本科学生综合性实验报告.docx
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本科学生综合性实验报告
本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院专业、班级
实验课程名称细胞生物学实验
教师及职称
开课学期至学年学期
填报时间年月日
云南师范大学教务处编印
一、试验设计方案
实验序号
五
实验名称
人类淋巴细胞株培养
实验时间
2011年11月1日至22日
实验室
生物综合实验室1
1．实验目的
①能独立地进行用于细胞培养的个中器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
②练掌握RPMI1640培养基的配制方法。
③熟练掌握细胞传代培养的操作方法。
④观察外培细胞在不同时期的形态变化及生长状况。
⑤掌握死活细胞的鉴别原理及方法。
2．
实验原理、实验流程或装置示意图
实验原理：
清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌操作的要求程度很高。
细胞培养不好与清洗不彻底有很大关系。
灭菌手段的选择也十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
细胞培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。
合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。
其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。
它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必需的生长因子；酶、微量元素和激素；保护作用；提供伸展和贴附因子等，是合成培养基所无法替代的。
此外它还能中和有毒物质（重金属、抗菌素）的毒性。
L-谷氨酰胺:
氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养基提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
细胞传代培养：
当原代培养细胞或细胞系细胞增殖达到一定密度后（一般形成致密单层），则需要做再培养。
即将培养的细胞分散后，以适当比例转移到另一个或几个容器中扩大培养，此过程为传代培养。
一般将传代培养的累积次数作为传代细胞的代数。
悬浮型细胞培养常见于淋巴细胞、白血病细胞、骨髓瘤细胞和腹水型恶性细胞等的培养。
由于这类细胞或细胞集体可悬浮在液体培养基中，而不附着在固体表面上，因此无论原代培养或传代培养的细胞增殖过程都没有贴附性细胞那种明显可辨的3个变化阶段，其培养的可见效果是细胞数目的增多及溶液中细胞浓度和密度的加大。
悬浮型细胞传代培养的最大特点是原代细胞不必经过机械分离或消化酶消化处理，传代时只须把培养的悬浮细胞做适度稀释或把培养细胞经简单的离心处理后再加入适量的培养液即可培养。
因此，细胞在从原代到传代的转变过程中遭受的机械损伤和化学损伤的可能性较少，损伤程度也较轻，相对而言，传代的成功率较高。
细胞的存活率是反映细胞群体生活状态的重要指标。
多种方法可以鉴别细胞的死活，最常用到的方法是染色排除法。
许多酸性物质不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，却能渗入死亡的细胞内，使其着色，以次来区别死活细胞。
试验流程：
3．实验设备及材料
仪器：
超净工作台、干燥箱、过滤器、超净工作台、多重蒸馏水器、磁力搅拌器、天平、微量加样器（移液枪）、倒置显微镜、光学显微镜、高压灭菌锅、蒸馏水器、超低温冰箱
二氧化碳培养箱
材料：
微孔滤膜（直径25mm）、孔径为0.22um、细胞培养瓶、量筒、研钵、烧杯、漏斗、滤纸、pH试纸、微孔过滤器（0.22μm）、注射器、各种规格的Tip、离心管、血球计数板、滴管、培养细胞、人类淋巴细胞株
试剂：
75%酒精、重铬酸钾、浓硫酸、NaOH、HCl、酚红、RPMI1640干粉、小牛血清、青霉素、链霉素、NaHCO3、L-谷氨酰胺、三蒸水、0.4%台盼蓝溶液、台盼蓝（染料）、乙醇
4．实验方法步骤及注意事项
方法步骤
细胞培养准备工作：
（一）清洗
新玻璃器皿的清洗：
先用自来水刷洗，再浸泡5%稀盐酸中和玻璃表面的碱性物质和有害物质。
使用过的玻璃器皿的清洗
（1）立即进入清水，避免干涸难洗；
（2）用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥；
（3）浸酸性洗液过夜；
（4）从洗液捞出自来水冲洗10~15次去除酸性洗液，蒸馏水刷洗10次，倒置烘干；
（5）包装（牛皮纸或不透水纸）；
（6）高压（15磅20min）或干热（160度2h）灭菌；
（7）备用。
（二）胶塞处理
（1）新胶塞应先用清水清洗之后再用0.2%NaOH煮沸10~20min。
（2）自来水清洗10次
（3）用1%稀盐酸浸泡30min。
（4）自来水清洗10次，蒸馏水刷洗10次。
晾干
（5）旧胶塞不必用酸碱处理可直接用洗涤剂煮沸清洗数次，过蒸馏水，晾干，包装高压灭菌，可使用。
（三）塑料制品的清洗
（1）用洗涤剂清洗，自来水冲洗数遍
（2）强（次强）酸洗液浸泡2~6h.
