ConcIUSion：
1．AlloftheRAcasesshowedalargenumberoflymphocytesinfiltrationinthesynoviumandmostofthemwereCD3positivewhichisabout72％．MeanwhilethemajorityofthemisCD4+TlymphocytesandtheminorityisCD8+TlymphocytesintheRAgroup．Aroundthefocalgatheredlymphocytes，thereareplasmacells；
2．TheCD4positiveexpressionrateinRApatientswasobviouslyhigherthanOA
group，CD4mayplayanimportantroleintheRApathogenesis；
3．TheCD8positiveexpressionrateinRApatientswasobviouslyhigherthanOA
group，CD8mayplayanimportantroleintheRApathogenesis；
4．TheCD8positiveexpressionrateinRApatientswasobviouslylowerthanCD4
whichmaydecreasetheprotectionofCD8andledtothehyperfunctionofimmune，
CD8mayplayanprotectionroleintheRApathogenesis；
5．TherateofCD4+／CD8+ofRAgroupishigherthanOAgroup，whichshowsthattheimbalanceofCD4+／CDS+mayplayaroleinRA，therateofCD4+／CD8+mayplayaroleorlthediagnosisofRAandcanbeareferenceinprognosisevaluation．
Keywords：
RheumatoidarthritisCD3CD4CD8CD4+／CD8+
immunohistochemistry
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缩略语
RArheumatoidarthritis类风湿性关节炎
SCWstreptococcalcellwallfragments链球菌细胞壁成分诱导的关节炎
CL～collageninducedarthritis胶原诱导的关节炎
OAosteoarthritis骨性关节炎
DAB3,3’-diaminobenzidine二氨基联苯胺
PBSphosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸IHCimmunohistochemistry免疫组织化学MHCmajorhistocompatibilitycomplex组织相容性复合体HLAhumanleucocyteantigen人类白细胞抗原
乃ThelpercellsT辅助细胞
TsTsuppressorcellsT抑制细胞
TCRTcellreceptorT细胞受体
ITAMImmunoreceptortyrosine—basedactivation免疫受体酪氨酸活化基序
motif
cDNAcomplementaryDNA互补DNA
CTLcytotoxicTlymphocyte杀伤性T淋巴细胞
TNF．Qtumornecrosisfactor—Q肿瘤坏死因子Q
IFN．Yinterferon．Y干扰素Y
SCIDseverecombinedimmunodeficient严重联合免疫缺陷
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研究现状、成果
类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是由于自身免疫调节异常所导致的关节慢性炎症性疾病。
它的基本病理改变为关节滑膜慢性炎症形成侵袭性血管翳，破坏软骨、骨与周围组织。
