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关于板蓝根多糖的提取和纯化工艺研究
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的
论说性文章。
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关于板蓝根多糖的提取和纯化工艺研究
作者：
张体祥，刘捷，张萍，马丽，卢奎
【摘要】目的研究板蓝根水溶性多糖的提取纯化工艺条件。
方法通过正交实验，考
察液料比、提取时间、提取温度、醇沉时间、醇液比对多糖得率的影响。
结果液料比
是影响提取工艺的主要因素，最佳工艺条件为：
液料比30∶1，提取温度90℃，提取
时间6h。
三氯乙酸法脱蛋白，葡聚糖凝胶柱层析纯化分离。
结论板蓝根多糖得率
25.63%，多糖含量76.42%。
纯化后的板蓝根多糖为分子大小均一的单一组分多糖，不
含核酸和蛋白质。
1
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【关键词】板蓝根多糖正交试验提取纯化分离
板蓝根为中国传统中药，有清热解毒、凉血利咽的功能。
用于瘟毒发斑、舌绛紫
暗、痄腮、喉痹、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症[1]。
板蓝根多糖是板蓝根的
主要化学成分之一。
研究发现,板蓝根多糖具有免疫调节作用,对特异性免疫和非特异
性免疫均有一定的促进作用[2，3],此外还有降血脂作用。
随着人们对多糖生物活性
和特殊药用功能认识的进一步加深，意识到板蓝根多糖可能是板蓝根生物活性和特殊
药用功能的主要作用因子之一。
目前,板蓝根多糖的提取大多采用水煮醇沉法[4，5],提取的粗多糖溶液为胶体溶液,
性质差别很大,提取得率和多糖含量并不理想，这为多糖的的进一步开发造成了困难。
为了提高多糖的活性,本实验以北板蓝根为原料,采用正交实验对板蓝根的提取工艺进
行优化,对提取的粗多糖脱蛋白,通过SehadexG-100凝胶色谱柱进一步分离纯化,以
期为板蓝根多糖的开发利用提供理论基础。
1材料
板蓝根，购自郑州仟僖堂药店。
2
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2方法
2.1板蓝根多糖的提取纯化工艺路线[6，7]其流程如下所示：
提取：
板蓝根粉碎称量乙醚脱脂热水浸提离心取上清液残渣重复浸提两次合
并上清液减压浓缩透析测含糖量乙醇沉淀有机溶剂洗涤真空干燥板蓝根粗多糖
纯化：
粗多糖溶液SehadexG-100柱层析洗脱液浓缩乙醇沉淀冷冻干燥精制板
蓝根多糖
2.2正交实验优化板蓝根多糖的提取工艺选择液料比、提取温度和提取时间3个因
素，以多糖得率为考察指标进行3因素3水平的正交实验，对板蓝根多糖的提取工艺
条件进行优化。
2.3多糖含量的测定[8]苯酚-硫酸法，以葡萄糖为基准物作标准曲线。
根据标准曲线
计算多糖含量。
板蓝根多糖得率的计算公式:
3
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粗多糖得率（%）=多糖质量板蓝根粉末的质量100%
2.4脱蛋白方法称取一定量板蓝根粗多糖，加入蒸馏水溶胀2h，在100℃下煮沸1.5
h，离心，浓缩。
本实验采用了4种去蛋白方法：
Sevage法：
在粗多糖浓缩液中加入等体积的一定浓度的氯仿-正丁醇溶液，混合振
摇，离心除去沉淀，经透析、醇沉、洗涤、干燥，即得脱蛋白多糖。
三氯乙酸法：
在粗多糖浓缩液中滴加一定量的三氯乙酸，剧烈搅拌20～30min，离
心除去沉淀，经透析、醇沉、洗涤、干燥，即得脱蛋白多糖。
HCl法：
用HCl调节粗多糖浓缩液至pH=3，10～20℃静置过夜，离心除去沉淀液，
再透析醇沉、洗涤、干燥，即得脱蛋白多糖。
正丁醇-三氯乙酸法：
在粗多糖浓缩液中加入等体积的三氯乙酸-正丁醇试剂，振摇
10min，于分液漏斗中静置分层，收集下层的水溶液，经透析醇沉、洗涤、干燥，即
得脱蛋白多糖。
4
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2.5板蓝根多糖的纯化将一定量的脱蛋白多糖，用蒸馏水溶解后上样，0.15molL-1
NaCl进行洗脱，流速控制在0.3mlmin-1，洗脱液由分布收集器进行收集，苯酚-硫酸
法跟踪检测，分别合并出峰的流出液，减压浓缩至一定体积，醇沉、过滤、干燥，即
得精制多糖。
2.6纯度鉴定将SephadexG-100装柱，用NaCl平衡1d。
上样，NaCl洗脱，按3ml
体积部分收集，用苯酚-硫酸法跟踪检测。
配制一定浓度的板蓝根多糖溶液，以二次重
蒸水为空白，TU-1800PC紫外分光光度计于190～800nm的范围进行扫描。
3结果
3.1液料比对多糖得率的影响固定提取温度为90℃，提取时间为7h，醇沉比4∶1，
醇沉时间24h,称取一定量板蓝根分别在5∶1，10∶1，20∶1，30∶1，40∶1条件下
提取。
结果见图1。
由图1可以看出，随着液料比的增大，多糖得率呈上升趋势，当液料比达到25∶1，
多糖得率变化不大。
如果水用量过多,不利于以后的浓缩分离。
因此,选择液料比在
25∶1左右。
3.2提取温度对多糖得率的影响按照液料比25∶1，提取时间7h，醇沉比4∶1，醇
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沉时间24h,称取一定量板蓝根分别在60，70，80℃，90，95，100℃温度下提取。
结
果见图2。
由图2可以看出，提取温度从60℃升高到90℃时，多糖的得率迅速增加，超过90℃
则多糖的得率变化平缓，而温度达到95℃之后多糖的得率反而有所下降。
若温度过
低，溶剂的渗透能力和溶解能力差，多糖不能有效溶出;温度过高虽对细胞的破坏作用
增大，有利于多糖的浸出，但是会导致多糖裂解，使得多糖得率降低。
所以,提取温度
选择80～95℃时效果较好。
tips:
