细胞和四分体细胞）的原生质体

植物脱毒的意义

1）能够有效地保持优良品种的特性

2）快速繁殖品种，使优良品种迅速应用

3）生产无病毒种苗，防止品种退化

4）节约耕地，提高农产品的商品率

5）便于运输

试管苗增殖率的估算

增殖率：

植物快速繁殖中间繁殖体的的繁殖率

估算试管苗的繁殖量，是以苗、芽或未生根嫩茎为单位，一般以苗或瓶为计算单位

年生产量（Y）决定于每瓶苗数（m）、每周期增殖倍数（X）和年增殖周期数（n）

公示Y=mXn

提高有用物质生产效率的技术因素有哪些？

（1）筛选高产细胞系

（2）采用固相细胞培养系统

（3）培养条件的影响

（4）培养基中添加前体

（5）培养基中生长调节剂的作用

（6）二步培养法

简述原生质体作为遗传操作和生理生化研究的材料有何特点？

（1）没有细胞壁，有利于体细胞融合、体细胞杂交、基因转移和单细胞培养。

（2）原生质体能比较容易摄取外来的遗传物质。

原生质体培养的方法有哪些？

（1）饲养层培养

（2）液体浅层培养：

将含有一定密度的原生质体的液体培养基在培养皿底部铺一薄层，厚1mm左右，用封口膜封口后进行培养

（3）双层培养法：

在培养皿底部先铺一层琼脂固化培养基在上面滴加原生质体悬浮液

（4）平板法培养

（5）微悬滴法培养：

用滴管将原生质体悬浮液分散滴在培养皿底部，原生质体间容易发生粘连，影响生长发育，必须注意防止失水干燥

植物脱毒的主要方法有哪些？

其主要原理是什么？

（1）茎尖培养脱毒：

病毒在植物体内的分布并不均匀，越靠近茎端病毒的感染程度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少

（2）愈伤组织培养脱毒：

通过植物的器官和组织的培养，脱分化诱导产生愈伤组织，再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗

