阿立哌唑残留验证方案草案.docx

1、阿立哌唑残留验证方案草案1、 残留溶剂方法验证阿立哌唑合成工艺中用到了乙醇、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF），对这些溶剂在成品中的残留，我们开发了相应的检测方法，采用气相色谱法直接进样检测的，对这个方法进行全面的方法学验证，是为产品的溶剂残留检测提供更为准确的依据。根据阿立哌唑溶剂残留验证方案，对乙醇、甲苯、DMF的检测方法进行全套验证，方法学内容包括：专属性、最低检测限和最小检测量、线性和范围、精密度、准确度和方法的耐用性。验证方法仪器型号：Agilent 7890A色谱柱：DB-624（60m*0.53mm*3m) 柱温：初始温度60，保持5min，升温速率5/min，至200，保持5

2、min；载气：N2；流速：3.0ml/min；氢气流量：40ml/min；空气流量：400ml/min；进样口温度：200；检测器温度：250；分流比：10:1；进样方式：直接进样 空白溶液：二甲基亚砜标准溶液：精密称取乙醇、甲苯、DMF，加入N,N-二甲基乙酰胺定量稀释制成每1ml含100g、45g、45g的溶液。样品溶液：准确称量约500mg样品于顶空进样瓶中，加10ml 二甲基亚砜（DMSO）溶解，混匀，储存待用。程序/系统性试验：进样6次标准溶液并记录图谱来进行评价。分离度:各个溶剂峰之间的分离度不小于1.5；相对标准偏差（RSD）: 样品溶液中各峰面积RSD10.0%。计算方法：用标

3、准溶液以外标法计算各溶剂含量。残留溶剂测定方法学验证总结溶剂 验证项目 乙醇甲苯DMF专属性任意相邻溶剂的分离度不得小于1.5检测限a检测限LOD定量限b定量限LOQLOQ浓度的重复性：RSD10.0%线性&范围c回归系数(r2): 0.99范围：至少LOQ-指标150%的浓度精密度重复性d：RSD10.0%中间精密度e：RSD10.0%准确度f回收率80.0-120.0%方法耐用性溶液稳定性：溶液于25室温放置12小时内，对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大柱流量：微小变化（4.5ml/min-5.5ml/min）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大柱温微小变化（195-205）对乙醇、甲苯、D

4、MF的测定影响不大进样口温度：微小变化（195-205）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大检测器温度：微小变化（245-255）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大更换同类型不同编号色谱柱后对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大a：根据信噪比约为3的响应浓度确定。b：根据信噪比约为10的响应浓度确定。c：在LOQ浓度-不低于150%指标浓度的范围内取5个浓度点进行研究，线性关系以测得的峰面积对被分析物浓度的函数进行线性回归，以相关系数来体现良好线性关系。d：重复性是通过配制含有100%指标浓度的各溶剂的溶液，测定6次来验证的，以RSD来体现良好精密度。e：第二个分析员在不同日期单独建立系统，考察随机

5、变动因素对精密度的影响，至少6次进样与重复结果共12次进样的RSD来体现中间精密度。f：准确度是通过在供试品中加入80%，100%，120%指标三个不同浓度各溶剂测得的回收率所得。具体的验证试验和结果：1、 系统适用性空白溶剂无干扰峰，系统适用性通过重复测定6次标准溶液中各溶剂的峰面积的RSD符合要求（RSD10.0%）。测试结果： 表-2 系统适用性测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积标准溶液浓度123456平均峰面积RSD结论：在该方法中，6次标准溶液中各溶剂的峰面积的RSD分别为乙醇 %、甲苯 %、DMF %，符合要求（RSD10.0%）。空白溶液和标准溶液见典型图谱：图-1

6、，22、 专属性考察峰鉴别和选择性，要求：分别进样空白溶液和所有溶剂的定位溶液来确定所有残留溶剂，分离度测试溶液所得的色谱图中，任意二相邻的色谱峰之间的分离度不得小于1.5。表-3 分离度测试结果溶液名称溶液成分溶液浓度g /mL保留时间（min）分离度乙醇定位溶液乙醇甲苯定位溶液甲苯DMF定位溶液DMF分离度测试溶液乙醇甲苯DMF结论：在该方法中，相邻溶剂峰之间的最小分离度为 ，符合要求（1.5）各定位溶液和分离度测试溶液见典型图谱：图-3，4，5，6， 3、 检测限和定量限对于工艺中可能存在的残留溶剂，检测限（LOD）和定量限（LOQ）是根据信噪比法来确定的，把已知浓度的溶剂储备溶液稀释到

7、低浓度，测出的信号与空白处的信号（基线噪音）进行比较，算出能被可靠的检测出的最低浓度或百分比，以信噪比（S/N）约为3时响应的试样浓度来确定检测限。定量限是通过考察各溶剂的信噪比为10左右的相应浓度来确定的，在该浓度水平，重复考察6个测试溶液，要求6次所得的色谱图中各溶剂峰的相对标准偏差不得大于10%，来证实定量限具有一定的精密度。测试结果表-4 各溶剂检测限测定结果溶液名称浓度（g/mL）峰面积信噪比（S/N）相当于样品浓度的含量（ppm）乙醇溶液甲苯溶液DMF溶液结论：该方法的检测限，乙醇为 g/mL，相当于样品的 ppm；甲苯为 g/mL，相当于样品的 ppm；DMF为 g/mL，相当于

