最新广东海洋大学微生物学考试.docx

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最新广东海洋大学微生物学考试

广东海洋大学微生物学考试

绪论---刘晓良

科赫氏法则：

1.在每一病例中都出现相同的微生物，且在健康者体内不存在；2.要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中得到纯培养;3.用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生；4.从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物来。

曲颈瓶实验：

巴斯德设计了一个既可允许空气自由进入容器又可阻止容器内肉汤“自然发生”生命（腐败）的简便、巧妙的曲颈瓶，通过实验证实了肉汤腐败产生大量细菌的原因只有接种了来自空气中的微生物“胚种”。

试述微生物的多样性。

①.物种的多样性。

②.生理代谢类型的多样性。

微生物分解初级有机物的能力、微生物有最多样的产能方式、生物固氮作用、合成次生代谢产物等各种复杂有机物的能力、对复杂有机分子集团的生物转化能力、分解有毒和剧毒物质的能力、抵抗极端环境的能力③.代谢产物的多样性。

④遗传基因的多样性,⑤生态类型的多样性。

微生物有哪五大共性？

体积小，面积大。

体积小面积大最基本，因为一个小体积大面积系统，必然有一个巨大的营养物质吸收面、代谢废物的排泄面和环境信息的交换面，并由此而产生其余4个共性；②.吸收多，转化快。

为微生物的高速生长繁殖和合成大量代谢产物提供了充分的物质基础；③.生长旺，繁殖快。

但由于营养、空间和代谢产物等条件的限制，微生物的几何级数分裂速度充其量只能维持数小时而已；④.适应强，易变异。

微生物有极其灵活的适应性或代谢调节机制。

由于繁殖快，虽然其变异频率十分低，也可在短时间产生大量变异的后代；⑤.分布广，种类多。

分布广：

土壤、空气、海洋、人体肠道。

种类多：

微生物的生理代谢类型多，代谢产物种类繁多。

微生物因其体积小、重量轻和数量多等原因，可以到处传播。

而且微生物的种类多造就物种的多样性、生理代谢类型的多样性、代谢产物的多样性、遗传基因的多样性和生态类型的多样性。

第一章原核生物的形态、构造和功能

革兰氏染色法：

通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞壁以内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。

由于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的细胞壁结构和组成成分不同，因此再经沙黄等红色染料复染后，就能辨别G+菌和G-菌，这种方法叫做革兰氏染色法。

肽聚糖：

又称黏肽，是真菌细胞壁中的特有成分。

缺壁细胞：

自然进化和实验室菌种自发突变形成缺细胞壁、人为抑制新生细胞壁的合成或对现有细胞壁进行酶解得到的细胞。

L型细胞：

实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株。

异染粒：

可用美蓝或甲苯胺蓝染成红紫色的一种细胞内含物。

羧酶体：

是存在于一些自养细菌细胞内的多角形或六角形内含物，主要起CO2的固定作用。

糖被：

包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质。

荚膜：

指在细胞壁上有固定层次的糖被组成部分。

基内菌丝：

当放线菌的孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分枝并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝。

试图示G+和G-细菌细胞壁的主要构造，并简要说明其异同。

G+细菌与G-细菌的细胞壁都含肽聚糖和磷壁酸；不同的是含量的区别：

如下表

成分

占细胞壁干重的比例/%

G+细菌

G-细菌

肽聚糖

含量很高90%

含量很低（5～20）

磷壁酸

含量较高（﹤30）

无

类脂质

一般无（﹤2）

含量较高（约20）

蛋白质

无

含量较高

一：

G+菌和G-菌都含有肽聚糖，但肽聚糖的构造不同，G+有肽桥，而G-因含有m-DAP，故没有特殊的肽桥，肽聚糖网套稀疏。

二：

G+菌细胞壁的主要成分是肽聚糖和磷壁酸，含少量或不含脂质和蛋白质，肽聚糖层厚，且层次多，而G-菌的主要成分则是脂质和蛋白质，肽聚糖层薄且层次少。

三：

G-菌细胞壁层次则相对于G+菌多，成分也复杂，机械强度弱于G+。

革兰氏染色机制、步骤及注意事项：

1、革兰氏染色的机制：

通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞壁以内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。

