饲料中粗蛋白测定方法.docx

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饲料中粗蛋白测定方法

饲料中粗蛋白测定方法

Thedeterminationmethodofcrudeproteininfeed

  1、 原理Principle

凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。

加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

Kjeldahlmethodfornitrogen,destroyedorganicwithsulfuricacidbycatalyst,andmadenitrogenchangeintoammoniumsulfate.Tomixwiththealkalianddistillingwiththepurposeofammoniaoverflowing,withboricacidabsorption,thenuseacidtitration,tomeasurethenitrogencontent,multipliedbythecoefficientfactorof6.25,theresulttocalculatethecrudeproteincontent.

  2、试剂Reagent

  2.1 硫酸（GB 625）：

化学纯，含量为98％，无氮。

Sulfuricacid（GB625）:

chemicalpureandcontentis98%,withoutnitrogen.

2.2 混合催化剂：

0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。

Mixedcatalyst:

0.4gcoopersulfate,5crystallizationwater（GB665）,6gpotassiumsulphate（HG3--920）orsodiumsulfate（HG3---908）,aboveallarechemicalpure,grindingblending.

2.3 氢氧化钠（GB 629）：

化学纯，40％水溶液（m/V）。

Sodiumhydroxide（GB629）:

chemicalpure,40%aqueoussolution（m/v）

 2.4 硼酸（GB 628）：

化学纯，2％水溶液（m/V）。

Boricacid（GB628）:

chemicalpure,2%aqueoussolution（m/v）

   2.5 混合指示剂：

甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液同等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

Mixedindicator:

Methylred（HG3-958）0.1ethanolsolution,bromocresolgreen（HG3--1220）0.5%ethanolsolution,mixedtogetherbaseonequalvolumeandthevaliditydatefor3monthintheshade.

2.6 盐酸标准溶液：

邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。

Standardsolutionofhydrochloricacid:

potassiumhydrogenphthalatemethodofcalibration,accordingtoGB601.

  2.6.1 盐酸标准溶液：

c（HCl）=0.1mol/L。

8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。

Standardsolutionofhydrochloricacid:

c（HCl）=0.1mol/L.8.3mlhydrochloricacid（GB622,analyticalpure）,with1,000mlofdistilledwater.

    2.6.2 盐酸标准溶液：

c（HCl）=0.02mol/L。

1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。

Standardsolutionofhydrochloricacid:

c（HCl）=0.02mol/L.1.67mlhydrochloricacid（GB622,analyticalpure）,with1,000mlofdistilledwater.

2.7 蔗糖（HG 3—1001）：

分析纯。

Canesugar（HG3--1001）:

analyticalpure.

    2.8 硫酸铵（GB 1396）：

分析纯，干燥。

Ammoniumsulfate（GB1396）:

analyticalpure,dry.

    2.9 硼酸含量吸收液：

1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。

Absorptionliquidofboricacid:

1000mlboricacidaqueoussolutionof1%boricacid,addinto10mlbromocresolgreenaqueoussolutionof0.1%,and7mlmethylredethanolsolutionof0.1%,0.5mlsodiumhydroxideaqueoussolutionof4%,mixedtogetherandvaliditydatefor1monthintheshade.（Atomicalcontrol）

   3、 仪器设备Instrument

   3.1 实验室用的样品粉碎机或研钵。

Thesamplepulverizerormortarforlaboratoryuse

    3.2 分样筛：

孔径0.45mm（40目）。

Samplesieve:

aperture0.45mm（40mesh）

   3.3 分析天平：

感量0.0001g。

Analyticalbalance:

sensitivequality0.0001g

    3.4 消煮炉或电炉。

Digestionfurnaceorelectricstove

    3.5 滴定管：

酸式，10、25mL。

Burette:

acid,10,25ml

  3.6 凯氏烧瓶：

250mL。

Kjeldahlflask:

250ml

   3.7 凯氏蒸馏装置：

半微量水蒸气蒸馏式。

Kjeldahldistillationequipment:

Semimicrowatervapordistillationtype

  3.8 锥形瓶：

150、250mL。

Conicalflask:

150,250ml

   3.9 容量瓶：

100mL。

Volumetricflask:

100ml

    3.10 消煮管：

250mL。

Digestiontube:

250ml

  3.11 定氮仪：

以凯氏原理制造的各类型半自动。

Azotometer:

manufacturingvarioustypesofsemi-automaticinlightofkjeldahlprinciple

  4、 试样的选取和制备Theselection&preparationofspecimen

　　选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

Toselecttherepresentativespecimenandreduceto200gbyquartering,afterpulverizedallthroughthe40mesh,packedinthesealedcontainer,topreventchangesinspecimencomposition.

