标准缓冲液的配制方法.docx
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标准缓冲液的配制方法
标准缓冲液的配制及常用数据
一、标准缓冲液pH值与温度对照表
温度
℃
四草酸氢钾
0.05M
邻苯二甲酸氢钾
0.05M
混合磷酸盐
0.025M
硼砂
0.01M
5
1.67
4.00
6.95
9.39
10
1.67
4.00
6.02
9.33
15
1.67
4.00
6.90
9.28
20
1.68
4.00
6.88
9.23
25
1.68
4.00
6.86
9.18
30
1.68
4.01
6.85
9.14
35
1.69
4.02
6.84
9.11
二、常用缓冲溶液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/LHCI，再加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
2.0
2.4
2.6
2.8
50
50
50
50
44.0
32.4
24.2
16.8
3.0
3.2
3.4
3.6
50
50
50
50
11.4
8.2
6.4
5.0
甘氨酸分子量=75.07，0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+0.2mol/LHCl，再加水稀释到20毫升
pH（20℃）
X
Y
pH（20℃）
X
Y
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
5
5
5
5
5
4.070
3.960
3.295
2.642
2.022
3.2
3.4
3.6
3.8
5
5
5
5
1.470
0.990
0.597
0.263
邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23，0.2mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
pH
0.2mol/LNa2HPO4
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
pH
0.2mol/LNa2HPO4
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.24.4
4.6
4.8
5.0
0.40
1.24
2.18
3.17
4.11
4.94
5.70
6.44
7.10
7.71
8.28
8.82
9.35
9.86
10.30
10.60
18.76
17.82
16.83
15.89
15.06
14.30
13.56
12.90
12.29
11.72
11.18
10.65
10.14
9.70
5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.87.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
10.72
11.15
11.60
12.09
12.63
13.22
13.85
14.55
15.45
16.47
17.39
18.17
18.73
19.15
19.45
9.28
8.85
8.40
7.91
7.37
6.78
6.15
5.45
4.55
3.53
2.61
1.83
1.27
0.85
0.55
Na2HPO4分子量=14.98，0.2mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量=178.05，0.2mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量=210.14，0.1mol/L溶液为21.01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
pH
钠离子浓度
（mol/L）
柠檬酸（克）
C6H8O7·H2O
氢氧化钠（克）
NaOH97%
盐酸（毫升）
HCl（浓）
最终体积（升）①
2.2
3.1
3.3
4.3
5.3
5.8
6.5
0.20
0.20
0.20
0.20
0.35
0.45
0.38
210
210
210
210
245
285
266
84
83
83
83
144
186
156
160
116
106
45
68
105
126
10
10
10
10
10
1010
① 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）
pH
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
pH
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
4.8
18.6
17.2
16.0
14.9
14.0
13.1
12.3
11.4
10.3
9.2
1.42.8
4.0
5.1
6.0
6.9
7.7
8.6
9.7
10.8
5.0
5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
8.2
7.3
6.4
5.5
4.7
3.8
2.8
2.0
1.4
11.8
12.7
13.6
14.5
15.3
16.2
17.2
18.0
18.6
柠檬酸C6H8O7·H2O：
分子量210.14，0.1mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3C6H5O7·2H2O：
分子量294.12，0.1mol/L溶液为29.41克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2mol/L）
pH（18℃）
0.2mol/L
NaAc（毫升）
0.3mol/L
HAc（毫升）
pH（18℃）
0.2mol/L
NaAc（毫升）
0.3mol/L
HAc（毫升）
2.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
0.75
1.20
1.80
2.65
3.70
4.90
9.25
8.80
8.20
7.35
6.30
5.10
4.8
5.0
5.2
5.4
5.6
5.8
5.90
7.00
7.90
8.60
9.10
9.40
4.10
3.00
2.10
1.40
0.90
0.60
Na2Ac·3H2O分子量=136.09，0.2mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）
