生物制品及其应用精.docx

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生物制品及其应用精

第十章 生物制品及其应用

§10-1 免疫诊断和免疫防治

一、免疫诊断与检测

（一）免疫血清学技术诊断与检测

1．疾病诊断

凝集试验沉淀试验中和试验

2．妊娠诊断

间接凝集试验或间接凝集抑制试验

间接血凝抑制试验

琼脂扩散试验等

3．生物活性物质的超微定量  

对动物、植物和昆虫体内微量激素、白细胞介素（IL）等生物活性物质的超微量测定。

4．物种鉴定

分析物种鉴定和生物分类的依据

用于人和动物血型的分类与鉴定。

5．免疫增强药物和疫苗研究

研究疫苗免疫效力

评价免疫增强药物的功效

6．免疫诊断与高新技术结合 

（二）变态反应诊断 

迟发型变态反应常用于诊断结核分支杆菌、鼻疽杆菌、布氏杆菌等细胞内寄生菌的感染。

例如，将结核菌素进行皮内注射同时点眼，可以诊断动物是否已经感染结核分支杆菌。

目前，用结核菌素进行皮内注射、点眼诊断是动物结核病的规范化检疫方法。

（三）细胞免疫测定技术 

1．E玫瑰花环试验 

2．T淋巴细胞转化试验。

3．细胞毒性T细胞试验 

二、免疫防治

获得性免疫的获得途径：

                        天然主动免疫（自然感染耐过）

             主动免疫

                        人工主动免疫（注射疫苗）

获得性免疫

                        天然被动免疫（获得母源抗体）

             被动免疫

人工被动免疫（注射免疫血清、卵黄抗体）

（一）主动免疫

动物自身在抗原刺激下主动产生特异性免疫保护力的过程称为主动免疫。

1．天然主动免疫 

概念：

动物在感染某种病原微生物耐过后产生的对该病原体再次侵入的抵抗力称为天然主动免疫。

自然感染耐过

2．人工主动免疫 

概念：

给动物接种疫苗，刺激机体免疫系统发生应答反应，产生的特异性免疫力称为人工主动免疫。

接种的物质是刺激产生免疫应答的各种疫苗制品，包括各种疫苗、类毒素等。

特点：

有一定的诱导期，出现免疫力的时间与抗原种类有关

免疫力持续时间长，免疫期可达数月甚至数年，而且有回忆反应，某些疫苗免疫后，可产生终生免疫。

生产中人工主动免疫是预防和控制传染病的行之有效的措施之一。

（二）被动免疫

并非动物自身产生，而是被动接受其他动物形成的抗体或免疫活性物质而获得特异性免疫力的过程称为被动免疫。

1．天然被动免疫 

概念：

新生动物通过母体胎盘、初乳或卵黄从母体获得母源抗体从而获得对某种病原体的免疫力称为天然被动免疫。

动物在生长发育的早期可通过获得母源抗体增强免疫力，以保证早期的生长发育。

在初乳中的IgG、IgM可抵抗败血性感染，IgA可抵抗肠道病原体的感染。

然而母源抗体可干扰弱毒疫苗对幼龄动物的免疫效果，导致免疫失败是其不利的一面。

2．人工被动免疫 

概念：

给机体注射免疫血清、康复动物血清或高免卵黄抗体而获得的对某种病原体的免疫力称为人工被动免疫

如抗犬瘟热病毒血清可防治犬瘟热，精制的破伤风抗毒素可防治破伤风，尤其是患病毒性传染病的珍贵动物，用抗血清防治更有意义。

特点：

注射免疫血清可使抗体立即发挥作用，无诱导期，免疫力出现快

抗体在体内逐渐减少，免疫维持时间短，根据半衰期的长短，一般维持1～4周。

§10-2 生物制品及其应用

一、生物制品的概念

利用微生物、寄生虫及其组织成分或代谢产物以及动物或人的血液与组织液等生物材料为原料，通过生物学、生物化学以及生物工程学的方法制成的，用于传染病或其他疾病的预防、诊断和治疗的生物制剂称为生物制品。