（3）自来水冲洗10次以上，蒸馏水刷洗10次
（4）浸泡在70%乙醇0.5~1h,备用。
（5）用前从乙醇中取出，在超级工作台内紫外线照射1h。
（四）Tip和Tube的清洗
（1）新的国产Tip和Tube如用于非RNA提取时可用蒸馏水刷洗，晾干，高压灭菌后使用。
（2）用于RNA提取时，用蒸馏水刷洗后再用DEPC水（抑制RNA酶）浸泡过夜晾干，高压灭菌后使用。
（3）使用过的Tip和Tube用后浸泡在0.2mol/LNaOH或0.2mol/LHCl溶液中，清水洗过，自来水清洗10次晾干，进洗液2~24h。
晾干，放入饭盒高压灭菌，备用。
（五）洗液的配制
常用的洗液是硫酸-重铬酸钾溶液。
洗液可根据需要配制不同的浓度
配制方法：
（1）将重铬酸钾放入大烧杯中，加入蒸馏水放在石棉网上加热至沸腾并搅拌，使重铬酸钾充分溶解。
（2）将重铬酸钾倒入酸缸中，然后缓慢加入浓硫酸并用一长玻璃棒不断搅拌，充分溶解。
注意：
操作时注意安全，穿戴好耐酸手套和围裙，防止洗液飞溅到衣物皮肤上，不慎飞溅到皮肤应立即用大量清水冲洗。
（六）消毒和灭菌
（1）射线消毒灭菌
主要使用X、60Co进行消毒灭菌，用于牛血清或塑料制品。
（2）紫外线消毒
一般用无臭氧型紫外灯。
一般20min，71%细菌消灭；40min后79%细菌消灭，60min后86%细菌消灭。
紫外线照射时间照射再长也不能100%灭菌，最多只能达到90%。
（3）干热灭菌
主要用于玻璃器皿的灭菌。
将用于细胞培养的器皿放入干燥箱内，加热至160度，保温90~120min。
用于RNA提取实验的用品则需要180度，保温5~8h.
（4）湿热灭菌
也称高压蒸汽灭菌，是最有效的一种灭菌方法。
主要应用布类、橡胶、金属器械、玻璃器皿、塑料以及加热后不发生沉淀的无机溶液。
（5）滤过灭菌
用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液。
（七）化学消毒法
（1）70%（75%）酒精消毒
（2）0.1%新洁尔灭消毒
（3）来苏儿水消毒
（4）0.5%过氧乙酸消毒
（5）乳酸蒸汽消毒
（6）37%甲醛加高锰酸钾消毒
（7）煮沸消毒
培养基的配制
（一）准备（清洗与灭菌）
（二）合成培养基的配制
1.1%酚红：
配制0.1mol/LNaOH100ml。
称量1g酚红于研钵中，取30ml0.1mol/LNaOH逐渐加入研钵中，尽量研细，然后过滤。
过滤后的酚红液加三蒸水至100ml。
4℃保存。
2.饱和NaHCO3的配制：
v称取10g的NaHCO3溶于200ml三蒸水中，灭菌后分装于50ml试剂瓶。
4℃保存。
3．RPMI1640培养液配制：
配制50mlRPMI1640培养液：
每组称取RPMI1640干粉0.52g，溶于50ml的三蒸水。
置于搅拌器上搅拌20min，直到液体变为澄清为止。
4.RPMI1640合成培养基配制：
v加入0.1ml1%的酚红，通入CO2，使液体变为金黄色，说明培养基完全溶好。
配制好的培养基，用时用饱和NaHCO3液调节pH至6.8-7.0。
溶好以后的培养液在超净台中进行0.22μm滤过除菌，分装至细胞培养瓶中。
瓶口封好，-20℃或4℃贮存。
（三）小牛血清的处理
新买的新生小牛血清一定要灭活。
将买来的新生小牛血清不开封置于水浴锅中56℃，30min，期间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
处理后的血清贮存于4℃。
（四）生长培养基的配制
1．双抗：
（100000U/ml）
v160万单位青霉素/瓶+8ml3DW=20万单位/ml
1g链霉素+5ml3DW=200000μg/ml
各取以上的液体5ml混合，使其浓度为10万单位/ml，0.22μm过滤至1.5ml离心管，-20℃贮存。
2．谷氨酰胺储备液（200mmol/L）：
v1.5g的谷氨酰胺溶于50ml三蒸水中
（30mg/ml=200mmol/L）,0.22μm过滤至1.5ml离心管中。
-20℃贮存。
3.RPMI1640生长培养基的配制
细胞传代
Ø选取拟作传代培养的样本，取0.5mL细胞悬浮液加入等量台盼蓝染液，混匀后用血球计数板计算细胞的成活率。
如果样本成活率高，无污染即可用于传代。
Ø用弯头吸管将原代培养瓶内的细胞吹打均匀，注意将那些半贴壁生长的细胞吹打脱离以免在移换容器时丢失。
Ø把细胞悬液吸入无菌离心管中，塞紧反口橡皮塞以防止空气污染，用1000r/min离心5min。
Ø吸去上清夜，加入适量的培养液，用吸管打匀制成细胞悬液。
Ø重复步骤1，计算细胞数，加入适量培养液把最终细胞数调节至1×105～3×105个/mL。