pH
0.2mol/L
Na2HPO4
（毫升）
0.3mol/L
NaH2PO4
（毫升）
pH
0.2mol/L
Na2HPO4
（毫升）
0.3mol/L
NaH2PO4
（毫升）
5.8
5.9
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
8.0
10.0
12.3
15.0
18.5
22.5
26.5
31.5
37.5
43.5
49.5
55.0
92.0
90.0
87.7
85.0
81.5
77.5
73.5
68.5
62.5
56.5
51.0
45.0
7.0
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
8.0
61.0
67.0
72.0
77.0
81.0
84.0
87.0
89.5
91.5
93.094.7
39.0
33.0
28.0
23.0
19.0
16.0
13.0
10.5
8.5
7.0
5.3
Na2HPO4·2H2O分子量=178.05，0.2mol/L溶液为35.61克/升。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.05，0.2mol/L溶液为71.61克/升。
NaH2PO4·2H2O分子量=156.01，0.2mol/L溶液为31.202克/升。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15mol/L）
pH
mol/L/15Na2HPO4
（毫升）
mol/L//15KH2PO4
（毫升）
pH
mol/L//15Na2HPO4
（毫升）
mol/L//15KH2PO4
（毫升）
4.92
5.29
5.91
6.24
6.47
6.64
6.81
6.98
0.10
0.50
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
9.90
9.50
9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00
7.17
7.38
7.73
8.04
8.34
8.67
8.18
7.00
8.00
9.00
9.50
9.75
9.90
10.00
3.00
2.00
1.00
0.50
0.25
0.10
0
Na2HPO4·2H2O分子量=178.05，1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量=136.09，1/15M溶液为9.078克/升。
8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2MK2PO4+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至29毫升
pH（20℃）
X（毫升）
Y（毫升）
pH（20℃）
X（毫升）
Y（毫升）
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
5
5
5
5
5
5
0.372
0.570
0.860
1.260
1.780
2.365
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
5
5
5
5
5
5
2.963
3.500
3.950
4.280
4.520
4.680
9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）
pH
0.04M巴比妥钠溶液
0.2V盐酸
pH
0.04M巴比妥钠溶液（毫升）
0.2N盐酸（毫升）
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
8.2
100100
100
100
100
100
100
100
18.4
17.8
16.715.3
13.4
11.47
9.39
7.21
8.4
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4
9.6
100
100
100
100
100
100
100
100
5.21
3.82
2.52
1.65
1.13
0.70
0.35
巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升
10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。
pH
X（毫升）
pH
X（毫升）
7.10
7.20
7.30
7.40
7.50
7.60
7.70
7.80
7.90
8.00
45.7
44.7
43.4
42.0
40.3
38.5
36.6
34.5
32.029.2
8.10
8.20
8.30
8.40
8.50
8.60
8.70
8.80
8.90
26.2
22.919.9
17.2
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0
三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OH
C
HOCH2 NH2
分子量=121.14;
1M溶液为12.114克/升。
Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2M硼砂（毫升）
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2M硼酸（毫升）
7.4
7.6
7.8
8.0
1.01.5
2.0
3.0
9.0
8.5
8.0
7.0
8.2
8.4
8.7
9.0
3.5
4.5
6.0
8.0
6.5
5.5
4.0
2.0
硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=381.43; 0.05M溶液含19.07克/升。
硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2M溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2NNaOH（毫升）
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2NNaOH（毫升）
9.3
9.4
9.6
9.8
50.0
50.0
50.0
50.0
6.011.0
23.0
34.0
10.0
10.1
50.0
50.0
43.0
46.0