淋巴细胞浸润和渗出是其主要的病理特征，而T淋巴细胞、B淋巴细胞、浆细胞及巨噬细胞是其主要的炎性淋巴细胞，其中淋巴细胞的浸润和渗出是以T淋巴细胞为主【l】。
CD3是比较特异的T细胞抗体，表达于所有T细胞表面，参与T细胞的信号转导。
主要用于标记胸腺细胞、T淋巴细胞及T细胞淋巴瘤。
在类风湿性关节炎中，聚集的淋巴细胞大多数表达CD3。
近年来，CD4+T细胞在自身免疫性疾病中所造成的组织破坏和器官损伤，以及其对于入侵的有害物质所产生保护性的免疫机制已经基本阐明。
激活的CD4+T细胞在控制和推动初始的特异性免疫应答的过程中发挥极其重要的作用。
一旦被激活，CD4+T细胞即分化成特殊的效应细胞，并成为特异性免疫应答中主要的调节因子。
大量的研究显示【2】，CD4+T细胞在RA中发挥重要的作用，这与CD4+T细胞在疾病的免疫发病机制中发挥主导作用的假设相一致。
研究发现在类风湿性关节炎患者的末梢血及其滑液中可以检测到激活的CD4+T细胞
【3】。
CD4+T细胞在实验性关节炎症的动物模型中发挥重要作用，可以导致自身免疫性的关节损伤【41。
此外，基于T细胞的靶向治疗已经在临床证实有显著的疗效【51。
虽然CD8+T细胞是免疫系统主要的效应细胞，但其在自身免疫性疾病中所发挥的作用还很少被关注。
CD8+T细胞已被证实在几种自身免疫性疾病动物实验模型，如糖尿病、多发性硬化症及重症肌无力【6{】中具有至关重要的作用。
然而CD8+T细胞在RA动物模型中的作用存在争议。
在SCW的大鼠模型中，CD8+T细胞缺乏的大鼠产生了早期诱导RA的发病作用及其病程的延长【9】。
另一方面，在使用CIA的模型研究中发现，在CD8+T细胞缺乏的老鼠并没有表现出对于RA产生的诱导或加重疾病的作用【10】，提示CD8+T细胞在RA的病理机制中不是很重要。
然而，消除CD8+T细胞的小鼠只有在他们初始免疫的两周之后对疾病产生影响，而不是在免疫的同时产生影响¨¨。
这表明CD8+T细胞可能在疾病的效
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应阶段发挥重要的作用，而不是在RA发病的初始阶段发挥作用。
CD8+T细胞在RA中的发病作用还有待进一步研究。
CD4+细胞具有辅助、诱导细胞免疫及体液免疫的作用；CD8+细胞具有细胞毒效应，也发挥抑制细胞及体液免疫的作用。
CD4／CD8比例的失衡可导致多种自身免疫性疾病。
有研究表明T细胞【121，尤其是CD4+T细胞在RA的发病机制中有重要作用，T细胞对未知抗原产生应答而活化，引发炎症介质的连锁释放，激活了炎症因子网络，从而造成RA关节的炎症反应【13】。
CD4+／CD8+L匕例失衡与RA的发病密切相关。
研究目的、方法
本文采用免疫组织化学方法，检测滑膜组织中CD3、CD4、CD8阳性淋巴细胞的表达及分布状况，探讨其在RA发病中的作用。
收集天津市天津医院2009年1月至2011年10月经病理学确诊的RA病例手术切除滑膜组织蜡块标本40例，由两名资深骨关节病理专家重新复查原始切片诊断。
其中女性31例，男性9例；年龄范围22～74岁，平均年龄55．35岁；病变部位：
膝关节33例，肘关节2例，腕关节2例，髋关节2例，踝关节1例。
另外选取10例骨性关节炎（OA）滑膜组织，年龄43--一68岁，作为对照组。
切片脱蜡，水化，热修复，采用免疫组化EnVision法染色，DAB显色。
用淋巴结做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照。
CD3的阳性产物呈棕色细颗粒状，主要定位于淋巴细胞的细胞膜，少许细胞浆中亦可见表达。
CD4、CD8的阳性产物呈棕色细颗粒状，主要定位于淋巴细胞的细胞膜。
每例随机选取10个高倍视野，计数每个视野网格测微尺内阳性细胞个数，10个视野阳性细胞总数／10得出每例阳性细胞均数，每例CD4阳性细胞均数／每例CD8阳性细胞均数得出每例CD4+／CD8+比值。
采用SPSSl6．0统计软件包进行分析。
计量资料用（夏）±S表示，数据比较用配对或独立样本t检验，CD4、CD8的相关性分析采用Pearson相关，显著性检验水准仅值规定为0．05。
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1对象和方法
1．1标本的来源
1．1．1实验组
