生物化学实验内容Word格式.docx

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类 

别

1

植物组织中可溶性总糖的提取

4

必 

修

验证性实验

2

蒽酮比色定糖法

3

卵磷脂的提取和鉴定

皂化价的测定

5

牛乳中酪蛋白的制备

6

蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法）

7

酵母RNA的提取

8

RNA的定量测定（苔黑酚法）

三、成绩

包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。

四、要求

（1） 

实验过程中同组人可以配合进行；

（2） 

实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；

（3） 

实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；

（4） 

对实验结果进行简单的分析.

实验一植物组织中可溶性总糖的提取

一、实验目的

1.掌握可溶性总糖的概念和性质。

2.掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。

二、实验原理

可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。

它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。

总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。

可溶性总糖提取方法包括：

热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。

其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。

本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。

三、实验用品

1.仪器设备：

电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；

可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。

可共用。

2.玻璃器皿：

研钵1套；

100mL锥形瓶1个；

25mL量筒1个；

玻璃棒1根；

100mL烧杯2个；

胶头滴管1支；

过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；

不锈钢刮勺1个；

剪刀1把。

此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。

3.药品试剂：

新鲜植物叶片；

蒸馏水。

4.其他：

9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；

纸巾若干；

标签纸若干。

每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。

四、实验操作

取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。

称取0.5g，剪碎，加入5～10ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。

五、实验结果与讨论

1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。

2、结合实验二结果计算含量

六、实验注意事项

（1）若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。

（2）加热时应小心，避免灼伤皮肤。

七、思考题

1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。

2、用水提取的糖类有哪些？

实验二蒽酮比色法测定可溶性总糖含量

一、实验目的

1、掌握蒽酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法

2、掌握标准曲线的绘制

3、掌握分光光度计的使用方法

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。

三、实验材料、试剂与仪器设备

1、仪器

分光光度计（配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶）；

电子天平（配称量纸）；

离心机（配离心管），恒温水浴锅。

2、玻璃器皿

0.5mL、1mL、5mL刻度吸管各2支（配合适大小吸耳球）；

10mL具塞具刻度试管10支（应干净干燥，放到试管架上）；

100mL烧杯2个；

10mL量筒1个；

长胶头滴管1根。

此部分为每组所用，放置各实验台上。

3、试剂：

（1）~（3）由实验员配制，贴好标签

（1）80%乙醇

（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）：

准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至1000mL。

（3）蒽酮试剂：

称取1.0g蒽酮，溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）1000mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用2~3周。

（4）样品贮备液：

学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。

四、实验步骤

1、标准曲线制作

取6支试管，从0~5分别编号，按下表加入各试剂：

表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量

管号

100μg/mL葡萄糖溶液（mL）

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

蒸馏水（mL）

蒽酮试剂（mL）

5.0

葡萄糖量（μg）

20

40

60

80

100

将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg）为横坐标绘制标准曲线。

2、样品测定

将样品贮备液用蒸馏水稀释到合适范围，取该溶液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。

重复3次。

按照下式计算可溶性总糖的含量：

w=nm1/m2100%

式中：

w---表示总糖含量

n---稀释倍数

m1-----从标准曲线查得糖量,μg.

m2------样品重（g）.

v1------提取物总体积（ml）

v2------测定时样品体积（ml）

五、结果与讨论：

1．绘制出标准曲线 

2．含量的计算 

（1）加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。

（2）水浴加热时应打开试管塞。

1、植物组织中糖的测定方法还有哪些？

举例说明其原理和优缺点？

2、制作标准曲线时应注意哪些问题？

实验三卵磷脂的提取与鉴定

1、掌握磷脂类物质的结构和性质。

2、掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。

3、掌握乙醇做溶剂提取的操作技术。

磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右）。

卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；

此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。

新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。

卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。

甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；

磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；

胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。

这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。

三、仪器和试剂

1、仪器设备

电子天平（精确到0.00g，配9cm称量纸）；

减压蒸馏装置（旋转蒸发仪+水循环真空泵+相应橡胶管，用前由实验员检查是否正常；

配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶，2500mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇，与仪器同台放置，提取时重复使用）。

此部分共用。

回流装置一套（500mL恒温磁力搅拌电热套（配2cm磁子）1台+250mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；

过滤装置一套（铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干）；

100mL量筒各一个；

100mL烧杯一个；

长胶头滴管1个；

长药勺1个；

试管2支；

蒸发皿1个。

3、药品试剂（3）由实验员配制，贴好标签。

（1）鸡蛋黄

（2）95%乙醇

（3）10%氢氧化钠溶液

4、其它：

红色石蕊试纸若干；

剪刀2把；

一次性手套若干；

四、操作步骤

1、卵磷脂的提取

取250mL24#磨口圆底烧瓶，放入2cm的磁力搅拌子，加入蛋黄20g和95%乙醇60mL，搅拌加热，稍冷后过滤到250mL具塞磨口锥形瓶中，盖好塞子，滤渣同法提取2~3次，合并提取液，如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。

提取液减压蒸馏至少量，回收乙醇（放入回收瓶中），将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。

称重并计算得率。

2、卵磷脂的鉴定

取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。

五、结果与分析

1、观察产品的颜色外观

2、计算产率

3、鉴定结果

六、思考题：

1、卵磷脂的生物学功能有哪些？

2、卵磷脂提取过程中，加入95%乙醇的作用是什么？

实验四脂肪皂化价的测定

一、目的

1、掌握油脂的主要理化性质

2、掌握油脂皂化价的测定原理和方法。

3、掌握滴定分析法的操作

二、原理

脂肪的碱水解称皂化作用。

皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数称为皂化价。

脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。

三、仪器、试剂和材料

1、仪器设备：

电子天平（精确到0.000g，配5ml称量瓶）。

2、玻璃器皿：

酸碱滴定管1支；

50ml量筒1个；

磨口具塞锥形瓶2只；

100ml烧杯1只；

玻棒1根。

3、药品试剂：

（2）~（5）由实验员配制，贴好标签。

（1）豆油

（2）0.100mol/L氢氧化钠乙醇溶液：

以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。

（3）0.100mol/L标准盐酸溶液：

取浓盐酸8.5ml，加蒸馏水稀释至1000