阿立哌唑残留验证方案草案.docx

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阿立哌唑残留验证方案草案

1、残留溶剂方法验证

阿立哌唑合成工艺中用到了乙醇、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF），对这些溶剂在成品中的残留，我们开发了相应的检测方法，采用气相色谱法直接进样检测的，对这个方法进行全面的方法学验证，是为产品的溶剂残留检测提供更为准确的依据。

根据阿立哌唑溶剂残留验证方案，对乙醇、甲苯、DMF的检测方法进行全套验证，方法学内容包括：

专属性、最低检测限和最小检测量、线性和范围、精密度、准确度和方法的耐用性。

验证方法

仪器型号：

Agilent7890A

色谱柱：

DB-624（60m*0.53mm*3μm）

柱温：

初始温度60℃，保持5min，升温速率5℃/min，至200℃，保持5min；

载气：

N2；流速：

3.0ml/min；

氢气流量：

40ml/min；空气流量：

400ml/min；

进样口温度：

200℃；检测器温度：

250℃；

分流比：

10:

1；

进样方式：

直接进样

空白溶液：

二甲基亚砜

标准溶液：

精密称取乙醇、甲苯、DMF，加入N,N-二甲基乙酰胺定量稀释制成每1ml含100μg、45μg、45μg的溶液。

样品溶液：

准确称量约500mg样品于顶空进样瓶中，加10ml二甲基亚砜（DMSO）溶解，混匀，储存待用。

程序/系统性试验：

进样6次标准溶液并记录图谱来进行评价。

分离度:

各个溶剂峰之间的分离度不小于1.5；相对标准偏差（RSD）:

样品溶液中各峰面积RSD≤10.0%。

计算方法：

用标准溶液以外标法计算各溶剂含量。

残留溶剂测定方法学验证总结

溶剂

验证项目

乙醇

甲苯

DMF

专属性

任意相邻溶剂的分离度不得小于1.5

检测限a

检测限LOD

定量限b

定量限LOQ

LOQ浓度的重复性：

RSD≤10.0%

线性&范围c

回归系数（r2）:

≥0.99

范围：

至少LOQ-指标150%的浓度

精密度

重复性d：

RSD≤10.0%

中间精密度e：

RSD≤10.0%

准确度f

回收率80.0-120.0%

方法

耐用性

溶液稳定性：

溶液于25℃室温放置12小时内，对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

柱流量：

微小变化（4.5ml/min-5.5ml/min）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

柱温微小变化（195℃-205℃）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

进样口温度：

微小变化（195℃-205℃）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

检测器温度：

微小变化（245℃-255℃）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

更换同类型不同编号色谱柱后对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

a：

根据信噪比约为3的响应浓度确定。

b：

根据信噪比约为10的响应浓度确定。

c：

在LOQ浓度-不低于150%指标浓度的范围内取5个浓度点进行研究，线性关系以测得的峰面积对被分析物浓度的函数进行线性回归，以相关系数来体现良好线性关系。

d：

重复性是通过配制含有100%指标浓度的各溶剂的溶液，测定6次来验证的，以RSD来体现良好精密度。

e：

第二个分析员在不同日期单独建立系统，考察随机变动因素对精密度的影响，至少6次进样与重复结果共12次进样的RSD来体现中间精密度。

f：

准确度是通过在供试品中加入80%，100%，120%指标三个不同浓度各溶剂测得的回收率所得。

具体的验证试验和结果：

1、系统适用性

空白溶剂无干扰峰，系统适用性通过重复测定6次标准溶液中各溶剂的峰面积的RSD

符合要求（RSD≤10.0%）。

测试结果：

表-2系统适用性测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

标准溶液浓度

平均峰面积

RSD

结论：

在该方法中，6次标准溶液中各溶剂的峰面积的RSD分别为乙醇%、甲苯%、DMF%，符合要求（RSD≤10.0%）。

空白溶液和标准溶液见典型图谱：

图-1，2

2、专属性

考察峰鉴别和选择性，要求：

分别进样空白溶液和所有溶剂的定位溶液来确定所有

残留溶剂，分离度测试溶液所得的色谱图中，任意二相邻的色谱峰之间的分离度不得小于1.5。

表-3分离度测试结果

溶液名称

溶液成分

溶液浓度µg/mL

保留时间（min）

分离度

乙醇定位溶液

乙醇

甲苯定位溶液

甲苯

DMF定位溶液

DMF

分离度测试溶液

乙醇

甲苯

DMF

结论：

在该方法中，相邻溶剂峰之间的最小分离度为，符合要求（≥1.5）

各定位溶液和分离度测试溶液见典型图谱：

图-3，4，5，6，

3、检测限和定量限

对于工艺中可能存在的残留溶剂，检测限（LOD）和定量限（LOQ）是根据信噪比法

来确定的，把已知浓度的溶剂储备溶液稀释到低浓度，测出的信号与空白处的信号（基线噪音）进行比较，算出能被可靠的检测出的最低浓度或百分比，以信噪比（S/N）约为3时响应的试样浓度来确定检测限。