收集天津市天津医院病理科2009年1月至2011年10月间手术切除并经病理学确诊的类风湿性关节炎石蜡包埋标本，由两名资深骨关节病理专家重新复查切片，参考G'b科诊断病理学》【141筛选出实验组标本40例。
其中女性31例，男性9例；年龄范围22～74岁，平均年龄55．35岁；病变部位：
膝关节33例，肘关节2例，腕关节2例，髋关节2例，踝关节1例。
1．1．2对照组
选取同期骨性关节炎（OA）滑膜组织10例，其中女性8例，男性2例，年龄43～68岁，平均年龄58．50岁，作为对照组。
1．2实验仪器及主要化学试剂
1．2．1主要实验仪器
（1）全自动脱水机，型号：
爱华TSJ一1A，产地：
天津；
（2）石蜡组织切片机，型号：
Leica2235，产地：
德国；（3）展片机，型号：
爱华ZPJ．1，产地：
天津；（4）烤片机，型号：
爱华KPJ．1，产地：
天津；（5）光学显微镜，型号：
OLYMPUS，产地：
日本；（6）病理显微图像分析系统，中科院空海公司，产地：
北京；（7）万用电炉，型号：
DK．98．II型，产地：
天津；（8）微量移液器，型号：
Gilson，产地：
法国；（9）冰箱，型号：
Hai*BCD256KT，产地：
青岛。
1．2．2主要化学试剂
（1）一抗：
①多克隆兔抗人CD3（MonoclonalAntibodyRabbitAnti．HumanCD3）购自基因科技（上海）有限公司：
②单克隆小鼠抗人CD4（MonoclonalAntibodyMouseAnti—HumanCD4）购自基因科技（上海）有限公司；
③单克隆小鼠抗人CD8（MonoclonalAntibodyMouseAnti．HumanCD8）购自基因科技（上海）有限公司。
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（2）二步法抗兔／鼠通用型免疫组化检测ChemMate俐EnVision+／HRP／DAB试剂盒购自基因科技（上海）有限公司。
表1免疫组织化学第一抗体（标记物）相关参数
（3）羊血清购自基因科技（上海）有限公司。
（4）抗体稀释液购自基因科技（上海）有限公司。
（5）二步法抗兔／鼠通用型免疫组化检测试剂盒（GK500705／10）购白基因科技
（上海）有限公司（包括试剂A：
ChemMate。
MEnⅥsion+／HPR，兔／d,鼠、试剂B：
DAB缓冲稀释液、试剂C：
DAB原液），避光保存，即用即配。
（6）APES购自北京中杉生物技术有限公司。
（7）丙酮为天津市化学试剂公司产品。
（8）PBS磷酸盐缓冲液（0．01M，PH7．2．7．4）购自北京中杉生物技术有限公司。
（9）高PH值抗原修复液EDTA（100ml，PH9．O）购自基因科技（上海）有限公司。
（10）无水乙醇为天津市化学试剂公司产品。
1．2．3主要溶液的配制：
PBS（产品编号ZLI一9062）
工作液配制：
每袋PBS粉剂加2000ml蒸馏水溶解配成溶液。
高PH值抗原修复液EDTA（产品编号GTl00410）工作液配制：
取l份抗原修复液（20x）和19份双蒸水，充分混匀后制成抗原修复工作液。
DAB显色液：
（产品编号GK500705／10）工作液配制：
实验前，按每毫升B液（DAB稀释液）中加1滴（或20微升）C液（DAB原液）的浓度配制所需要的用量，充分混匀，即用即配。
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APES：
（产品编号ZLI一9001）工作液配制：
1mlAPES混合50ml丙酮，配得2％APES丙酮溶液。
1．3方法
1．3．1切片准备
（1）将常规免疫组化所用载玻片先用清洁液除去油脂污物，在酸洗液中浸泡24小时，捞出后经自来水反复冲洗，蒸馏水冲洗3次，烤箱80℃烤干；
（2）洁净载玻片置入APES丙酮稀释液（1：
50）中20"---'30秒取出稍停，
再入纯丙酮中蘸洗3次，洗去未结合的APES；（3）自然晾干，装盒备用（注意防尘）；（4）盖玻片在酸洗液中浸泡6小时，蒸馏水反复冲洗，无水乙醇冲洗1次，
自然晾干装盒备用（注意防尘）。
1．3．2标本的制备与储存
全部标本均经1
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