8、样品的 ppm。各溶液检测限典型图谱：图-7，8，9表-5 乙醇定量限测定结果进样顺序浓度g/mL信噪比（S/N）峰面积RSD123456结论：乙醇定量限为 g/mL，相当于样品浓度的 ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为 %，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。表-6 甲苯定量限测定结果进样顺序浓度g/mL信噪比（S/N）峰面积RSD123456结论：甲苯定量限为 g/mL，相当于样品浓度的 ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为 %，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。表-7 DMF定量限测定结果进样顺序浓度g/mL信噪比（

9、S/N）峰面积RSD123456结论：DMF定量限为 g/mL，相当于样品浓度的 ppm，在该浓度水平，6次重复进样的峰积的RSD为 %，符合验证方案要求，说明该定量限测定结果具有一定的精密度。各溶剂任一定量限测试图谱：图-10，11，124、线性和范围 对每个溶剂，在LOQ浓度至不低于150%指标浓度的范围内取5个浓度点进行研究，线性关系以测得的响应信号对分析物质的浓度的函数作用，用最小二乘法进行回归，以相关系数R2来证实良好线性关系，要求该线性回归系数在0.970-1.000。测试结果表-8 乙醇线性测试结果进样顺序浓度g/mL峰面积平均峰面积RSD相当于样品浓度1234567891011

10、12131415161718斜率： Y-截距： 线性回归系数R2： 结论：乙醇的线性范围为 ，回归系数R2 = ，符合验证方案要求。表-9 甲苯线性测试结果进样顺序浓度g/mL峰面积平均峰面积RSD相当于样品浓度123456789101112131415161718斜率： Y-截距： 线性回归系数R2： 结论：甲苯的线性范围为 ，回归系数R2 = 。符合验证方案要求。表-10 DMF线性测试结果进样顺序浓度g/mL峰面积平均峰面积RSD相当于样品浓度123456789101112131415161718斜率： Y-截距： 线性回归系数R2： 结论：DMF的线性范围为 ，回归系数R2 = 。符合

11、验证方案要求。各溶剂任一针线性测试溶液见典型图谱：图-13，14，15各溶剂线性关系图：5、精密度（重复性） 重复性是通过供试品溶液（ g/ml）中加入100%指标浓度的各溶剂，测定6次来验证的，要求测定6次的结果的RSD不得大于10.0%，来证实方法具有良好的精密度。测试结果表-11 重复性标准溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积浓度（g/mL）123456平均峰面积RSD表-12 重复性样品溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积123平均峰面积表-13 乙醇精密度测试结果溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD123456标准溶液浓度： g/mL标准溶

12、液峰面积平均值： 样品中乙醇峰面积： 结论：6次测定结果，乙醇的平均回收率为 %，回收率的相对标准偏差RSD为 %，符合验证方案中的规定（重复性：RSD10%），证实方法具有一定的精密度。 任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：图-16浓度（g/mL）指加入百分之百残留指标的浓度，如乙醇的指标为2000PPM，样品浓度为0.02g/ml，则加入的浓度约为40g/mL表-14 甲苯精密度测试结果溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD123456标准溶液浓度： g/mL标准溶液峰面积平均值： 样品中甲苯峰面积： 结论：6次测定结果，丙酮的平均回收率为 %，回收率的相对标准偏差RSD为

13、 %，符合验证方案中的规定（重复性：RSD10%），证实方法具有一定的精密度。任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：图-17表-15 DMF精密度测试结果溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD123456标准溶液浓度： g/mL标准溶液峰面积平均值：样品中DMF峰面积：结论：6次测定结果，乙酸乙酯的平均回收率为 %，回收率的相对标准偏差RSD为 %，符合验证方案中的规定（重复性：RSD10%），证实方法具有一定的精密度。任一针重复性测试溶液（序号1）见典型图谱：图-186、中间精密度 为考察随机变动因素对精密度的影响，另一名分析员独立建立系统，重新配制6个试样溶液，须使用不同的仪

14、器，在不同的日期进行，要求该精密度结果与重复性结果共12次进样的RSD不得大于10%，来证实良好的中间精密度。表-16 中间精密度标准溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积浓度（g/mL）123456平均峰面积RSD表-17 中间精密度样品溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积123平均峰面积表-18 乙醇中间精密度测试结果分析员： GC仪器编号：103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD测试溶液1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值： 样品中乙醇峰面积： 分析员： GC仪器编号：

15、103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD测试溶液1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值： 样品中乙醇峰面积： 12次回收率的平均值： % 12次测定的RSD： %结论：两组12次测定结果，乙醇的平均回收率为 %，回收率的相对标准偏差RSD为 %，符合验证方案中的规定（重复性RSD10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。 任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图谱：图-19表-19 甲苯中间精密度测试结果分析员：GC仪器编号：103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD测试溶液