Ø把细胞悬浮分装至新备的细胞培养瓶中，置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养。
具体操作：
✧每小组先用一个培养瓶配制50ml的生长培养基
✧每人取10ml培养基到自己的细胞培养瓶内
✧然后向细胞培养瓶内接种400ul的人淋巴细胞株原液
✧放入二氧化碳培养箱，旋松瓶盖
✧根据细胞的数量看细胞瓶是否平放或直立放置
✧观察
死活细胞的鉴别
Ø取20ul细胞悬液放入干净的离心管中，加入等体积的0.4%的台盼蓝染液混合，放置1min。
Ø取一干净的血球计数板，盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。
注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而是细胞计数不准。
Ø低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。
找出计数板上的方格，计算四角大格内总的细胞数，压着大格线者只计左侧或上方，不计右侧或下方。
Ø结果记录
Ø计算：
每毫升原液细胞数=4大格细胞总数/4×10000×稀释倍数
细胞存活率（%）=（细胞总数-死细胞数）/细胞总数
血球计数板的分区与分格
1大格=16中格1大格=25中格
=16X25小格=25X16小格
=400小格=400小格
每个大方格边长为1mm，则每个大方格面积为1X1=1mm2。
盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室的体积为
0.1X1X1=0.1mm3
1ml=1000mm3
每个大格有400个小格，所以每个小方格体积为
0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml
注意事项
1、首次传代的细胞因需适应新的环境，可适当增加其接种量，以促进其生存与增殖。
2、在对细胞进行吹打时，不要用力过猛，尽量不出现气泡，以免损伤细胞。
3、传代培养的过程较长，细胞被污染的可能增加，因此，必须严格进行无菌操作。
4、注意控制细胞浓度。
5、沉淀后的小牛血清不能再使用。
6、在供给细胞存活所必需的条件中，除适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度以外，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。
7、小牛血清一定要灭活，除去补体和支原体等有毒物质。
可用51℃水浴灭活，但不能用高压锅或紫外线消毒。
5、实验数据处理方法
Spss17.0中文版单因素方差分析
6、参考
1.辛华主编.现代细胞生物技术.北京：
高等教育出版社，2009.111~138
2.章静波等主编.细胞生物学实验技术.北京：
化学工业出版社，2006.63~70
3.丁勇，许瑞安主编.细胞生物技术实验指南.北京：
化学工业出版社，2009.124~130
4.丁明孝等主编.细胞生物学实验指南.北京：
高等教育出版社，2009.83~86
5.安利国，邢维贤主编.细胞生物学实验教程.北京：
科学出版社，2010.64~65
二．实验报告
1.现象与结果
淋巴细胞是一种悬浮型生长细胞，在培养过程中几乎不贴附于支持物上，而成悬浮状态生长。
在实验现象上，没有贴附性细胞那种明显可辨的3个变化阶段，其培养的可见效果是细胞数目的增多及溶液中细胞浓度和密度的加大，在原淋巴细胞团的周围可见新生细胞长出。
在倒置显微镜下，可以观察到淋巴细胞在实验培养下，明显地增多。
其生长过程分为四个期：
游离期、繁殖期、维持期、衰退期。
镜检，从培养箱中取出的培养液变黄，在光学显微镜下，细胞均匀分布，无聚集的细胞团，可见淋巴细胞呈球状，死细胞或不健康的细胞被染成蓝色，活细胞不被染色。
2．对实验现象、实验结果的分析及其结论
实验现象及结果的分析
（一）在淋巴细胞培养过程中，在倒置显微镜下观察到细胞逐渐增多培养液变黄并出现了四个生长期有以下解释：
Ø游离期：
淋巴细胞在原培养瓶中加以分离，经稀释后接种到新的培养瓶中，由于原生质收缩和表面张力以及细胞膜的弹性，细胞呈圆形，折光性强，悬浮状态。
Ø繁殖期：
淋巴细胞在丰富的营养状态下，快速生长、分裂，形成细胞岛直至单层。
细胞透明，颗粒少，细胞之间界限清楚，可隐约见到细胞核。
Ø维持期：
当细胞形成良好单层后，细胞的生长与分裂都减缓，并逐渐停止生长，这种现象被称为细胞生长的接触抑制。
此时细胞界限逐渐模糊，细胞内颗粒逐渐增多，且透明度降低，立体感较差。
