新疆特色食品烤全羊的安全指标检测.docx

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新疆特色食品烤全羊的安全指标检测

新疆农业大学

专业文献综述

题目:

新疆特色食品——烤全羊的安全指标检测

姓名:

鲍敏

学院:

食品科学与药学学院

专业:

食品质量与安全

班级:

食安102班

学号:

104033202

指导教师:

王新梅

2012年12月16日

新疆农业大学教务处制

新疆特色食品——烤全羊的安全指标检测

作者：

鲍敏指导老师：

王新梅

摘要：

随着生活水平的提高，人们对食品卫生安全意识也逐步提高，对食品安全也提出了更高的标准。

本文主要针对新疆特产——烤全羊的食品安全指标（感官、理化、微生物指标）及其意义进行论述，重点介绍了食品微生物的检测。

为烤全羊的食品卫生提供参考依据。

关键字：

烤全羊、安全指标、检测

烤全羊（RoastWholeLamb）是新疆少数民族，尤其是维吾尔族人民膳食的一种传统地方风味肉制品，一道最富有民族特色的大菜，是该民族千百年来游牧生活中形成的传统佳肴，是新疆少数民族招待外宾和贵客的传统名肴，也是当下中原人非常喜食的肉制品了。

但是，烤全羊的食品卫生安全是否达标，成平中的微生物残留是否超标，是我们在享受美味的同时所必须注意的问题。

因此，我设计此实验检测新疆特色烤全羊的安全指标，以规范此类风味食品市场的运行，剔除不安全不合格的食品，保障广大消费者的健康。

那么，新疆特色烤全羊的安全检测如下：

一、感官检验

1.感官检验的意义

①对食品的可接受性作出判断。

②鉴别食品质量

因感官检验不仅能直接对食品的感官性状做出判断，而且可察觉异常现象的有无，并据此提出必要的理化检测和微生物检验项目，便于食品质量的检测和控制。

③指导新产品开发、市场调查以及家庭饮食等。

2.感官检验指标

无异味、无酸败味、无异物。

二、理化检验

1.理化检验的意义

①在食品的生产、加工、贮运过程中，防止食品污染，保证食品质量。

②通过对食品的理化检验，掌握食品营养素的含量和食品中有毒有害物质的种类及含量，以利于指导人们合理用餐。

③维护食品的信誉。

④食品的质量与卫生条件的好坏，不仅是衡量一个国家物质文明的标志，也是衡量一个国家精神文明的标志。

2.理化检验指标

理化检验指标应符合表1的规定。

项目

指标

水分/（g/100g）≤

20.0

复合磷酸盐a（以PO43-计）/（g/kg）≤

5.0

苯并（a）芘b/（μg/kg）≤

5.0

铅（Pb）/（mg/kg）≤

0.5

无机砷/（mg/kg）≤

0.05

镉（Cd）/（mg/kg）≤

0.1

总汞（以Hg计）/（mg/kg）≤

0.05

亚硝酸盐/（mg/kg）≤

30.0

表1理化指标

三、微生物检验

1.微生物检验的目的及意义

食品微生物检验的目的就是要为生产出安全、卫生、符合标准的食品提供科学依据。

通过微生物检验，可以判断食品加工环境的食品卫生状况，能够正确评价食品被微生物污染的程度，因而对食品进行微生物检验至关重要。

2.微生物指标

微生物指标应符合表2的规定。

项目

指标

菌落总数/（cfu/g）≤

50000

大肠菌群/（MPN/100g）≤

90

致病菌（沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌）≤

不得检出

表二微生物指标

3.微生物检验实验方案

3.1检样的制备

3.1.1采样用品

采样箱;灭菌塑料袋；有盖搪瓷盘；灭菌刀、剪子、镊子；灭菌带塞广口瓶；灭菌棉签；温度计；编号牌（或蜡笔、纸）。

3.1.2操作方法

3.1.2.1样品的采取和送检

一般采取制品200g，放入无菌容器内，立即送检；如条件不许可时，最好不超过3h。

送检时应注意冷藏，不得加入任何防腐剂。

检样送往化学室应立即检验或放置冰箱暂存。

3.1.2.2检样的处理

直接切取或称取25g，放入无菌乳钵内用灭菌剪子剪碎后，加灭菌海砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入灭菌水225mL，混匀后即为1：