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关于野鸦椿提取物抗炎镇痛效应的研究
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作者：
李先辉，李春艳，贾薇，吕江明
【摘要】目的研究野鸦椿（EJK）水提取物的抗炎镇痛效应。
方法采用4种急性炎症
模型和两种疼痛模型，包括角叉菜胶及蛋清诱导大鼠足趾肿胀、二甲苯致小鼠耳片肿
胀、1%冰醋酸致小鼠腹腔渗出模型及扭体、热板法疼痛模型，观察EJK水提取物的抗
炎镇痛作用。
结果EJK水提取物小、中、大（2，4，8g/kg）3个剂量组对二甲苯致小鼠
耳片肿胀，对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀，对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛
细血管通透性，对冰醋酸导致的慢性炎性疼痛、热板导致的疼痛均有不同程度抑制作
用,其中EJK水提取物两个剂量（4，8g/kg）组与模型组相比有显著性差异（P0.01）。
结论
EJK水提取物具有较强的抗炎镇痛效应。
【关键词】野鸦椿抗炎镇痛
野鸦椿（药材名为鸡眼睛）来源于省沽油科植物野鸦椿EuscaphisjaponecaKantiz，
（EJK）的带花或果的枝叶，为贵州、湘西苗族常用药。
味辛、甘，性平,具理气止痛、消
肿散结的功效[1]，已有文献报道野鸦椿的枝叶有明显的抗炎作用[2]。
但与野鸦椿理
气止痛，消肿散结功效密切相关的抗炎镇痛作用系统研究还不够。
本文采用实验性急
性炎症动物模型及疼痛模型，观察EJK水提取物抗炎镇痛效果,为其临床应用提供理论
提供依据。
1材料与仪器
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1.1动物昆明种小鼠,18～22g，雌雄各半，合格证号：
001847;SD大鼠,180～200
g，雌雄各半，合格证号：
001847，由湖南长沙开福区东创实验动物服务部提供。
1.2药物及试剂EJK水提取物由吉首大学药理实验室提供,传统方法水提、浓缩，临
用时用蒸馏水稀释成所需浓度（实验所用剂量均以生药计）;吲哚美辛，山西临汾奇林药
业有限公司生产，批号201005。
二甲苯，江苏徐州试剂二厂产品，批号050720;角叉菜
胶，青岛海洋所提供，用前1天以无菌生理盐水配制成10g/L，放置4℃冰箱过夜备
用;甲醇，甲酰胺，冰醋酸、氢氧化钾为分析纯。
1.3仪器UV-260可见-紫外分光光度计（日本岛津公司）;721可见分光光度计（上海亚
研电子科技有限公司）;FA/JA型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）;精度0.02mm的
游标卡尺（上海量具刃具厂）;SHH.W21.420型电热恒温水箱（天津市泰斯特仪器有限公
司）;LXJ-ⅡB型离心机（上海安亭科学仪器厂）。
2方法
2.1EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响[3，4]昆明种小鼠50只，雌雄
各半，随机分为5组：
模型组（生理盐水），EJK小、中、大（2，4，8g/kg）3个剂量
组，阳性药组（吲哚美辛，125mg/kg）。
每组动物按0.1ml/10g连续灌胃给药5d，模型
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对照组给予相同体积的生理盐水。
末次给药30min后，于小鼠右耳前后两面均匀涂抹
二甲苯0.02ml/只,左耳作对照，45min后脱颈处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直
径为9mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳片，电子天平称重，计算肿胀度和
抑制率（下式中给药组包括阳性药组和EJK水提取物组，肿胀度以每鼠左右耳片重量差
表示。
下同）。
抑制率（%）=（模型对照组肿胀度-给药组肿胀度）/模型对照组肿胀度
100%。
2.2EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响[3]接上实验，于涂抹二甲苯后，立即
尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液0.1ml/10g，同时腹腔注射1%冰醋10ml/kg，45min
后脱颈椎处死动物，用5ml生理盐水冲洗腹腔,吸管收集腹腔液，离心取上清液于590
nm处可见分光光度计测定吸光度A值。
按公式计算小鼠腹腔毛细血管通透性抑制
率。
腹腔毛细血管通透性抑制率（%）=（模型对照组腹腔液A590-给药组腹腔液A
590）/模型对照组腹腔液A590100%;待2.1项实验中耳片称毕，将致炎右耳片浸入1
ml甲酰胺中,38℃水浴48h将染料渗出，离心取上清液于620nm处可见分光光度计测
吸光度A值。
按公式计算小鼠皮肤毛细血管通透性抑制率。
皮肤毛细血管通透性抑制
率（%）=（模型对照组液A620-给药组液A620）/模型对照组液A620100%
2.3EJK水提取物对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响[3，4]大鼠50只,雄
性,随机分为5组：
模型组（生理盐水），EJK水提取物小、中、大（0.4，0.8，1.6g/kg）3
个剂量组，阳性药组（吲哚美辛，25mg/kg），每组动物按2ml/100g连续灌胃给药5
d，模型组给予相同体积的生理盐水。
实验当天先用游标卡尺（精度0.02mm）测所有大
鼠右后肢足跖厚度作为造模前的正常值，末次给药1h后,于每鼠右足趾皮下注射1%
角叉菜胶0.1ml
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