（3）珠心胚培养脱毒：

病毒一般不通过种子传播，由珠心细胞发育成的胚再生植株是无毒的，并具有与母本相同的遗传特性。

（4）茎尖微体嫁接脱毒：

将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。

（5）热处理脱毒：

一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下会钝化失活

（6）化学处理脱毒：

抑制或杀死病毒

准备室（通用实验室）

缓冲室

洗涤室不能形成通风

灭菌室

基本实验室无菌操作室

培养室

实验室的组成

细胞生物学实验室

辅助实验室温室

生化分析

次生代谢产物举例：

萜类或类萜、酚类、含氮次级化合物（生物碱、氨类、非蛋白氨基酸、生氰苷）

工厂化生产的工艺流程：

茎尖——表面消毒——接种诱导培养基——茎尖生长——病毒检测鉴定——培养无根小植株——培养生根——完整小植株——炼苗20—25天——移栽成活

原生质体培养的方法有哪些？

（1）饲养层培养

（2）液体浅层培养：

将含有一定密度的原生质体的液体培养基在培养皿底部铺一薄层，厚1mm左右，用封口膜封口后进行培养

（3）双层培养法：

在培养皿底部先铺一层琼脂固化培养基在上面滴加原生质体悬浮液

（4）平板法培养

（5）微悬滴法培养：

用滴管将原生质体悬浮液分散滴在培养皿底部，原生质体间容易发生粘连，影响生长发育，必须注意防止失水干燥

体细胞胚发生特点：

1）两极性

2）生理隔离

3）遗传稳定性

4）重演受精卵形态发生的特性

体细胞胚的发生方式：

直接发生：

从原外植体上不经愈伤组织阶段发育而成

间接发生：

从愈伤组织、悬浮细胞或已形成的胚状体上发育而成

体细胞胚与合子胚的异同点

1）体细胞胚起源于愈伤组织的表皮细胞或胚性愈伤组织团的体细胞胚胎早期，可观察到与合子胚发生相似的细胞团聚体结构，分裂程序也是从辐射对称转变为两侧对称。

但其发育环境与合子胚截然不同，其早期分裂并不遵循一个固定格局或方式——体细胞胚胎发生与合子胚发育类似

2）体细胞胚一开始就表现出固定的极性和不对称分裂

3）体细胞胚的图式形成不如合子胚精确规范，其发生频率、转换率生活力低于合子胚，畸形胚高于合子胚

4）体细胞胚在发育上也往往不同步化，在任何时间内都可能处于不同发育阶段的体细胞胚胎

5）生理上，体细胞胚的体积远远小于合子胚，发育后期干物质积累少，蛋白质合成量和多糖含量偏少，组成也明显不同

6）体细胞胚发育后期没有休眠期，耐脱水能力也不同

7）体细胞胚胎成熟时贮藏成分的合成模式和数量与种胚不同，不积累或很少积累贮藏蛋白

8）体细胞胚胎的周围环境与合子胚大为不同，不仅营养和气体条件有异，也缺乏对成熟胚起保护作用的珠被，不能形成种皮

9）体细胞胚也可经诱导进入静止期，制成人工种子，但与种胚相比，一般萌发率极低

10）体细胞胚与合子胚都含有一整套遗传信息，都可以发育成新一代生物个体。

获得体细胞胚是生产人工种子的基础，其发生频率的高低、胚的质量和体细胞胚发生的同步控制是生产人工种子的关键

人工种子的优点

（1）繁殖速度快

（2）固定杂种优势

（3）植物抗逆性高

（4）取代天然种子，节约粮食

（5）为基因工程技术应用于生产提供桥梁

（6）使自然条件下不易结实或种子昂贵的材料能快速繁殖和保存

（7）在人工种子的包裹材料中加入各种生长调节物质、菌肥、农药等，可以人为的影响控制作物的生长发育和抗性

（8）可以保存及快速繁殖脱病毒苗，克服某些植物由于长期营养繁殖所积累的病毒

（9）与试管苗相比，成本低，运输方便，适合机械化播种与工业化生产

手工选择：

无菌条件下逐个筛选

过筛选择：

胚性细胞悬浮培养液分别通过不同孔径过筛培养，再过滤

物理方法不连续密度梯度离心

渗透压分选

体细胞胚的调控植物胚性细胞分级仪筛选

低温处理同步化

饥饿法

化学方法阻断和解除法

有丝分裂阻断

论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？

并列举常见的种类

（1）生长素类：

1主要用于诱导形成愈伤组织，促进细胞脱分化

2促进细胞伸长

3诱导根的分化，促进生根

如：

IAA（吲哚乙酸）；NAA（萘乙酸）；IBA（吲哚丁酸）；2,4—D（2,4—二氯苯氧乙酸）

NAA诱发根的能力较弱，诱发的根少而粗，但对某些植物，如杨树等确有较好的效果

IBA在根的诱导和生长上作用强烈，诱发的根多而长，特别有效，但也不可一概而论

2,4—D对愈伤组织的增殖最有效，特别是单子叶植物

（2）细胞分裂素类：

1促进细胞分裂与扩大

2抑制根的分化

3抑制衰老，减少叶绿素分解，有保鲜效果

4打破种子休眠

5诱导芽的分化促进侧芽萌发生长

如：

6—BA（6—苄基腺嘌呤）、Kt（激动素）、Zt（玉米素）等

花药培养的大致过程

1）预处理:

低温冷藏是花药培养最常用的方法。

另有离心、低剂量辐射、化学试剂处理

2）表面消毒：

因为未开放的花蕾中的花药为花被包裹，本身处于无菌状态，可仅用70％酒精棉球将花的表面擦洗。

也可按对其他器官消毒处理方法进行，先用70％的酒精浸30-60s，用0.1％升汞液消毒lOmin或2%的次氯酸钠溶液浸泡20-25min，然后用无菌水冲洗3～5次。

将花蕾剪下放入水中，在冰箱4～5℃下保持3～4d

3）接种：

接种时用解剖刀、镊子小心剥开花蕾，取出花药，注意去掉花丝，然后散落接种到培养基上，一个l0ml的试管可接种20个花药。

培养温度在23～28℃左右，每天11～16h的光照，光照强度2000～4000Lx。

脱分化培养时，可用MS+2,4-D的培养基或N6+2,4-D的培养基