狭义的生物制品是指利用微生物及其代谢产物或免疫动物而制成的，用于传染病的预防、诊断和治疗的各种抗原或抗体制剂。

主要包括疫苗、免疫血清和诊断液三大类。

二、生物制品的命名原则

   根据中华人民共和国《兽用新生物制品管理办法》规定，生物制品命名原则有10条。

   1．生物制品的命名原则以明确、简练、科学为基础原则。

   2．生物制品名称不采用商品名或代号。

   3．生物制品名称一般采用“动物种名+病名+制品名称”的形式。

诊断制剂则在制品种类前加诊断方法名称。

如：

牛巴氏杆菌病灭活疫苗、马传染性贫血活疫苗、猪支原体肺炎微量间接血凝抗原。

特殊的制品命名可参照此方法。

病名应为国际公认的、普遍的称呼，译音汉字采用国内公认的习惯定法。

4．共患病一般可不列动物种名。

如：

气肿疽灭活疫苗、狂犬病灭活疫苗。

   5．由特定细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体等微生物以及寄生虫制成的主动免疫制品，一律称为疫苗。

例如：

仔猪副伤寒活疫苗、牛瘟活疫苗、牛环形泰勒虫疫苗。

   6．凡将特定细菌、病毒等微生物及寄生虫毒力致弱或采用异源毒制成的疫苗，称“活疫苗”；用物理或化学方法将其灭活后制成的疫苗，称“灭活疫苗”。

   7．同一种类而不同毒（菌、虫）株（系）制成的疫苗。

可在全称后加括号注明毒（菌、虫）株（系）。

例如：

猪丹毒活疫苗（GC42株）、猪丹毒活疫苗（G4T10株）。

   8．由两种以上的病原体制成的一种疫苗，命名采用“动物种名+若干病名+x联疫苗”的形式。

例如：

羊黑疫、快疫二联灭活疫苗，猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联活疫苗。

   9．由两种以上血清型制备的一种疫苗，命名采用“动物种名+病名+若干型名+x价疫苗”的形式。

例如：

口蹄疫O型、A型双价活疫苗。

10．制品的制造方法、剂型、灭活剂、佐剂一般不标明。

但为区别已有的制品，可以标明。

三、兽医临床常用的生物制品及应用

（一）疫苗 

概念：

利用病原微生物、寄生虫及其组分或代谢产物制成的，用于人工主动免疫的生物制品称为疫苗。

用于预防疫病

1．疫苗的种类 。

（1）活疫苗 简称活苗

强毒苗：

现在的生产中应严格禁止。

弱毒苗：

优点是能在动物体内有一定程度的增殖，免疫剂量小，免疫保护期长，不需要使用佐剂，应用成本低。

缺点是弱毒苗有散毒的可能或有一定的组织反应，难以制成联苗，运输保存条件要求高，现多制成冻干苗。

异源苗是用具有共同保护性抗原的不同种病毒制成的疫苗

（2）灭活疫苗 简称死苗。

优点是研制周期短，使用安全，易于保存和运输，容易制成联苗或多价苗

缺点是不能在动物体内增殖，使用剂量大，免疫保护期短，通常需加佐剂以增强免疫效果，常需多次免疫且只能注射免疫。

（3）代谢产物疫苗 利用细菌的代谢产物如毒素、酶等制成的疫苗。

如：

破伤风类毒素

（4）亚单位疫苗 除去病毒核酸用提纯的蛋白质衣壳制成的疫苗

优点：

仅含病毒的抗原成分，无核酸，因而无不良反应，使用安全，效果较好。

缺点：

制备困难，价格昂贵。

降低成本是推广的关键。

（5）生物技术疫苗 

基因工程亚单位疫苗：

合成肽疫苗：

抗独特性疫苗：

DNA疫苗：

基因工程活疫苗：

包括基因缺失苗、重组活载体疫苗及非复制性疫苗三类。

（6）多价苗和联苗 多价苗是指将细菌（或病毒）的不同血清型混合制成的疫苗

联苗是指由两种以上的细菌或病毒联合制成的疫苗，一次免疫可达到预防几种疾病的目的。

如猪瘟—猪丹毒—猪肺疫三联苗，新城疫—减蛋综合症—传染性法氏囊病三联苗，犬的六联苗等。

   （7）寄生虫疫苗 

2．疫苗使用的注意事项

（1）疫苗的质量    

（2）疫苗的保存和运输 