10稀释液。

或用均质器以8000—10000r/min，均质1min，做成1：

10稀释液。

3.2微生物指标检验：

3.2.1菌落总数测定

3.2.1.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：

⑴恒温培养箱：

36℃±1℃，30℃±1℃。

⑵冰箱：

2℃—5℃。

⑶恒温水浴箱：

46℃±1℃。

⑷天平：

感量为0.1g。

⑸均质器。

⑹振荡器。

⑺无菌吸管：

1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

⑻无菌锥形瓶：

容量250mL、500mL。

⑼无菌培养皿：

直径90mm。

⑽pH计或pH比色管或pH试纸。

⑾放大镜或/和菌落计数器。

3.2.1.2培养基和试剂

3.2.1.2.1平板计数琼脂培养基：

⑴成分

胰蛋白胨5.0g

酵母浸膏2.5g

葡萄糖1.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000mL

pH7.0±0.2

⑵制法

将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。

分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。

3.2.1.2.2磷酸盐缓冲液：

⑴成分

磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g

蒸馏水500mL

pH7.2

⑵制法

贮存液：

称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。

稀释液：

取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。

3.2.1.2.3无菌生理盐水：

⑴成分

氯化钠8.5g

蒸馏水1000mL

⑵制法

称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

3.2.1.3检验程序

菌落总数的检验程序见图1。

3.2.1.4操作步骤

3.2.1.4.1样品的稀释

⑴固体和半固体样品：

称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:

10的样品匀液。

⑵液体样品：

以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:

10的样品匀液。

⑶用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:

10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:

100的样品匀液。

⑷按⑶操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。

每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

⑸根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

⑹及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

3.2.1.4.2培养

⑴待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。

水产品30℃±1℃培养72h±3h。

⑵如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按⑴条件进行培养。

3.2.1.4.3菌落计数

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。

菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。

⑴选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。

每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

⑵其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

⑶当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

3.2.1.5结果与报告

3.2.1.5.1菌落总数的计算方法

⑴若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。

⑵若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式①计算：

…………………………………①

式中：

N——样品中菌落数；

∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；

n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；

d——稀释因子（第一稀释度）。

⑶若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

⑷若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

⑸若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

⑹若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

3.2.1.5.2菌落总数的报告

⑴菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

⑵菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

⑶若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

⑷若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

⑸称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

3.2.2大肠菌群计数

3.2.2.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

⑴恒温培养箱：

36℃±1℃。

⑵冰箱：

2℃～5℃。

⑶恒温水浴箱：

46℃±1℃。

⑷天平：

感量0.1g。

⑸均质器。

⑹振荡器。

⑺无菌吸管：

1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

⑻无菌锥形瓶：

容量500mL。

⑼无菌培养皿：

直径90mm。

⑽pH计或pH比色管或精密pH试纸。

⑾菌落计数器。

3.2.2.2培养基和试剂

3.2.2.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：

⑴成分

胰蛋白胨或胰酪胨20.0g

氯化钠5.0g

乳糖5.0g

磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g

磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g

月桂基硫酸钠0.1g

蒸馏水1000mL

pH6.8±0.2

⑵制法

将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。

分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。

121℃高压灭菌15min。

3.2.2.2.2煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：

⑴成分

蛋白胨10.0g

乳糖10.0g

牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL

0.1%煌绿水溶液13.3mL

蒸馏水800mL

pH7.2±0.1

⑵制法

将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。

121℃高压灭菌15min。

3.2.2.2.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VioletRedBileAgar，VRBA）：

⑴成分

蛋白胨7.0g

酵母膏3.0g

乳糖10.0g

氯化钠5.0g

胆盐或3号胆盐1.5g

中性红0.03g

结晶紫0.002g

琼脂15g～18g

蒸馏水1000mL

pH7.4±0.1

⑵制法

将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调pH。

煮沸2min，将培养基冷却至45℃～50℃倾注平板。

使用前临时制备，不得超过3h。

3.2.2.2.4磷酸盐缓冲液：

⑴成分

磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g

蒸馏水500mL

pH7.2

⑵制法

贮存液：

称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。

稀释液：

取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。

3.2.2.2.5无菌生理盐水：

⑴成分

氯化钠8.5g

蒸馏水1000mL

⑵制法

称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

3.2.2.2.6无菌1mol/LNaOH：

⑴成分

NaOH40.0g

蒸馏水1000mL

⑵制法

称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

3.2.2.2.7无菌1mol/LHCl：

⑴成分

HCl90mL

蒸馏水1000mL

⑵制法

移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL，121℃高压灭菌15min。

3.2.2.3检验程序

大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1大肠菌群MPN计数法检验程序

3.2.2.4操作步骤

3.2.2.4.1样品的稀释

⑴固体和半固体样品：

称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:

10的样品匀液。

⑵液体样品：

以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:

10的样品匀液。

⑶样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。

⑷用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:

10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:

100的样品匀液。

⑸根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。

每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。

从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

3.2.2.4.2初发酵试验

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。

未产气者为大肠菌群阴性。

3.2.2.4.3复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。

产气者，计为大肠菌群阳性管。

3.2.2.4.4大肠菌群最可能数（MPN）的报告

按3.2.2.4.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。

3.2.3沙门氏菌检验

3.2.3.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

⑴冰箱：

2℃～5℃。

⑵恒温培养箱：

36℃±1℃，42℃±1℃。

⑶均质器。

⑷振荡器。

⑸电子天平：

感量0.1g。

⑹无菌锥形瓶:

容量500mL，250mL。

⑺无菌吸管：

1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

⑻无菌培养皿：

直径90mm。

⑼无菌试管：

3mm×50mm、10mm×75mm。

⑽无菌毛细管。

⑾pH计或pH比色管或精密pH试纸。

⑿全自动微生物生化鉴定系统。

3.2.3.2培养基和试剂

3.2.3.2.1培养基

沙门氏菌属显色培养基、氰化钾（KCN）培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基、丙二酸钠培养基。

3.2.3.2.2试剂

缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂、三糖铁（TSI）琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂（pH7.2）、糖发酵管、半固体琼脂、沙门氏菌O和H诊断血清、生化鉴定试剂盒。

3.2.3.3检验程序

沙门氏菌检验程序见图1。

3.2.3.4操作步骤

3.2.3.4.1前增菌

称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。

若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。

如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。

无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。

如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。

3.2.3.4.2增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。

同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。

3.2.3.4.3分离

分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。

于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。

3.2.3.4.4生化试验

⑴自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。

在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。

⑵接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。

于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。

将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备必要时复查。

①反应序号A1：

典型反应判定为沙门氏菌属。

如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。

如有2项异常为非沙门氏菌。

②反应序号A2：

补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。

③反应序号A3：

补做ONPG。

ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。

④必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。

⑶如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据4.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。

3.2.3.4.5血清学鉴定

3.2.3.4.5.1抗原的准备

一般采用1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。

O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2％～3％）培养基上再检查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时，可挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。

H抗原发育不良时，将菌株接种在0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2次，自远端取菌培养后再检查。

3.2.3.4.5.2多价菌体抗原（O）鉴定

在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴多价菌体（O）抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。

再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。

将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。

3.2.3.4.5.3多价鞭毛抗原（H）鉴定

同3.2.3.4.5.2。

3.2.3.5结果与报告

综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。

3.2.4金黄色葡萄球菌检验

3.2.4.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

⑴恒温培养箱：

36℃±1℃。

⑵冰箱：

2℃～5℃。

⑷天平：

感量0.1g。

⑸均质器。

⑹振荡器。

⑺无菌吸管：

1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

⑻无菌锥形瓶：

容量100mL、500mL。

⑼无菌培养皿：

直径90mm。

⑽注射器：

0.5mL。

⑾pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.2.4.2培养基和试剂

⑴10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤

⑵7.5%氯化钠肉汤

⑶血琼脂平板

⑷Baird-Parker琼脂平板

⑸脑心浸出液肉汤（BHI）

⑹兔血浆

⑺稀释液：

磷酸盐缓冲液

⑻营养琼脂小斜面

⑼革兰氏染色液

⑽无菌生理盐水

3.2.4.3检验程序

金黄色葡萄球菌平板计数程序见图2。

3.2.4.4操作步骤

3.2.4.4.1样品的稀释

⑴固体和半固体样品：

称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:

10的样品匀液。

⑵液体样品：

以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:

10的样品匀液。

⑶用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:

10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有