G﹢菌：

细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。

呈紫色。

Gˉ菌：

肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。

由于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的细胞壁结构和组成成分不同，因此再经沙黄等红色染料复染后，就能辨别G+菌和G-菌。

步骤：

初染：

加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。

媒染：

滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。

脱色：

将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。

复染：

用番红液染1－2分钟，水洗。

镜检：

干燥后，置油镜观察。

革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

3、注意事项：

1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色2、染色过程勿使染色液干涸3、选用幼龄的细菌。

拴菌实验P29

试对G-细菌的鞭毛和螺旋体的周质鞭毛在结构、着生方式和运动特点等方面作一比较。

结构

着生方式

运动特点

G-细菌的鞭毛

基体（有L环、P环、S-M环、C环），钩形鞘，鞭毛丝

周生

直线运动，运动速度慢

螺旋体的周质鞭毛

基体，钩形鞘，鞭毛丝

螺旋方式缠绕在螺旋体细胞的表面

快速旋转

如何初步判断并进一步验证某一细菌是否长有鞭毛？

长有何种鞭毛以及鞭毛是如何着生的？

初步判断：

观察其菌落边缘是否光滑，若较粗糙，可能有鞭毛。

验证：

电镜观察；鞭毛染色法，在光学显微镜下观察；半固体穿刺培养；从培养基上的菌落形态判断；对细菌在其悬滴标本或水浸片的运动特点观察。

弧菌、螺菌类普遍着生鞭毛；在杆菌中，假单细胞菌都长有端生鞭毛，其余的都有周生鞭毛或不长鞭毛；球菌一般无鞭毛，仅个别属才长有鞭毛。

鞭毛的着生方式一般有：

一端生；两端生；周生；侧生。

什么是菌落？

试讨论微生物的细胞形态与菌落形态间的相关性及其内在原因。

菌落即单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。

因不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映，故细菌的细胞形态与菌落形态间存在明显的相关性现象，如，无鞭毛、不能运动的细菌尤其是球菌通常都形成较小、较厚、边缘圆整的半球状菌落；长有鞭毛、运动能力强的细菌一般形成而平坦、边缘多缺刻、不规则的菌落；有糖被的细菌，会长出大型、透明、蛋清状的菌落；有芽孢的细菌往往长出外观粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶的菌落等等。

（相关性：

细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较粘稠、较透明，易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。