TheconstantKjeldahldeterminationdigestionanddistillationequipment

1--Hydraulicextractionpipe;2---Tap;3---Inversionofthedryingtube;4---Kjeldahlflask;5&7---electricstove;8---distillationflask;6&9---ironlining;10---samplinghooper;11----Condenserpipe;12---receivingflask

   5 分析步骤Analyticalprocedure

   5.1.1 试样的消煮Thespecimendigestion

　　称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

Take0.5~1gspecimen（nitrogencontentof5~80mg）accurateto0.0002ginthekjeldahlflask,mixedwith6.4gofcatalyst,andmixthespecimen,andadd12mlofsulphuricacidand2grainofglassbeads,placedkjeldahlflaskintheheatingfurnacewithsoftfire,stayspecimencoking,afterthefoamdisappeared,tostrengthenthefire（360~410℃）untilthespecimenchangeintotranslucentturquoise,andthencontinueheatingforatleast2h.

5.1.2 氨的蒸馏：

Thenitrogendistillation

将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。

将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。

蒸汽发生器 的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。

准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。

蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

Maketheboiledliquidofspecimencooling,andadd20mlofdistilledwaterinto100mlofvolumetricflask,aftercoolingdilutedtoscalewithwater,shakeup,asthedecompositionliquidofspecimen.Thehalftracedistillercondenserpipetipintotheconicalflaskwhichequippedwith20mlofboricacidabsorbingliquidand2dropsofmixedindicator.Steamgeneratorshouldaddfewdropsofmethylredindicator,fewdropsofsulfuricacidtokeeptheliquidfortheorangeredduringthedistillationprocess,otherwiseneedtoaddthesulfuricacid.Accuratelymoving10~20mlsampledecompositionfluidinjectioninthereactionchamberofdistillationunit,andrinsetheinletwithfewofdistilledwater,corktheinletglassstopper,add10mlsolutionofsodiumhydroxide,carefullyliftglassstopperintothereactionchamber,andaddwatersealattheentrance,topreventairleakage.Distillationfor4minloweredconicalflaskfromcondenserpipeendtoabsorbliquidlevel,distillationagainfor1min,washedthecondenserpipeendwithdistilledwater,lotionintoinsidetheconicalflask,andthenstopthedistillation.

　   5.1.2.3 蒸馏步骤的检验Thedistillationsteptest

精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

 Accuratelyweigh0.2gofammoniumsulfate,insteadofspecimen,andoperateaccordingto5.1.2steps,measuredthenitrogencontentofammoniumsulfatewas21.19+/-0.2%,otherwiseshouldcheckthestepsofalkaline,distillationandtitration,wetheritiscorrect.

5.1.3 滴定Titration

　　用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

Afterdistillationtheabsorptionliquidimmediatelytitrationwith0.1mol/Lor0.02mol/L（4.6.2）ofhydrochloricacidstandardsolutionby5.1.2.1or5.1.2.2method,thesolutionofashfromblue-greentoredforthefinish.

 6 、空白测定Blankdetermination

　　称取蔗糖0.5g，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。

消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。

Weighting0.5gofsucrose,insteadofspecimen,theblankdeterminationaccordingtochapter5,consumptionof0.1mol/Lhydrochloricacidstandardsolutionvolumeshouldnotexceed0.2mL.Consumptionof0.02mol/Lhydrochloricacidstandardsolutionvolumeshouldnotexceed0.3mL.

 7、 分析结果的表述Thedescriptionofanalysisresult

    7.1 计算见下式：

Tocalculateasbelow:

    粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100 

thecrudeprotein（%）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100 

 式中：

V2── 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；

 Thevolumeofrequiredstandardacidsolutionwhenspecimentitration,ml;

V1── 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； 

Thevolumeofrequiredstandardacidsolutionwhenblanktitration,ml;

    c── 盐酸标准溶液浓度，mol/L； 

Theconcentrationofhydrochloricacidstandardsolution,mol/L;

m── 试样质量，g； 

Thespecimenquality,g

    V── 试样分解液总体积，mL； 

Thetotalvolumeofdecompositionliquid,ml;

V── 试样分解液蒸馏用体积，mL； 

Thedistillationvolumeofdecompositionliquid,ml;

 0.0140── 与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。

Equalto1.00mLofhydrochloricacidstandardsolution（c（HCl）=1.000mol/L）,thequalityofnitrogen

expressedingrams.

6.25── 氮换算成蛋白质的平均系数。

Averagecoefficientofnitrogenconversionintoproteins

 7.2 重复性Repeatability

　　每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

Eachspecimentakenfordeterminationoftwoparallelsamples,itsarithmeticmeanvalueasresult.

　　当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。

Whenthecrudeproteincontentmorethan25%,allowstherelativedeviationis1%.

当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。

Whenthecrudeproteincontentwithin10%~25%,allowstherelativedeviationis2%.

当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。

Whenthecrudeproteincontentlessthan10%,allowstherelativedeviationis3%.