定量限是通过考察各溶剂的信噪比为10左右的相应浓度来确定的，在该浓度水平，

重复考察6个测试溶液，要求6次所得的色谱图中各溶剂峰的相对标准偏差不得大于10%，来证实定量限具有一定的精密度。

测试结果

表-4各溶剂检测限测定结果

溶液名称

浓度（µg/mL）

峰面积

信噪比（S/N）

相当于样品浓度的含量（ppm）

乙醇溶液

甲苯溶液

DMF溶液

结论：

该方法的检测限，乙醇为µg/mL，相当于样品的ppm；甲苯为µg/mL，相当于样品的ppm；DMF为µg/mL，相当于样品的ppm。

各溶液检测限典型图谱：

图-7，8，9

表-5乙醇定量限测定结果

进样顺序

浓度µg/mL

信噪比（S/N）

峰面积

RSD

结论：

乙醇定量限为µg/mL，相当于样品浓度的ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为%，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。

表-6甲苯定量限测定结果

进样顺序

浓度µg/mL

信噪比（S/N）

峰面积

RSD

结论：

甲苯定量限为µg/mL，相当于样品浓度的ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为%，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。

表-7DMF定量限测定结果

进样顺序

浓度µg/mL

信噪比（S/N）

峰面积

RSD

结论：

DMF定量限为µg/mL，相当于样品浓度的ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为%，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。

各溶剂任一定量限测试图谱：

图-10，11，12

4、线性和范围

对每个溶剂，在LOQ浓度至不低于150%指标浓度的范围内取5个浓度点进行研究，线性关系以测得的响应信号对分析物质的浓度的函数作用，用最小二乘法进行回归，以相关系数R2来证实良好线性关系，要求该线性回归系数在0.970-1.000。

测试结果

表-8乙醇线性测试结果

进样顺序

浓度µg/mL

峰面积

平均峰面积

RSD

相当于样品浓度

斜率：

Y-截距：

线性回归系数R2：

结论：

乙醇的线性范围为，回归系数R2=，符合验证方案要求。

表-9甲苯线性测试结果

进样顺序

浓度µg/mL

峰面积

平均峰面积

RSD

相当于样品浓度

斜率：

Y-截距：

线性回归系数R2：

结论：

甲苯的线性范围为，回归系数R2=。

符合验证方案要求。

表-10DMF线性测试结果

进样顺序

浓度µg/mL

峰面积

平均峰面积

RSD

相当于样品浓度

斜率：

Y-截距：

线性回归系数R2：

结论：

DMF的线性范围为，回归系数R2=。

符合验证方案要求。

各溶剂任一针线性测试溶液见典型图谱：

图-13，14，15

各溶剂线性关系图：

5、精密度（重复性）

重复性是通过供试品溶液（g/ml）中加入100%指标浓度的各溶剂，测定6次来验证的，要求测定6次的结果的RSD不得大于10.0%，来证实方法具有良好的精密度。

测试结果

表-11重复性标准溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

浓度（µg/mL）

平均峰面积

RSD

表-12重复性样品溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

平均峰面积

表-13乙醇精密度测试结果

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

标准溶液浓度：

µg/mL

标准溶液峰面积平均值：

样品中乙醇峰面积：

结论：

6次测定结果，乙醇的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性：

RSD≤10%），证实方法具有一定的精密度。

任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-16

浓度（µg/mL）指加入百分之百残留指标的浓度，如乙醇的指标为2000PPM，样品浓度为

0.02g/ml，则加入的浓度约为40µg/mL

表-14甲苯精密度测试结果

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

标准溶液浓度：

µg/mL

标准溶液峰面积平均值：

样品中甲苯峰面积：

结论：

6次测定结果，丙酮的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性：

RSD≤10%），证实方法具有一定的精密度。

任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-17

表-15DMF精密度测试结果

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

标准溶液浓度：

µg/mL

标准溶液峰面积平均值：

样品中DMF峰面积：

结论：

6次测定结果，乙酸乙酯的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性：

RSD≤10%），证实方法具有一定的精密度。

任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-18

6、中间精密度

为考察随机变动因素对精密度的影响，另一名分析员独立建立系统，重新配制6个试样溶液，须使用不同的仪器，在不同的日期进行，要求该精密度结果与重复性结果共12次进样的RSD不得大于10%，来证实良好的中间精密度。

表-16中间精密度标准溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

浓度（µg/mL）

平均峰面积

RSD

表-17中间精密度样品溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

平均峰面积

表-18乙醇中间精密度测试结果

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中乙醇峰面积：

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中乙醇峰面积：

12次回收率的平均值：

%12次测定的RSD：

结论：

两组12次测定结果，乙醇的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性RSD≤10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。