16、1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值： 样品中甲苯峰面积：分析员：GC仪器编号：103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD测试溶液1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值： 样品中甲苯峰面积： 12次回收率的平均值： % 12次测定的RSD： %结论：两组12次测定结果，甲苯的平均回收率为 %，回收率的相对标准偏差RSD为 %，符合验证方案中的规定（重复性RSD10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。 任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图

17、谱：图-20表-20 DMF中间精密度测试结果分析员：GC仪器编号：103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD%测试溶液1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值：样品中DMF峰面积：分析员：GC仪器编号：103#色谱柱编号：溶液序号浓度（g/mL）峰面积回收率平均值RSD%测试溶液1测试溶液2测试溶液3测试溶液4测试溶液5测试溶液6标准溶液浓度： g/mL 标准溶液峰面积平均值： 样品中DMF峰面积： 12次回收率的平均值： % 12次测定的RSD： %结论：两组12次测定结果，DMF的平均回收率为 %，回收率

18、的相对标准偏差RSD为 %，符合验证方案中的规定（重复性RSD10.0%），证实该方法具有一定的中间精密度。 任一针中间精密度测试溶液（序号1）见典型图谱：图-217、准确度 准确度是通过在供试品中加入指标的80%，100%，120%三个不同浓度各溶剂测得的回收率，加入已知量的溶剂，再测定加样样品中各溶剂的测试结果和理论值之间的比值（回收率），要求回收率在80.0-120.0之间，以证实方法具有良好的准确度。表-21 准确度标准溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积浓度（g/mL）123456平均峰面积RSD表-22 准确度样品溶液测试结果进样顺序乙醇峰面积甲苯峰面积DMF峰面积

19、123平均峰面积表-23 乙醇回收率测试结果样品号加入量(g/mL)峰面积检测值(g/mL)回收率平均回收率RSDA-1A-2A-3B-1B-2B-3C-1C-2C-3标准溶液浓度： g/mL 标准溶液平均峰面积：样品中乙醇的峰面积：结论：三个浓度下，乙醇的回收率在 %- %之间，平均回收率为 %，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。任一针乙醇准确度典型图谱：图-22表-24 甲苯回收率测试结果样品号加入量(g/mL)峰面积检测值(g/mL)回收率平均回收率RSDA-1A-2A-3B-1B-2B-3C-1C-2C-3标准溶液浓度： g/mL 标准溶液平均峰面

20、积：样品中甲苯的峰面积：结论：三个浓度下，甲苯的回收率在 %- %之间，平均回收率为 %，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。任一针甲苯准确度典型图谱：图-23表-25 DNF回收率测试结果样品号加入量(g/mL)峰面积检测值(g/mL)回收率平均回收率RSDA-1A-2A-3B-1B-2B-3C-1C-2C-3标准溶液浓度： g/mL 标准溶液平均峰面积：样品中DMF的峰面积：结论：三个浓度下，DNF的回收率在 %- %之间，平均回收率为 %，符合验证方案规定（80.0%-120.0%）证实该方法具有一定的准确度。任一针DMF准确度典型图谱：图-248、耐

21、用性-溶液稳定性在阿立哌唑供试品溶液中加入指标浓度的有机溶剂，考察测试溶液随时间变化的规律，将容量瓶中测试溶液放置于25室温中，在第0，2，6，8，12个小时的时候进行检测考察其结果的变化，要求各溶剂的峰面积的RSD小于10.0%，为检测时测试溶液的放置时间提供依据。表-26 溶液稳定性测试结果溶剂峰面积0h2h6h8h12h平均RSD乙醇甲苯DMF任一针溶液稳定性图谱：图-259、耐用性-条件参数变化对溶剂测定的影响 将通过改变柱初始温度、载气流速、进样口温度和不同批次色谱柱来评估测定条件参数有微小的变化时，测定结果不受影响的承受程度，要求各个变动的色谱条件下，各溶剂的回收率要求80.0%-

22、120.0%。表-27 色谱条件变动的参数色谱参数规定值变动的范围流速5.0ml/min4.5ml/min和5.5ml/min柱温200195和205进样口温度200195和205检测器温度250245和255不同色谱柱测试结果表-28 标准溶液配制溶液名称称样量（mg）容量瓶体积移取体积容量瓶体积浓度（g/mL）标准溶液乙醇 ：甲苯：DMF：表-29 样品溶液和测试溶液配配制溶液名称阿立哌唑称样量（g）容量瓶体积（ml）浓度样品溶液X（ ）(用稀释液溶液稀释)g/ml测试溶液Y（ ）(用标准溶液稀释)阿立哌唑称样量（ g/ml）乙醇： g/mL甲苯： g/mLDMF： g/mL表-30 不同流速影响的测定结果流量溶液名称物质名称保留时间min峰面积扣除样品溶液后的峰面积分离度回收率4.5标准溶液乙醇甲苯DMF测试溶液乙醇甲苯DMF5.5标准溶液乙醇甲苯DMF测试溶液乙醇甲苯DMF结论：柱流量微小变化（4.5ml/min-5.5ml/min）对乙醇、甲苯、DMF的测定影响不大