昆虫sf9细胞培养_精品文档Word文档下载推荐.docx

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细胞来源：

Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。

此细胞系适用于InsectSelect系统。

这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。

（以上来自invitrogen）

细胞特点：

规则的带有颗粒球形。

贴壁紧。

标准条件的定义：

培养最低密度：

0.6×

106/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于90％。

活率低于90％细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）1×

106/mL将出现对数生长状态

传代培养：

传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。

贴壁培养:

贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后1：

5（细胞体积：

最后培养基体积）稀释维持对数生长。

形成单层细胞可以传代培养

悬浮培养：

在细胞密度达到2.0×

106-2.5×

106细胞/mL后将密度调整至0.7×

106-1.0×

106细胞/mL进行悬浮传代。

确保传代细胞密度不高于4×

106个/mL或保持密度高于1×

106个/mL以达到对数生长状态。

Sf9悬浮培养所需要的细胞数

培养基：

sf-900ⅢSFM（添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量）

培养瓶与培养体积：

冻存：

一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。

细胞需达到90％活率和80-90％融合的要求（如：

低代次）推荐冻存几管。

当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。

1.用细胞计数板计数细胞。

需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。

细胞可是悬浮或贴壁培养；

2.将无菌冻存管立于冰上，做好标记；

3.室温400-600×

g离心10min。

移除上清。

4.以给定的密度在冻存液中重悬细胞；

5.移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中；

6.置于-20℃1h，然后移至-80℃24-48h；

7.储存于液氮中。

转染的细胞：

需要的是对数期的细胞＞95%发育能力，可以完成成功的转染。

载氧：

对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。

积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50%

Sf900II和sf900Ⅲ的区别：

一般推荐Sf900II来大量表达蛋白

Sf900II含有表面活性剂（剪切力保护剂（保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害））

当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。

细胞培养的一般顺序：

复苏——传代——传代稳定——冻存

应当遵循的一般过程：

复苏——贴壁培养——悬浮——悬浮扩大培养（产生目标蛋白）

（也可不经过贴壁培养，直接悬浮培养）

贴壁时间：

45min

悬浮的转速：

80rpm

附：

离心机rcf与g的换算：

无血清培养基可以选择性加入一定的抑菌剂防止细菌或者真菌污染：

GIBCO-SFM900

加青霉素链霉素抑制细菌生长两性霉素B抑制真菌生长