微生物实验室标准操作程序.docx

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微生物实验室标准操作程序

宽城疾控检验科微生物实验室

标准操作程序--------SOP文件

●细菌室工作守则（微生物室SOP之一）

●细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP之二）

●微生物实验室安全与防护（微生物室SOP之三）

●细菌室内质控制度（微生物室SOP之四）

●细菌室操作技术规范（微生物室SOP之五）

●无菌间规章制度（微生物室SOP之六）

●菌（毒种）管理办法（微生物室SOP之七）

●细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP之八）

●标准菌株保存及使用（微生物室SOP之九）

●细菌室内务管理规定（微生物室SOP之十）

●标本采集及保存要求（微生物室SOP之十一）

●酶标仪（微生物室SOP之十二）

●细菌鉴定室内质控处理程序（微生物室SOP之十三）

●标本拒收标准（微生物室SOP之十四）

●温度失控处理措施（微生物室SOP之十五）

●超净工作台（微生物室SOP之十六）

●标本的接种和移种法（微生物室SOP之十七）

细菌室工作守则

（微生物室SOP之一）

1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。

2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。

3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。

尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。

4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。

5.做好标本的登记、编号及试验记录。

未发出报告前，请勿丢弃标本。

6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。

7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5----10分钟，再用肥皂洗手并冲洗干净；

8.如误入口内，应立即吐出，并用1:

1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。

9.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。

10.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。

易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。

11.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况,用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。

12.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。

13.爱护仪器设备，经常清洁，注意防尘和防潮。

细菌室消毒隔离措施

（微生物室SOP之二）

1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（最少半小时）进行空气消毒。

2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。

3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。

4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡（至少24小时以上）后清洗或丢弃。

5.所有微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。

6.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。

7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。

8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液（如5%石炭酸、3%来苏儿等）消毒30分钟以上，然后再清洗。

如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。

9.实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用1:

1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，必要时根据实际情况服用有关药物。

微生物实验室安全与防护

（微生物室SOP之三）

1.在工作区内禁止饮食，吸烟和存放食物及使用化妆品。

2.实验室里应保持整洁，不存放与工作无关的杂物。

3.工作台每天至少用消毒剂清洁一次，在溢渗传染物后要立即消毒、清洗；

4.进入无菌室必须穿工作服，戴口罩、帽子。

5.在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。

6.实验工作区禁止无关人员出入，尤其要严禁儿童进入。

7.工作人员在处理传染性物质或动物之后，以及在离开实验室时要洗手。

8.凡发生溢漏事故或接触传染性物质后，均应立即报告实验室监督员或实验室主任，并做好书面记录及采取相应措施。

结核杆菌的培养及标本涂片务必在生物安全柜里操作。

9.有涉及感染性材料的操作应在生物安全柜中进行，如结核杆菌培养、感染性组织等。

10.工作人员在进入实验室工作区前，应在专用的更衣室（或缓冲间）穿着背开式工作服或其它防护服。

工作完毕后必须脱下工作服，不得穿工作服离开实验室。

可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。

11.工作时必须戴手套（两副为宜）。

一次性手套必须先消毒后丢弃。

12.在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水，且易于取用。

可配备应急药品。

细菌室内质控制度

（微生物室SOP之四）

1.每位工作人员必须加强质控意识，以质量控制工作为核心，认真做好各项质控试验和记录。

2.加强质量控制和专业理论知识的学习，规范操作，正确分析处理结果。

3.一旦发现失控，及时采取相应措施，纠正失控结果。

4.每批自配或购置的培养基、生化鉴定等试剂必须用标准菌株（ATCC25922…….）质控。

合格方可使用，并作好记录。

5.对每批微量药敏板、培养基、药敏纸片必须用（ATCC27853、ATCC25923、ATCC25922）菌株进行质控，并做好记录，出现问题及时分析，采用相应措施。

