药学专业毕业论文开题报告.docx

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药学专业毕业论文开题报告

中医药大学药学院

本科毕业研究课题开题报告

课题名称：

连花解毒颗粒急性毒性及解热实验研究

班级：

07药学

学生姓名：

林波波

导师所在单位：

军区总医院药学科

研究方向：

药理实验研究

导师姓名：

周欣旭

职称/职务：

主管药师药师

课题研究起止时间：

2011年1月5日至2011年5月11日

填表时间：

2011年1月23日

说明

一、本计划由学生本人在向导师小组作过开题报告后填写，一

式一份，最后经系（院）及实习单位批准后，留系部存档。

二、开题报告一般要求在课题研究前完成。

三、计划批准后不得随意更改。

四、在课题执行过程中导师检查两次。

检查情况及变动情况应记

录在表。

一课题研究的目的与意义、国外研究的发展概况和趋势

1课题研究的目的与意义

连花解毒颗粒由金银花、牛蒡子、芦根等多味中药提取制成，该处方是我院中医科专家长期在临床使用的验方，具有清热解毒，凉血利咽，宣肺化痰，止咳平喘的功效。

临床适用于风热感冒，温病初起，流感、上呼吸道感染、咽炎、支气管炎、腮腺炎、斑疹等病症治疗[1－5]。

中医理论认为：

由于风热之邪犯表，则热郁肌肤腠理，卫表失和，故见身热较著，微恶风，汗泄不畅等症；风热上扰则头胀痛；风热之邪上犯则咽燥或咽喉红肿疼痛，口渴欲饮、鼻塞、流黄浊涕。

中医的“毒”含义甚广，清热解毒中药所解之的“毒”为火热壅盛所致的“热毒”及“火毒”，主要用于温热病及热毒炽盛症。

随着现代医学的不断发展，清热解毒中药所解之“毒”不仅包括“外源性之毒”（细菌、病毒、毒素），还包括氧自由基和细胞因子过度释放等“源性之毒”[6]。

连花解毒颗粒所含主药均为清热解毒中药的典型代表，利用动物发热模型对发热过程进行模拟，从而对解热作用进行进一步研究。

本课题还对药物的急性毒性进行了考察，为临床安全用药提供了实验数据和理论基础。

2国外研究的发展概况和趋势

目前，国外研究药物急性毒性的方法有很多，经典的有半数致死量试验（50%lethaldose，LD50）、最大给药量试验等，除此之外，还有限量试验、近似致死剂量实验、扩展试验、固定计量法、剂量累积试验等。

中药新药中应用最多的是半数致死量和最大给药量试验。

《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》规定未在国上市的由中药、天然药物组成的非注射给药的复方制剂，如该复方制剂处方组成符合中医药理论，有一定的临床应用经验，一般情况下，可采用一种动物，按临床给药途径进行急性毒性反应的观察。

本课题选用啮齿类动物小鼠为实验动物，采用口服给药方式，对连花解毒颗粒进行急性毒性反应的研究。

发热是清热药最主要的适应症之一，解热作用是清热药的一个重要共性。

在实验中可以采用多种方法来引起实验动物发热，如细菌或细菌产物、造成无菌炎症、化学药物、刺激丘脑体温调节中枢及暴露于高热坏境等，这些发热模型均可用于解热实验研究，如目前国外常用的有注射腐败枯草浸液、角叉菜胶、牛乳或蛋白胨、加热杀死的革兰阴性菌（大肠杆菌、伤寒或副伤寒杆菌、痢疾杆菌）菌液、伤寒副伤寒菌苗、啤酒酵母、2,4—二硝基苯酚等发热方法研究中药的解热作用。

为了进行机制分析或特殊研究目的，还可选用生致热原生成及发热试验、微量PGE脑室或下丘脑注射致热试验、LipidA、IL-1、干扰素及TNF性发热试验等[7]。

本课题选用啮齿类动物大鼠为实验动物，拟采用角叉菜胶为发热模型致热源，皮下注射可于局部产生强烈的炎症反应，此炎症的形成主要与其诱导前列腺素生物合成及释放有关，可引起一个持续炎症反应，并激活巨噬细胞引发发热。

因其来源不同，其致热作用有些差异，故于正式实验前宜先做预试验，以选择适宜的种类、浓度与剂量，此外在预实验阶段观察大鼠体温变化全过程。

二主要研究容

本课题采用啮齿类动物大鼠和小鼠以口服给药方式，对连花解毒颗粒进行以下两个方面进行研究：

（一）连花解毒颗粒急性毒性反应的研究

（二）连花解毒颗解热药效学的研究

三主要研究方案

1连花解毒颗粒的急性毒性实验

中药新药审评的技术要求规定，当受试药物的毒性很低，或者因浓度或体积的限制，无法测出LD50时，可仅提供最大给药量试验的结果,测定其能达到人用量的多少倍，对药物安全性进行评估，以耐受人用量口服100倍以上为安全[8]。