（3）疫苗的稀释与及时使用

（4）选择适当的免疫途径 

（5）制定合理的免疫程序 。

（6）免疫剂量、接种次数及时间间隔

（7）疫苗的型别与疫病型别的一致性 

（8）药物的干扰 

（9）防止不良反应的发生

（二）免疫血清 

概念：

动物经反复多次注射同一种抗原物质（菌苗、疫苗、类毒素等）后，机体体液中尤其血清中产生大量抗体，由此分离所得的血清称为免疫血清，又称高免血清或抗血清。

常用于传染病的紧急预防和治疗，属人工被动免疫。

   1．免疫血清的分类 

根据制备免疫血清所用抗原物质的不同分为：

抗菌血清  抗病毒血清   抗毒素

根据制备免疫血清所用动物的不同分为：

同种血清  异种血清

   家禽常用卵黄抗体制剂

2．免疫血清使用的注意事项 

（1）早期使用 

（2）多次足量

   （3）血清用量 

   （4）途径适当 

   （5）防止过敏 

（三）诊断液 

概念：

利用微生物、寄生虫或其代谢产物，以及含有其特异性抗体的血清制成的，专供传染病、寄生虫病或其他疾病诊断以及机体免疫状态检测用的生物制品，称为诊断液。

种类：

诊断抗原：

变态反应性抗原  血清学反应抗原

诊断抗体（血清）：

诊断血清  诊断用特殊抗体

§10-3 常用生物制品的制备及检验   

一、疫苗的制备及检验

（一）菌种、毒种的一般要求

1．背景资料完整 

2．生物学特性典型 

3．遗传性状稳定

（二）菌种、毒种的鉴定与保存。

1．菌种、毒种的鉴定 

2．菌种、毒种的保存 

（三）灭活、灭活剂与佐剂

1．灭活与灭活剂 灭活的方法有两种：

物理法：

加热法是一种常见的物理灭活法，但疫苗生产上主要采用化学灭活法。

化学法：

来进行灭活的试剂称为灭活剂。

如甲醛、苯酚、结晶紫及烷化剂等

2．佐剂

（1）佐剂的概念本身无免疫原性，但与抗原物质合用能增强抗原的免疫原性和机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质称为佐剂。

（2）佐剂的分类与常用佐剂 佐剂可简单地分为两类

贮存型：

与抗原混合成悬浊状态，使抗原在注射局部存留时间延长，通过抗原的缓慢释放，持续刺激机体免疫系统。

如：

氢氧化铝胶 白油-Span

非贮存型：

不与抗原混合，分别在机体不同部位同时注射也可发挥佐剂作用。

如：

吐温-80 蜂胶

（四）疫苗的制备

1．细菌性灭活苗的制备（图12-1）：

无菌条件下无菌操作

（1）种子培养 

（2）菌液培养 

（3）灭活与浓缩 

（4）配苗与分装 

2．细菌性活疫苗的制备

（1）种子液及菌液培养 

（2）浓缩、配苗与冻干 

3．病毒性组织苗的制备（图12-2）

（1）种毒与接种 

（2）收获与制苗 

4．病毒性禽胚苗的制备

（1）种毒与接毒 

（2）收获与配苗 

5．病毒性细胞苗的制备

（1）培养液与细胞 

（2）接毒、收获和配苗

（五）成品检验

1．纯度检验及活菌计数

（1）纯度检验 即无菌检验。

（2）活菌计数 

2．安全与效力检验

（1）安全检验 

（2）效力检验 主要包括免疫原性、免疫产生期与持续期的检验

可采用活菌计数、病毒量滴定或血清学试验等多种方法

但最常用的仍是动物保护试验，即体内中和试验。

3．其他检验

（1）物理性状检验 。

（2）真空度检查 

（3）残余水分测定 

二、免疫血清的制备及检验

（一）动物的选择与管理

1．动物的选择

2．动物的管理 

（二）免疫原与免疫程序

1．免疫原 制备免疫血清用的免疫原均须经过无菌检验。

2．免疫程序 

（三）采血与抗血清的提取

1．采血 采血必须无菌操作

2．抗血清的提取 一般不加抗凝剂

（四）免疫血清的检验 

1．无菌检验  

2．按规定进行安全检验和效力检验

三、卵黄抗体的制备