6.每天观察培养箱、CO2培养箱、冰箱的温度，并做好记录。

7.无菌间每周监测一次，紫外线消毒灭菌情况，并做好记录。

8.认真讨论、分析每次参加疾控系统室间质控。

总结经验教训。

细菌室操作技术规范

（微生物室SOP之五）

细菌鉴定\操作按GB检验操作规程：

1.负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓细菌学的全面知识。

2.从事细菌专业技术人员，应了解检测知识，掌握其检测方法，定期统计分析细菌分布，耐药变迁，并将其结果进行分析。

3.细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌知识。

4.细菌专业人员应不断更新知识，了解细菌学检验新进展。

5.定期或随时市级疾控实验室联系，主动参与讨论了解科技发展情况，达到细菌检验与防病的密切联系。

6.每天发出的微生物报告应认真复审，分析报告、评价报告。

7.工作人员加强有菌观念，无菌操作。

8.当工作环境被细菌污染，必须立即消毒处理，报告主管人员，采取必要措施。

9.工作人员被细菌培养物污染应消毒处理，必要时给予药物治疗，并向主管负责人报告，采取特殊措施。

无菌间规章制度

（微生物室SOP之六）

每一个工作人员必须树立无菌观念，严格进行无菌操作。

1.在无菌室内必须戴帽子、口罩，进行无菌操作。

2.每天早上8：

00—8：

30用紫外线消毒，每月检查一次紫外灯的无菌效果。

3.无菌室内各种废弃物品必须煮沸消毒。

4.实验完毕后，用含氯制剂1000mg/L消毒桌面、地面。

菌（毒种）管理办法

（微生物室SOP之七）

1.菌种保管应有专人负责，保存于冰箱中，房门专人加锁，确保菌种安全。

保管人员变动时，必须严格交接手续。

2.菌种应有严格的登记，包括形态，分离日期，鉴定日期，签发者，主要鉴定性能（包括形态、染色、抗原结构、动物致病力等），并注明使用、转移、销毁情况及原因。

3.各种菌种应按规定时间接种，一般在接种三次后作一次全面的鉴定，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换。

4.菌种保存范围及向外单位转移，应按国家卫生部规定执行。

5.所有存在菌种应具备清单。

细菌室仪器维护保养及质控措施

（微生物室SOP之八）

我室主要仪器为美国热电MK3酶标仪、旋转仪、离心机、生物安全柜、水浴箱、洗板机，为了使仪器能够高质量的运行，使仪器报告的结果准确可靠,特制定以下仪器维护、保养和质控措施。

1.每次开始工作前和离开前要检查仪器的工作状态是否正常，仪器培养箱温度的报告里外是否一致。

2.每次用中性的清洁液将仪器表面擦拭干净。

3.每次先做质控。

4.一个月至少做一次全程定标。

5.仪器检测数据每月月底做备份。

6.仪器每一个月做一次彻底的清洁保养，包括清洁外壳、瓶孔、滤网等。

7.仪器每年请工程师做一次检定工作。

标准菌株保存及使用

（微生物室SOP之九）

概述：

标准菌株是细菌室室内质控工作必不可少的、重要的生物资源，我室的标准菌株主要来自国家菌种保存中心购买所得，为了让标准菌株能够得到合理的应用，特制定以下规定。

1.对每批购买的标准菌株要做好登记，包括菌种的菌名、编号、购买时间、保存地点、记录人等。

2.每次使用标准品都应作好使用记录，包括标准品的名称、编号、使用时间等。

3.购买的标准品初次使用时，应大量增殖，然后分装在含10----15%甘油的胰蛋白胨肉汤中，20℃以下保存。

4.新的标准菌株复苏最多不得超过三次，如超过三次将不在视为标准菌株使用。

5.标准菌株保存管一经溶化使用后，不得再次冻存。

细菌室内务管理规定

（微生物室SOP之十）

1、细菌室岗位分工与职责管理规定

1.1概述

鉴于细菌室工作琐碎烦杂且千头万绪，为了使细菌室的工作能够保质保量地顺利完成，特将细菌室暂定为两个岗位，以明确工作范围、增强责任心、便于日常工作的完成。

当然由于细菌室不同岗位工作量的随机性较大，故我室要求大家发扬既分工，又协作的精神，共同完成细菌室工作。

1.2岗位职责

各岗位工作人员要求严格按照作业指导书进行操作，高质量的完成本岗位工作，如遇到问题须提出经讨论解决。

1.3岗位分工

岗位Ⅰ：

完成细菌培养标本的结果观察处理及报告发放。

岗位Ⅱ：

完成仪器的维护、保养和质控工作等。

2、细菌室记录内容明细

2.1环境条件

室内温度、湿度，使用前每次记录。

2.2恒温设备2.3

孵箱、普通冰箱，每次记录。

2.3分析仪器

常规每月保养一次，发现问题随时详细记录；质控按要求测试完毕后，及时手工记录，

2.4标本与结果

不合格标本记录、危急值报告记录、结果记录。

3、细菌室室内环境条件控制范围

温度18～28℃，湿度40～80％。

标本采集及保存要求

（微生物室SOP之十一）

1、总则

用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检，检测后标本应妥善保存。

2、临床标本的采集

2.1下呼吸道分泌物（痰液）

塑料痰盒中，及时送检。

2.2尿液（中段尿）

采样人员协助采取中段尿约3ml入无菌试管中，及时送检。

2.3粪便

取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中，如为稀水便，可直接收集于玻璃管中，及时送检。

2.4眼、耳、鼻、喉拭子：

将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌试管内及时送检。

2.5脓液

用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取一些，然后将棉拭置于无菌试管中，及时送检。

2.6血液

2.6.1凡怀疑患有传染性疾病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素,应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，应在病人第二次使用抗菌素之