其原因是细菌属于单细胞生物，一个菌落内无数细胞并没有形态、功能的分化，细胞内充满着毛细管状态的水等。

而不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有明显的反应）

第二章真核微生物的形态、结构和功能

单细胞蛋白：

也叫微生物蛋白，是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。

其所含的营养物质极为丰富。

溶酶体：

是由一种由单层膜包裹，内含多种酸性水解酶的小球形，囊泡状细胞器，主要功能是细胞内的消化作用，消化自身死亡蛋白质和外来异物。

假菌丝：

酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝。

假根：

是根霉属等低等真菌匍匐丝与固体基质接触处分化出来的根状结构，具有固着和吸取养料等功能。

吸器：

真菌菌丝某处生出特殊形态的菌丝体或菌丝的变态物，伸入寄主体内吸取养分，这些变态物叫吸器。

附着胞：

许多寄生于植物的真菌在其芽管或老菌丝顶端会发生膨大，分泌黏状物，借以牢固地黏附在宿主的表面，此即附着胞。

在其上再形成纤细的针状感染菌丝，以侵入宿主的角质表皮而吸取养料。

子实体：

在气生菌丝里面或上面可产无性或有性孢子，有一定形状和结构的任何菌丝体组织。

锁状联合：

形成喙状突起而连合两个细胞的方式不断使双核细胞分裂，从而使菌丝尖端不断向前延伸。

试列表比较真核生物和原核生物的10个主要差别。

比较项目

真核生物

原核生物

细胞大小

较大（通常直径＞2μm）

较小（通常直径＜2μm）

如有壁，其主要成分

纤维素、几丁质等

多数为肽聚糖

细胞器

有

无

鞭毛结构

如有，则粗而复杂

如有，则细而简单

细胞膜含呼吸或光合成分

无

有

核膜

有

无

染色体数

一般大于1

一般为1

氧化磷酸化部位

线粒体

细胞膜

光合作用部位

叶绿体

细胞膜

繁殖方式

有性、无性等多种

一般为无性（二等分裂）

原核生物与真核生物的鞭毛差异。

对于结构：

细菌鞭毛包括三个部分：

基体，钩型鞘，鞭毛丝。

其中基体含4个盘状物，从外到内分别为L环P环S环M环，其中SM环连在一起，相当于马达转子，他的外侧有Mot蛋白包围作为定子。

Mot蛋白蛋白中的跨膜质子通道引导膜外质子流入膜内，从而驱动SM环快速旋转。

钩型鞘用于连接鞭毛丝和基体，它可以360°旋转，使鞭毛加大运动幅度。

鞭毛丝由鞭毛蛋白构成，含有中央孔道，鞭毛蛋白通过中央孔道在其游离端（顶部）进行装配成鞭毛丝。

真核细胞的鞭毛主要由鞭杆和基体组成，当然也有连接他们的结构。

其中鞭杆呈“9+2”型，即中央有两个中央微管（完全微管13个亚基围绕成），外围绕一圈9个微管二联体，其中A管为完全微管，B管则是由10个亚基围绕成，另外3个亚基共用A管的。

A亚纤维上还有两条动力蛋白壁，主要通过Ca+激活的ATP酶参与参与使鞭毛弯曲运动。

同时在相邻二联体微管之间还存在连丝蛋白，在二联体微管与中央微管之间存在放射辐条。

基体结构与鞭杆类似，不过它是“9+0”型，即没有中央微管，且外围是9个三联体微管。

对于运动机制：

细菌鞭毛是利用质子流进行旋转驱动，即“旋转论”；而真核细胞的鞭毛是“挥鞭论”。

试对酵母菌的繁殖方式作一表解。

试以表解法介绍霉菌的营养菌丝和气生菌丝各可分化成哪些特化构造，并简要说明他们的功能。

特化结构

功能

营养菌丝

假根

固着和吸取养料

匍匐菌丝

延伸

吸器

吸取宿主细胞内的养料

附着胞

牢固地黏附在宿主的表面

附着枝

将菌丝附着于宿主体上

菌核

不良的外界条件下，保存数年的生命

菌索

促进菌体蔓延和抵御不良环境

菌环和菌网

捕捉线虫或其他微生物，吸其养料

气生菌丝

结构简单的子实体

分生孢子头、孢子囊

产无性孢子

担子

产有性孢子

结构复杂的子实体

分生孢子器、分生孢子座、分生孢子盘

产无性孢子

子囊果（闭囊壳、子囊壳、子囊盘）

产有性孢子

试列表比较真菌孢子的类型、主要特点和代表种属。

孢子名称

染色体倍数

外形

数量

外或内生

其他特点

实例

无性孢子

游动孢子

n

圆、梨、肾形

多

内

有鞭毛，能游动

壶菌

孢囊孢子

近圆形

多

内

水生型有鞭毛

根霉，毛霉

分生孢子

极多样

极多

外

少数为多细胞

曲霉，青霉

芽孢子

柱形

多

外

各孢子同时形成

白地霉

厚垣孢子

近圆形

少

外

在菌丝顶或中间形成

总状毛霉

芽孢子

近圆形

较多

外

在酵母细胞上出芽形成

假丝酵母

掷孢子

镰、豆、肾形

少

外

成熟时从母细胞射出

掷孢酵母

有性孢子

卵孢子

2n

近圆形

1至几

内

厚壁，休眠

德氏腐霉

接合孢子

2n

近圆形

1

内

厚壁，休眠，大，深色

根霉，毛霉

子囊孢子

n

多样

一般8

内

长在各种子囊内