任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-19

表-19甲苯中间精密度测试结果

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中甲苯峰面积：

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中甲苯峰面积：

12次回收率的平均值：

%12次测定的RSD：

结论：

两组12次测定结果，甲苯的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性RSD≤10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。

任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-20

表-20DMF中间精密度测试结果

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD%

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中DMF峰面积：

分析员：

GC仪器编号：

103#

色谱柱编号：

溶液序号

浓度（µg/mL）

峰面积

回收率

平均值

RSD%

测试溶液1

测试溶液2

测试溶液3

测试溶液4

测试溶液5

测试溶液6

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液峰面积平均值：

样品中DMF峰面积：

12次回收率的平均值：

%12次测定的RSD：

结论：

两组12次测定结果，DMF的平均回收率为%，回收率的相对标准偏差RSD为%，符合验证方案中的规定（重复性RSD≤10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。

任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图谱：

图-21

7、准确度

准确度是通过在供试品中加入指标的80%，100%，120%三个不同浓度各溶剂测得的回收率，加入已知量的溶剂，再测定加样样品中各溶剂的测试结果和理论值之间的比值（回收率），要求回收率在80.0-120.0之间，以证实方法具有良好的准确度。

表-21准确度标准溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

浓度（µg/mL）

平均峰面积

RSD

表-22准确度样品溶液测试结果

进样顺序

乙醇峰面积

甲苯峰面积

DMF峰面积

平均峰面积

表-23乙醇回收率测试结果

样品号

加入量（µg/mL）

峰面积

检测值（µg/mL）

回收率

平均回收率

RSD

A-1

A-2

A-3

B-1

B-2

B-3

C-1

C-2

C-3

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液平均峰面积：

样品中乙醇的峰面积：

结论：

三个浓度下，乙醇的回收率在%-%之间，平均回收率为%，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。

任一针乙醇准确度典型图谱：

图-22

表-24甲苯回收率测试结果

样品号

加入量（µg/mL）

峰面积

检测值（µg/mL）

回收率

平均回收率

RSD

A-1

A-2

A-3

B-1

B-2

B-3

C-1

C-2

C-3

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液平均峰面积：

样品中甲苯的峰面积：

结论：

三个浓度下，甲苯的回收率在%-%之间，平均回收率为%，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。

任一针甲苯准确度典型图谱：

图-23

表-25DNF回收率测试结果

样品号

加入量（µg/mL）

峰面积

检测值（µg/mL）

回收率

平均回收率

RSD

A-1

A-2

A-3

B-1

B-2

B-3

C-1

C-2

C-3

标准溶液浓度：

µg/mL标准溶液平均峰面积：

样品中DMF的峰面积：

结论：

三个浓度下，DNF的回收率在%-%之间，平均回收率为%，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。

任一针DMF准确度典型图谱：

图-24

8、耐用性-溶液稳定性

在阿立哌唑供试品溶液中加入指标浓度的有机溶剂，考察测试溶液随时间变化的规律，将容量瓶中测试溶液放置于25℃室温中，在第0，2，6，8，12个小时的时候进行检测考察其结果的变化，要求各溶剂的峰面积的RSD小于10.0%，为检测时测试溶液的放置时间提供依据。

表-26溶液稳定性测试结果

溶剂

峰面积

12h

平均

RSD

乙醇

甲苯

DMF

任一针溶液稳定性图谱：

图-25

9、耐用性-条件参数变化对溶剂测定的影响

将通过改变柱初始温度、载气流速、进样口温度和不同批次色谱柱来评估测定条件参数有微小的变化时，测定结果不受影响的承受程度，要求各个变动的色谱条件下，各溶剂的回收率要求80.0%-120.0%。

表-27色谱条件变动的参数

色谱参数

规定值

变动的范围

流速

5.0ml/min

4.5ml/min和5.5ml/min

柱温

200℃

195℃和205℃

进样口温度

200℃

195℃和205℃

检测器温度

250℃

245℃和255℃

不同色谱柱

测试结果

表-28标准溶液配制

溶液名称

称样量（mg）

容量瓶体积

移取体积

容量瓶体积

浓度（µg/mL）

标准溶液

乙醇：

甲苯：

DMF：

表-29样品溶液和测试溶液配配制

溶液名称

阿立哌唑称样量（g）

容量瓶体积（ml）

浓度

样品溶液

X（）

（用稀释液溶液稀释）

g/ml

测试溶液

Y（）

（用标准溶液稀释）

阿立哌唑称样量（g/ml）

乙醇：

µg/mL

甲苯：

µg/mL

DMF：

µg/mL

表-30不同流速影响的测定结果

流量

溶液名称

物质名称

保留时间

min

峰面积

扣除样品溶液后的峰面积

分离度

回收率

4.5

标准溶液

乙醇

甲苯

DMF

测试溶液

乙醇

甲苯

DMF

5.5

标准溶液

乙醇

甲苯

DMF

测试溶液

乙醇

甲苯

DMF

结论：

柱流量微小变化（4.5ml/min-5.5ml/min）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大

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