食用菌栽培技术综合性实验.docx
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食用菌栽培技术综合性实验
食用菌栽培技术综合性实验
植物生产国家级实验教学示范中心 《食用菌栽培技术综合性实验》 实验项目一览表 序号123 实验名称 原种、栽培种的培育菌种保藏及复壮平菇袋栽 建议学时数2学时2学时4学时 每组人数4人4人4人 必选/可选必选必选必选 实验一、原种、栽培种的培育 一、实验教学目的 能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。
并通过培养观察，分析自己的接种结果。
二、实验基本原理 母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。
菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。
原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。
两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。
三、所涉及的课程及知识点 在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学、仪器分析（……），…… 四、仪器设备及实验材料 1.器具：
菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。
2．材料：
棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。
五、实验内容与方法 实验内容 1、培养料的配制 2、菌种瓶及菌种袋的分装 3、原种的接种 4、栽培种的接种 方法步骤 两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。
1.培养基的配制 配方与配制 ①颗粒培养基 配方：
粮食粒%，石膏粉1%，碳酸钙%。
配制：
将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15～20min（熟而不烂，勿破皮），捞出晾至无明水后拌入余料。
原种多使用颗粒培养基。
②棉籽壳麦麸培养基 配方：
棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。
配制：
将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。
边加清水边翻拌至含水量达60%～65%。
分装原种培养基装入菌种瓶，装量约占瓶高的1/2，瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。
栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。
两端开口的菌种袋可将两端扎活结。
要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。
松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。
2.培养基的灭菌 原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。
高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力、温度约℃条件下，保持灭菌时间1～2h。
若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。
3.接种 灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30℃，进行抢温接种。
接原种用接种耙取蚕豆大母种，放于瓶中培养料的孔口处。
斜面尖端及原来的母种块勿接入。
接栽培种用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上。
1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。
去弃表面老化菌丝及老种块。
堵棉塞或用线绳扎袋口。
贴标签，注明菌种名称和接种日期。
4.培养 接种后，将种瓶置于适温下培养。
菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。
菌种袋根据气温可单层或多层叠放。
隔4～5天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。
常检查：
及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。
逐渐降温：
当菌丝长至料深的1/2时，降温2～3℃，以免料温升高，并有壮丝作用。
注意菌龄：
原种约30～40天、栽培种约20～30天菌丝长满，再继续培养7～10天是使用的最好菌龄。
六、实验报告与实验汇报 及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。
每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题 1.记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？
2.比较原种与栽培种生产过程的异同点3.颗粒为何要进行泡和煮？
4.菌种的表面有一块残留的琼脂块，证明该菌种是哪级菌种？
5.菌种表面有少许玉米粒或麦粒，证明该菌种是哪级菌种？
6.一批菌种在适宜条件下培养了十多天，发现有一瓶菌种块丝毫未萌动，请分析原因？
实验二、菌种保藏及复壮 一、实验教学目的 学会利用自然基质保藏菌种。
掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。
二、实验基本原理 创造低温、干燥、缺氧、少营养等不利于菌种生长的一切条件，使其代谢降到休眠状态。
菌种经长期人工培养及保藏，难免引起某些优良性状的减弱或丧失，必须及时进行菌种复壮。
菌种的使用、保藏、复壮应密切结合。
保藏，复壮都是为使用服务的，不会保藏、复壮菌种，就容易使好种退化或者绝种。
三、所涉及的课程及知识点 在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学、仪器分析（……），…… 四、仪器设备及实验材料 1.器具：
试管、棉塞、装100ml水的三角瓶、装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。
2.材料：
麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等。
五、实验内容与方法 实验内容 1、复壮 制备菌丝悬浮液制平板培养转管2、保藏 制备自然基质高压灭菌接种培养保藏 方法步骤 1.菌种保藏 麸皮保藏法将麸皮和自来水按1:
1比例拌匀，装入试管，装量约占试管高度的1/3，洗净管壁，堵棉塞，扎捆后进行高压灭菌，经无菌检查后接入绿豆粒大的母种。
在适温下培养至菌丝长满麸皮。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存。
麦粒保藏法 保藏菌种的麦粒含水量宜低，大约在25％。
将籽粒饱满的麦粒洗净，浸泡约5h，加水煮沸15min，使麦粒熟而不破，捞出沥干表面明水，装入试管，装量约占试管高度的2/5。
高压蒸汽灭菌。
经无菌检查合格后接入菌种，在适温下培养至菌丝长满麦粒。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存。
2.菌种复壮
制备菌丝悬浮液将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。
吸取10ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。
制混合平板将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入2~3滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。
培养适温下培养，使菌丝萌发生长。
挑取健壮尖端菌丝转管。
检测通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。
六、实验报告与实验汇报 及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。
每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题 1.记录菌种在麦粒和麦麸基质上的生长情况，并对出现的问题进行分析。
2.麦粒与麦麸在处理方法上有哪些不同？
3.本实验采用的菌种复壮法的原理是什么？
4.试设计一个防治菌种衰退的菌种使用方案 实验三、平菇袋栽 一、实验教学目的 能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。
正确处理发菌过程中的异常现象。
二、实验基本原理 平菇目前广泛采用的是发酵料塑料袋栽培法。
聚乙烯塑料袋具有保温湿、防虫菌、易成功、便管理、可移动、空间利用率高等优点。
三、所涉及的课程及知识点 在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学、仪器分析（……），…… 四、仪器设备及实验材料 1.器具：
聚乙烯栽培袋、线绳、铁锨、水桶、大盆、脸盆、喷雾器、大镊子等。
2.材料：
棉籽壳、石灰粉、过磷酸钙、栽培种、高锰酸钾等。
五、实验内容与方法 实验内容 制作发酵料袋栽 排袋发菌利用课余时间进行观察和管理 方法步骤 1、发酵料的制作 培养料配方籽壳96%，石灰2%，过磷酸钙1%，石膏1％。
拌料提前一天将棉籽壳摊薄、撒石灰粉、洒水预湿。
然后拌入石灰及石膏粉，过磷酸钙溶解少量水后拌入。
最后加清水将培养料拌到含水量，调~。
发酵建长形堆，纵横打料孔，顶部盖草被，四周围薄膜。
料温升至65℃时保持一天翻堆，共翻2~3次堆。
气温高时可在最后一次翻堆时喷%多菌灵。
发好的料呈咖啡色、有香味、~、含水量以指缝泌水而不下滴为宜。
2.装袋 用宽25～28×50cm聚乙烯袋，事先扎3道微孔线一端扎活结，层播法装袋，上端再扎活结。
两端用种量各占总用种量的2/5，中层1/5，多撒于四周。
菌袋要装得外紧内松，光滑、饱满、充实。
3.排袋发菌 根据气温决定菌袋放置的场所及袋层高度。
管理要点是：
防杂菌、害虫，料温20～25℃，光线暗，空气新，空气湿度60%～70％。
7～10天倒换一次菌袋位置。
直至白色菌丝长满菌袋，吃透培养料。
4.分化加大温差（8～10℃）、提高空气湿度、加强通气及光照条件。
5.育菇现原基时解口或划口，保持光照及85%~90％空气湿度，随菇体的长大加强通气条件，直至菌盖边缘变薄时成丛扭收或割收。
喷水时，勿强水喷、硬风吹；勿喷珊瑚期以前的菇；勿喷后闷湿。
通风时，勿通对流风与干热风，有风天气开背风窗。
六、实验报告与实验汇报 及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。
每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题 1.将自己装的菌袋进行管理，记录各期的生长情况，并对异常现象进行原因分析。
2.培养料在发酵中出现变黑、发粘、发臭现象，是哪些原因导致的？
3.子实体生长期，若喷水过多及通风太强的易出现哪些问题？
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