由于代谢产物的不断积累，维持液逐渐变酸。
此时营养液已变为橙黄色或黄色。
Ø衰退期：
由于溶液中营养的减少和日龄的增长，以及代谢产物的累积等因素，此时细胞间可出现空隙，细胞内颗粒进一步增多，立体感变差，细胞皱缩，细胞开始衰老直至死亡。
（二）死细胞或不健康的细胞质膜已经失活或活性变差，质膜通透性变强，染液由此进入细胞内，使得细胞被染成蓝色。
而活细胞质膜具有很强的选择透性，染液不易渗入细胞内，故不被染色呈透明状。
（三）相关器皿的清洗方法及注意事项
器皿种类
清洗步骤
新玻璃器皿
（1）先用自来水刷洗，再浸泡5%稀盐酸中和玻璃表面的碱性物质和有害物质。
（2）从洗液捞出自来水冲洗10～15次去除酸性洗液，蒸馏水刷洗10次，倒置烘干；
（3）包装（牛皮纸或不透水纸）；
（4）高压（15磅20min）或干热（160度2h）灭菌；
（5）备用。
旧玻璃器皿
（1）立即浸入清水，避免干涸难洗；
（2）用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥；
（3）浸酸性洗液过夜；
（4）从洗液捞出自来水冲洗10～15次去除酸性洗液，蒸馏水刷洗10次，倒置烘干；
（5）包装（牛皮纸或不透水纸）；
（6）高压（15磅20min）或干热（160度2h）灭菌；
（7）备用。
注意：
在刷洗过程中，不留死角。
浸泡时，器皿要充满清洁液，勿留气泡。
胶塞
（1）新胶塞应先用清水清洗之后再用0.2%NaOH煮沸10~20min。
（2）自来水清洗10次
（3）用1%稀盐酸浸泡30min。
（4）自来水清洗10次，蒸馏水刷洗10次。
晾干
（5）旧胶塞不必用酸碱处理可直接用洗涤剂煮沸清洗数次，过蒸馏水，晾干，包装高压灭菌，可使用。
注意：
不可使用干热灭菌法。
塑料制品
（1）用洗涤剂清洗，自来水冲洗数遍
（2）强（次强）酸洗液浸泡2~6h.
（3）自来水冲洗10次以上，蒸馏水刷洗10次
（4）浸泡在70%乙醇0.5~1h,备用。
（5）用前从乙醇中取出，在超级工作台内紫外线照射1h。
注意：
不可使用干热灭菌法。
微量离心管
（1）新的国产Tip和Tube如用于非RNA提取时可用蒸馏水刷洗，晾干，高压灭菌后使用。
（2）用于RNA提取时，用蒸馏水刷洗后再用DEPC水（抑制RNA酶）浸泡过夜晾干，高压灭菌后使用。
（3）使用过的Tip和Tube用后浸泡在0.2mol/LNaOH或0.2mol/LHCl溶液中，清水洗过，自来水清洗10次晾干，进洗液2~24h。
晾干，放入饭盒高压灭菌，备用。
注意：
不能使用干热灭菌法。
加样器吸头
（1）立即浸入清水，避免干涸难洗；
（2）如残留有附着物可用脱脂棉轻轻擦拭，用流水冲洗干净晾干；
（3）浸2%NaOH过夜，再用自来水充分冲洗；
（4）用5%盐酸溶液浸泡30分钟，随后用自来水冲洗干净；
（5）再蒸馏水冲洗5～6次；
（6）高压蒸汽消毒备用。
注意：
不宜用毛刷刷洗，以防划痕出现。
一般而言，加样器吸头为一次性用品。
（四）淋巴细胞计数结果表
第一个
大格
第二个
大格
第三个
大格
第四个
大格
活细胞
A
12
14
13
15
B
11
23
19
16
平均
63
12
19
16
16
死细胞
A
3
2
6
6
B
1
6
0
6
平均
17
4
4
3
6
每毫升原液细胞数=4大格细胞总数/4×10000×稀释倍数
=（63+17）/4×10000×2
=4×105个/ml
细胞存活率（%）=（细胞总数-死细胞数）/细胞总数
=（157–34）/157
=78.34%
讨论
1、血清在细胞培养中有何作用？
答：
血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的，因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养，而血清中含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
对细胞生长有促进作用：
提供基本营养物质，如氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质；提供激素和各种生长因子，如胰岛素、肾上腺皮质激素、类固醇激素、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等；提供结合蛋白，可携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，其中转铁蛋白携带铁，在细胞代谢过程中起重要作用。
此外，对细胞有保护作用：