1.1溶液的配制与预实验

1.1.1溶液的配制

连花解毒颗粒供试品1的制备：

取连花解毒颗粒125.0g溶于100mL水中，搅拌均匀即得混悬药液，此作为连花解毒颗粒供试品1溶液（相当于人临床用量100倍）。

连花解毒颗粒供试品2的制备：

取连花解毒颗粒188.0g溶于100mL水中，搅拌均匀即得混悬药液，此作为连花解毒颗粒供试品2溶液。

1.1.2预实验方法：

1.1.2.1选择体重约20g的健康小鼠10只，雌雄各半，实验前禁食不禁水12h。

每只小鼠按100g/kg/d量于12h给予灌胃供试品1溶液2次，灌胃体积为0.4mL/10g，给药后连续观察7天。

如果小鼠全部存活，则采用最大给药量法进行实验，如果小鼠部分或全部死亡则采用LD50的测定。

1.1.2.2选择体重约20g的健康小鼠10只，雌雄各半，实验前禁食不禁水12h。

每只小鼠按150g/kg/d量于12h给予灌胃供试品2溶液2次，灌胃体积为0.4mL/10g，给药后连续观察7天。

1.2最大给药量法进行实验

选择体重约20g的健康小鼠48只，雌雄各半，分成两组，每组24只，实验前禁食不禁水12h。

实验组每只小鼠按150g/kg/d量于12h给予灌胃连花解毒颗粒供试品2溶液2次，灌胃体积为0.4mL/10g。

对照组每只小鼠给以生理盐水，一天两次，灌胃体积为0.4mL/10g。

两组小鼠给药后连续观察14天。

期间若有死亡小鼠即刻尸解，肉眼观察小鼠主要脏器（心、肝、脾、肺、肾等）的变化，若肉眼可见异常则进行病理检查。

若无14天后处死全部存活小鼠，解剖和尸检脏器官有无异常。

并记录14天雌雄小鼠的行为活动、被毛、皮肤、呼吸、大小便、食欲，鼻、眼、口腔有无异常分泌物等情况（见附录Ⅰ）。

根据公式计算出其能达到人用量的多少倍[9~11]，计算公式如下：

2连花解毒颗粒对角叉菜胶所致大鼠发热的解热作用[13－15]

2.1人与大鼠之间给药量的换算

表2-1不同实验动物与人的等效剂量比值（注：

剂量按mg/kg算，人按照60kg算）[12]

动物

小鼠

大鼠

豚鼠

兔

猫

猴

狗

剂量比值

8.65

5.98

5.15

3.11

2.59

0.998

1.78

通过查表可知大鼠与人的等效剂量比约为6倍

实验动物用剂量＝（动物体重／人的体重）×人的剂量×6

=（0.2kg/60kg）×60g×6=1.2g

2.2致热因子溶液的配制与发热模型的建立

2.2.1致热因子的制备：

精密称取角叉菜胶（卡拉胶）100mg置于试管中，加入灭菌生理盐水（或蒸馏水）10mL，轻轻搅拌或摇匀，放置于4℃冰箱中过夜，次日晨取出，轻轻倒置数次直至混悬液均匀。

2.2.2发热模型的建立：

取12只健康大鼠，雌雄各半，于实验前8～10h禁食，但不禁水。

实验前三天，每日测大鼠肛温2次，实验当日每小时测肛温1次，连续3次，选取体温变化不高于0.3℃的大鼠进行实验，取被选中的大鼠肛温平均值为基础体温。

于大鼠两爪脚跖皮下各注射1%角叉菜胶悬液0.1mL/爪，分别于1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h测大鼠肛温，观察大鼠建模情况，如注射致热因子4小时后，大鼠体温开始升高，至6~7小时达高峰，并持续时间长于10小时，则可判断为建模成功，视情况调整致热因子的种类和剂量。

2.3预实验观察：

选取20只健康大鼠，雌雄各半，于实验前8～10h禁食，但不禁水。

实验前三天，每日用体温计测大鼠肛温2次，实验当日每小时测肛温1次，连续3次，选取肛温变化不高于0.3℃的大鼠进行实验，取被选鼠肛温的平均值为基础体温。

以角叉菜胶作为致热因子，参考相关文献，在预实验中设置两种实验方法：

①大鼠每天给浓度为0.4g/mL连花解度颗粒3mL一次，连续3d。

末次给药后，用体温计测量致热前肛温，然后于大鼠两爪脚跖皮下各注射1%角叉菜胶悬液0.1mL/爪，此后分别于1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h测大鼠肛温。

②于大鼠两爪脚跖皮下各注射1%角叉菜胶悬液0.1mL/爪，此后立即给予每只大鼠浓度为0.4g/mL连花解度颗粒3mL，分别于1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h测大鼠肛温。

观察动物反应情况和体温变化，选择最佳的实验方法（给药量计算：

连花解毒颗粒60kg人每天用量为60g，按体表面积折算0.2kg大鼠正常用量为1.2g，0.2kg大鼠每次灌胃3mL，即连花解毒颗粒配制的浓度为1.2g/3mL=0.4g/mL）。

