生物化学实验内容Word格式.docx

1、类别1植物组织中可溶性总糖的提取4必修验证性实验2蒽酮比色定糖法3卵磷脂的提取和鉴定皂化价的测定5牛乳中酪蛋白的制备6蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法）7酵母RNA的提取8RNA的定量测定（苔黑酚法）三、 成绩包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。四、要求（1）实验过程中同组人可以配合进行；（2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3） 实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；（4） 对实验结果进行简单的分析.实验一 植物组织中

2、可溶性总糖的提取一、实验目的1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。3掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。二、实验原理可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖

3、溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。三、实验用品 1. 仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。2. 玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。3. 药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。4. 其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）

4、；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。四、实验操作取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。称取0.5g，剪碎，加入510ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取23次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。五、实验结果与讨论 1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。2、结合实验二结果计算含量六、实验注意事项（1） 若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，

5、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。（2） 加热时应小心，避免灼伤皮肤。七、思考题1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。2、用水提取的糖类有哪些？实验二 蒽酮比色法测定可溶性总糖含量一、 实验目的1、 掌握蒽酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法2、 掌握标准曲线的绘制3、 掌握分光光度计的使用方法糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（

6、因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。三、实验材料、试剂与仪器设备1、仪器分光光度计（配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶）；电子天平（配称量纸）；离心机（配离心管），恒温水浴锅。2、玻璃器皿0.5mL、1 mL、5 mL刻度吸管各2支（配合适大小吸耳球）；10 mL具塞具刻度试管10支（应干净干燥，放到试管架上）；100 mL烧杯2个；10 mL量筒1个；长胶头滴管1根。此部分为每组所用，放置各实验台

7、上。3、试剂：（1）（3）由实验员配制，贴好标签（1）80 %乙醇（2）葡萄糖标准溶液（ 100 g/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 1000 mL。（3）蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 3 周。（4）样品贮备液：学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。 四、实验步骤1、标准曲线制作 取6支试管，从0 5分别编号，按下表加入各试剂：表 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量管 号100 g/mL 葡萄糖溶液（ m

8、L ）0.20.40.60.81.0蒸馏水（ mL ）蒽酮试剂（ mL ）5.0葡萄糖量（ g ）20406080100将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ g ）为横坐标绘制标准曲线。2、样品测定 将样品贮备液用蒸馏水稀释到合适范围，取该溶液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。 按照下式计算可溶性总糖的含量：w=n m1 / m2 100%式中：w-表示总糖含量 n-稀释倍数m1-从标准曲线查得糖量, g .m2-样品重（ g ）.v1-提取物总体积（m

9、l）v2-测定时样品体积（ml）五、结果与讨论：1绘制出标准曲线2含量的计算（1）加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。（2）水浴加热时应打开试管塞。1、植物组织中糖的测定方法还有哪些？举例说明其原理和优缺点？2、制作标准曲线时应注意哪些问题？实验三 卵磷脂的提取与鉴定1、掌握磷脂类物质的结构和性质。2、掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。3、掌握乙醇做溶剂提取的操作技术。磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右）。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利

10、用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。三、仪器和试剂1、仪器设备电子天平（精确到0.00g，配9cm称量纸）；减压蒸馏装置（旋转蒸 发仪+水循环真空泵+相应橡胶管，用前由实验员检查是否正常；

11、配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶，2500mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇，与仪器同台放置，提取时重复使用）。此部分共用。回流装置一套（500mL 恒温磁力搅拌电热套（配2cm磁子）1台+250 mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；过滤装置一套（铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250 mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干）；100 mL量筒各一个；100 mL烧杯一个；长胶头滴管1个；长药勺1个；试管2支；蒸发皿1个。3、药品试剂（3）由实验员配制，贴好标签。（1）鸡蛋黄（2）95%乙醇（3）10%氢氧化钠溶液4、

12、其它：红色石蕊试纸若干；剪刀2把；一次性手套若干；四、操作步骤1、卵磷脂的提取 取250 mL24#磨口圆底烧瓶，放入2cm的磁力搅拌子，加入蛋黄20 g和95%乙醇60 mL，搅拌加热，稍冷后过滤到250 mL具塞磨口锥形瓶中，盖好塞子，滤渣同法提取23次，合并提取液，如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。提取液减压蒸馏至少量，回收乙醇（放入回收瓶中），将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。称重并计算得率。2、卵磷脂的鉴定 取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及25mL 氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，

13、并嗅其气味。五、结果与分析1、观察产品的颜色外观2、计算产率3、鉴定结果六、思考题：1、卵磷脂的生物学功能有哪些？2、卵磷脂提取过程中，加入95%乙醇的作用是什么？实验四 脂肪皂化价的测定一、目的1、 掌握油脂的主要理化性质2、掌握油脂皂化价的测定原理和方法。3、掌握滴定分析法的操作二、原理脂肪的碱水解称皂化作用。皂化1g 脂肪所需的KOH 的毫克数称为皂化价。脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。三、仪器、试剂和材料1、仪器设备：电子天平（精确到0.000g，配5 ml称量瓶）。2、玻璃器皿：酸碱滴定管1支；50ml量筒1个；磨口具塞锥形瓶2只；100ml烧杯1只；玻棒1根。3、药品试剂：（2）（5）由实验员配制，贴好标签。（1）豆油（2）0.100mol/L 氢氧化钠乙醇溶液：以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。（3）0.100mol/L标准盐酸溶液：取浓盐酸8.5ml ，加蒸馏水稀释至1000