血清能提供促接触和伸展因子，使细胞贴壁免受机械损伤；血清中还含有起稳定作用和解毒的因子，可以中和有毒物质（重金属、抗菌素）的毒性；血清能够维持培养基的pH值并抑制蛋白酶直接或间接的酶解；血清还能够帮助细胞粘附到培养表面，可能通过提供粘附过程涉及的外源糖蛋白起作用。
2、为什么配制培养基之前要反复处理配制用水并要事先高压处理？
答：
自来水里含有大量大量细菌、真菌。
此外，自来水里还含有一些金属物质，这些都严重影响了细胞的繁殖。
细胞培养用液是维护在体外生存、生长、繁殖，以及进行细胞培养操作过程中所需的基本溶液，是直接与细胞接触的液体，必须做到无毒、无菌。
配制培养基之前反复处理配制用水并事先高压处理主要是为了灭菌并去除有毒物质，保证细胞不被水体污染，使其有良好的生存环境，使细胞的传代培养能够顺利进行。
3、配制培养基时调节pH值的目的是什么？
答：
因为，大多数细胞适宜pH为7.2～7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。
各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。
但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。
因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。
液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右，而在此次人类淋巴细胞传代培养中，我们则将pH调至6.8～7.0左右，由此来达到其酸碱度与活体细胞内外液相相似，使细胞良好繁殖。
4、如何防止传代过程的可能污染？
答：
从以下几个方面入手：
（1）器皿准备的预防。
对于用细胞培养的器皿要求很高，要做到真正洁净；应该无菌的物品，要做到消毒严格、真正无菌；器皿的运输、储存过程中，要严格操作，谨防污染。
（2）开始操作前的预防。
应当按照机器型号的相应规定，定期清洗或更换超净工作台或生物安全柜的空气滤网，请专职人员定期检查超净工作台的空气净化标准；注意培养器皿的消毒情况，是否标示清楚，有条件的实验室可以使用一次性细胞培养用品；检查新配置的培养液，确认无菌方可使用；操作前提前半小时启动超净工作台的紫外灯消毒，照射半小时后方可进行试验操作，操作时应戴口罩以及一次性手套，注意消毒。
（3）操作过程中的预防。
超净台内放置的所有培养器皿的瓶口不能与风向相逆，应注意保护瓶口，避免让器皿直立敞口直接暴露在操作台内；不允许用手触及器皿的无菌部分，如瓶口、瓶塞和微孔过滤器的内侧；吸取培养液和细胞悬液等液体时应专管专用，以防止污染扩大或造成培养物的交叉污染；在开取或封闭瓶口时要经过酒精灯的灼烧，并在火焰附近工作；使用培养液前不应较早开启瓶口，应先将瓶口旋松，以方便单手操作，要现用现开；使用完毕的培养液应立即过火焰封口；操作时不要交谈，避免咳嗽，以防唾沫和呼出气体引发污染；操作完毕后应将工作=台面整理好，并用75%的酒精擦拭工作面，紫外灯照射30min后关闭超净工作台。
（4）其他预防。
及早冻存有价值的培养物；购入的未灭活血清应采取56℃水浴灭活30min，以灭活血清中的有毒物质；定期清洁培养箱并消毒；配制培养基之前反复处理配制用水并要事先高压处理。
3.实验总结
在本次人类淋巴细胞植株培养实验中，我们小组的实验取得了良好的结果。
实验过程中，我们组员认真学习了相关知识，分工合作，同时要求每位成员都熟悉细胞传代培养的步骤及操作。
我们每个人都获益良多，也明白了细胞培养及其传代培养在生物学上的重要意义。
细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。
通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。
因为生物产品都是从细胞得来，所以也可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术，无论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程。
尤其是对于一些珍贵的细胞，对其进行传代培养可以让我们获得丰富的细胞。
我们小组对人类淋巴细胞的成功传代培养，让我们在学习之余，感到额外有成就感。
收获之余，我们小组的实验也有不足之处。
比如，在实验过程中，无菌操作的严格要求，我们小组在某些地方仍有不足之处，幸亏在实验教师的纠正之下，才免于实验失败。
这也体现了我们
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