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4
50
50
50
50
50
4.0
6.0
8.8
12.0
16.8
9.6
9.8
10.0
10.4
10.6
50
50
50
50
50
22.4
27.2
32.0
38.6
45.5
甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
9.3
9.4
9.6
50
50
50
6.011.0
23.0
9.8
10.0
10.1
50
50
50
34.0
43.0
46.0
硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
pH
0.1MNa2CO3（毫升）
0.1MN2HCO3（毫升）
20℃
37℃
9.16
9.40
9.51
9.78
9.90
10.14
10.28
10.53
10.83
8.77
9.12
9.40
9.50
9.72
9.90
10.08
10.28
10.57
1
2
3
4
5
6
7
8
9
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。
N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。
15．“PBS”缓冲液
PH
7.6
7.4
7.2
7.0
H2O
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4
1000
8.5
2.2
0.1
1000
8.5
2.2
0.2
1000
8.5
2.2
0.3
100ml
8.5g
2.2g
0.4g
三、实验室中常用酸碱的比重和浓度
名称
分子式
分子量
比重
面分浓度%（W/W）
当量浓度（粗略）N
配1升1N溶液所需毫升数
盐酸
HCl
36.47
1.19
37.2
12.0
84
1.18
35.4
11.8
1.10
20.0
6.0
硫酸
H2SO4
98.09
1.84
95.6
36.0
28
1.18
24.8
6.0
硝酸
HNO2
63.02
1.42
70.98
16.0
63
1.40
65.3
14.5
1.20
32.36
6.1
冰乙酸
CH3COOH
60.05
1.05
99.5
17.4
59
乙酸
CH3COOH
98.06
36
6.0
磷酸
H2PO4
35.05
1.71
85.0
15,30,45（依反应而定）
67（以15N计）
氨水
NH4OH
0.90
15
67
0.904
27.0
14.3
70
0.91
25.0
13.4
0.96
10.0
5.6
氢氧化钠溶液
NaOH
40.0
1.5
50.0
19
53
四、硫酸铵饱和度的常用表
1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）
硫整硫酸铵终浓度,%饱和度
10
20
25
30
33
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
90
100
每1升溶液加固体硫酸铵的克数①
硫
酸铵
初
浓
度
，
%
饱和
度
0
56
114
144
176
196
209
243
277
313
351
390
430
472
516
561
662
767
10
57
86
118
137
150
183
216
251
288
326
365
406
449
494
592
694
20
29
59
78
91
123
155
190
225
262
300
340
382
424
520
619
25
30
49
61
93
125
158
193
230
267
307
348
390
485
583
30
19
30
62
94
127
162
198
235
273
314
356
449
546
33
12
43
74
107
142
177
214
252
292
333
426
522
35
31
63
94
129
164
200
238
178
319
411
506
40
31
63
97
132
168
205
245
285
375
469
45
32
65
99
134
171
210
250
339
431
50
33
66
101
137
176
214
302
392
55
33
67
103
141
179
264
353
60
34
69
105
143
227
314
65
34
70
107
190
275
70
35
72
153
237
75
36
115
198
80
77
157
90
79
①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）
①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
常见蛋白质分子量参考值 （单位：
dalton）
蛋白质
分子量
肌球蛋白[myosin]
甲状腺球蛋白[thyroglobulin]
β-半乳糖苷酶[β-galactosidase]
副肌球蛋白[paramyosin]
磷酸化酶a[phosphorylasea]
血清白蛋白[serumalbumin]
L-氨基酸氧化酶[L-aminoacidoxidase]
地氧化氢酶[catalase]
丙酮酸激活酶[pyruvatekinase]
谷氨酸脱氢酶[glutamatedehydrogenase]
亮氨酸氨肽酶[glutamaedehydrogenase]
γ-球蛋白，H链[γ-globulin,Hchain]
延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）[fumarase]
卵白蛋白[ovalbumin]
醇脱氢酶（肝）[alcoholdehydrogenase（liver）]
烯醇酶[enolase]
醛缩酶[aldolase]
肌酸激酶[creatinekinase]
胃蛋白酶原[pepsinogen]
D-氨基酸氧化酶[D-aminoacidoxidase]
醇脱氢酶（酵母）[alcoholdehydrogenase（yeast）]
甘油醛磷酸脱氢酶[dlyceraldehydephosphatedehydrogenase]
原肌球蛋白[tropomyosin]
乳酸脱氢酶[lactatedehydrgenase]
胃蛋白酶[pepsin]
转磷酸核糖基酶[phosphoribosyltransferase]
天冬氨酸氨甲酰转移酶，C链[aspe
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