选修1专题2课题1微生物的实验室培养(第二课时)导学案教师版文档格式.doc

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④将已冷却的接种环伸入菌液中，__沾取_一环菌液。

⑤将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。

⑥__左手_将培养皿皿盖打开一条缝隙，__右手_将沾有菌种的接种环迅速伸入_平板内_，划三至五条平行线，盖上皿盖。

注意不要划破培养基。

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。

重复以上操作，在三、四、五区域内划线。

注意不要将_最后一区的划线与_第一区_相连。

⑧将_平板倒置，放入培养箱中培养。

（2）_稀释涂布平板法_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

①系列稀释操作

a．取盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。

b．用移液管吸取1mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。

用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。

c．从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍液。

依此类推。

②涂布平板操作

a．将_涂布器_浸在盛有酒精的烧杯中。

b．取不超过0.1mL的_菌液，滴加到培养基表面。

c．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。

d．用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

2．注意事项

（1）平板划线法

①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_灭菌_，划线操作结束时，仍需灼烧_灭菌。

②从第二次以后的划线操作总是从_从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

【思考】

①为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？

在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？

为什么？

答：

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；

每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。

划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

②在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

以免接种环温度太高，杀死菌种。

③在作第二次以及其后的划线操作是赤什么总是从上一次划线的末端开始划线？

划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（2）稀释涂布平板法

稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_无菌”，应特别注意：

①酒精灯与培养皿的距离要合适。

②吸管头不要接触任何其他物体。

③吸管要在酒精灯火焰周围使用。

3．微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价

（1）培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。

（2）在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。

（3）培养12h和24h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。

原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。

（4）频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。

前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，第3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；

后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在－20℃的冷冻箱中。

4．菌种的保存

为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。

对于频繁使用的菌种，我们可以采用__临时保藏__法；

对于需要长期保存的菌种，可以采用_甘油管法__法。

习题巩固

1、有关平板划线操作正确的是（）

A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

C．将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可

D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养

2、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（）

A．防止杂菌污染B．消灭杂菌（因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物）

C．培养基和发酵设备都必须灭菌D．灭菌必须在接种前

3、将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是（）

A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基是否被杂菌污染

C．没必要放入未接种的培养基D．为了下次接种时再使

4、 

下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）

A．含碳有机物B．蛋白胨C．含碳无机物D．花生粉饼等天然物

5、有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）

A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释

B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面

C．再放在适宜条件下培养

D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落

6、涂布平板操作需要用到（）

A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、移液管、酒精灯

C．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、接种环、酒精灯

7、下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。

请回答：

试剂

用量

牛肉膏

5.0g

蛋白胨

10.0g

NaCl

琼脂

20.0g

水

1000mL

（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

上述培养基配方中能充当碳源的成分是__牛肉膏_和__蛋白胨。

培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行__灭菌_处理。

（2）分离纯化微生物最常使用的接种方法是_平板划线法和稀释涂布平板法两种。

在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是__灼烧灭菌__。

（3）假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？

稀释倍数不够，菌液的浓度太高；

划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；

培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染。