2.4连花解度颗粒解热效果正式实验：

根据预实验结果，选取实验方案。

大鼠于实验前8～10h禁食，但不禁水。

每日用体温计测大鼠肛温2次，连续3日，实验当日每小时测体温1次，连续3次，选取体温变化不高于0.3℃的健康大鼠，取被选鼠体温的平均值为基础体温。

将大鼠随机分成七组，灌服以下七种药物：

①连花解毒颗粒低剂量组：

0.2g/mL连花解度颗粒3mL

②连花解毒颗粒中剂量组：

0.4g/mL连花解度颗粒3mL

③连花解毒颗粒高剂量组：

0.8g/mL连花解度颗粒3mL

④双黄连颗粒阳性对照品组：

0.2g/mL柴黄颗粒3mL

⑤阿司匹林阳性对照品组：

6.7mg/mL阿司匹林3mL

⑥空白辅料对照组：

266.7mg/mL空白辅料3mL

⑦模型组：

不给药

根据预实验确定的试验方法建模，于1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h测大鼠肛温。

记录每只大鼠的体温变化并绘制曲线图，利用SPSS软件分析计算，判断连花解毒颗粒组与模型组体温差别是否有统计学意义（P<0．05），即连花解毒颗粒的解热效果（给药量计算：

①连花解毒颗粒60kg人每天用量为60g，按体表面积折算0.2kg大鼠正常用量为1.2g，0.2kg大鼠每次灌胃3mL，因此配制的连花解毒颗粒中剂量组浓度为1.2g/3mL=0.4g/mL；②双黄连颗粒60kg人每天用量为30g，则大鼠正常用量为0.6g，因此配制的双黄连颗粒的浓度为0.6g/3mL=0.2g/mL；③通过查阅文献，解热实验大鼠阿司匹林对照组用量为20mg/d，因此配制阿司匹林浓度为20mg/3mL=6.7mg/mL；④连花解毒颗粒人每天用量为40g，0.2kg大鼠正常用量为0.8g，0.2kg大鼠每次可灌胃3mL，0.8g/3mL=266.7mg/mL）。

附录Ⅰ急性毒性试验的一般观察结果与可能设计的组织、器官、系统

参考文献：

[1]何晶．金银花的药理作用及临床应用[J].药学,2008,20（5）,74-76.

[2]倪华，施霞，云海．板蓝根化学成分及其药理活性研究进展[J].医学院学报，2008，29（13），1609-1610.

[3]国家药典委员会，中华人民国药典第一部[M].，化学工业，2010，20.

[4]简永耀，靳龙文．连翘的化学成分及药理学研究[J].淮海医药，2009,27（4），349—350.

[5]于宏．牛蒡子的化学成分与生物活性[J].外医药·植物药分册，2007，22（6），244-245.

[6]鸣真，叶望云，陆付耳．中医“清热解毒”法实质的研究[J]．中西医结合杂志，2000，10（8）：

449-451.

[7]奇．中药药理研究方法学（第2版）[M].：

人民卫生.2006，276-297.

[8]国家药品监督管理局，中药新药研究的技术要求，1997.

[9]王一荃，王祝鸣，童华．中药金衡灵急性毒性和反复给药毒性试验研究[J].中华临床医师杂志，2010，4

（2）：

36－41.

[10]徐鑫，周昆，屈彩芹．香加皮配方颗粒的急性毒性和蓄积毒性实验研究[J].中医药，2008，40（10）:

117-118.

[11]万启南，东，游，叶勇，施燎明，映雪．清热解毒扶正颗粒小鼠急性毒性试验[J]，中医中药杂志，2010，31（9）：

72.

[12]章元沛．药理实验方法学（第二版）[M].:

 人民卫生.1996，238.

[13]周军，何飞，韦桂宁，敬民，友弟，翠红．银胡感冒海绵剂解热、抗炎、镇痛作用的实验研究[J].中国药师，2010，13（8）：

1078-1081.

[14]敬然，红梅，晓飞，蔡大伟，冬梅，王书杰．牛黄解毒滴丸解热镇痛和抗炎作用实验[J].中国药师，2010，13（9）：

1257-1259.

[15]邱彦，司梁宏，静，梅，陆瑜．十味板蓝根颗粒解热镇痛作用的实验研究[J].中药材，2009,32（7）：

1117-1119.

四研究进展及具体安排

（1）2010.12.27—2011.01.23查阅相关文献，设计实验方案，并完成开题报告

（2）2011.01.28—2011.02.15撰写综述

（3）2011.02.24—2011.04.25完成相关试验和结果分析

（4）2011.04.27—2011.05.07撰写毕业论文

（5）2011.05.10—2011.05.11论文答辩

五预期结果

1、通过连花解毒颗粒急性毒性研究，测得小鼠的最大耐受倍数

2、通过连花解毒颗粒解热药效学研究，确定连花解毒颗粒的解热效果

3、完成毕业论文

导师审查意见

导师签名年月日

实习单位意见

单位公章年月日

系（院）批准意见

系（院）盖章年月日

备注

检查及变动情况记录

第一次检查及变动记录

导师签名年月日

第二次检查及变动记录

导师签名年月日

课题完成日期年月日

备注