药物分析Chapter14维生素类药物的分析.docx

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药物分析Chapter14维生素类药物的分析

药物分析Chapter14维生素类药物的分析

Chapter6芳酸类非甾体抗炎药物的分析类型水杨酸类：

水杨酸、乙酰水杨酸（阿司匹林）邻氨基苯甲酸类：

甲芬那酸芳基丙酸类：

布洛芬吲哚乙酸类：

苯并噻嗪甲酸类：

一，构性分析1酸性：

具有游离的羧基邻位取代苯甲酸结构COOH的酸性间位、对位取代吸电子基团，酸性增强，NO2、OH、X供电子基团，酸性降低，CH3、NH22水解性：

可用于鉴别和含量测定。

酯键、酰胺键3苯环：

UV吸收光谱特性4特征元素：

酮洛芬的二苯甲酮可与苯肼缩合显色。

二，鉴别试验1与三氯化铁反应：

1.1水杨酸反应：

水杨酸+三氯化铁紫堇色配合物（强酸溶液中水解）1.2酚羟基反应：

对乙酰氨基酚水溶液+三氯化铁显蓝紫色1.3烯醇结构：

可呈红色配合物2缩合反应酮洛芬（二苯甲酮）+苯肼橙色偶氮化合物3重氮化偶合反应对乙酰氨基酚具有潜在芳伯胺基。

对乙酰氨基酚+盐酸、亚硝酸钠重氮盐，碱性条件下、萘酚偶合生成红色偶氮化合物4氧化反应：

甲芬那酸+硫酸、重铬酸钾深蓝色棕绿色吲哚美辛+硫酸、重铬酸钾紫色或者+盐酸、亚硝酸钠绿色黄色5水解反应阿司匹林+碳酸钠，加热水解水杨酸钠+醋酸钠加稀硫酸白色水杨酸沉淀+醋酸臭气SSss双水杨酸酯+NaOH水杨酸钠+HCl（稀）白色水杨酸沉淀（在醋酸铵试液中可溶解）三，杂质检查法阿司匹林中游离水杨酸的检查：

1来源：

生产过程中乙酰化反应不完全；贮存过程中发生水解2显色剂（酚羟基易被氧化剂氧化变色）：

稀硫酸铁铵溶液Fe3++水杨酸紫堇色配合物3药典采用1%冰醋酸甲醇溶液，防止阿司匹林的水解四，含量测定1，直接滴定法

（1）药物溶于中性乙醇（对酚酞指示液显中性）

（2）滴定应在不断振摇下稍快进行，以防止局部碱浓度过大，致使阿司匹林酯结构水解（3）本法缺乏专属性，易受水解产物水杨酸以及醋酸的干扰，故不适用于水杨酸含量较高的试样测定2剩余滴定法（1:

2）3水解后剩余滴定法（☆两步滴定法）3.1原理及流程：

（1）中和：

酸性水解产物（水杨酸）+醋酸+稳定剂（酒石酸、枸橼酸）+中和阿司匹林的游离羧基

（2）水解与滴定：

水解后，剩余量滴定法4非水溶液滴定法吡罗昔康具有吡啶环，显示碱性，在冰醋酸溶液中，用高氯酸滴定液滴定至显蓝绿色。

5紫外分光光度法：

标示量%=（As*CR*D*W平均/AR*W*B）*100%Chapter7苯乙胺类拟肾上腺素药物分析一，构性分析1酚羟基特性：

与重金属离子（Fe3+）配位呈色，遇光热易被氧化2弱碱性：

氮原子为仲胺氮，显弱碱性。

3紫外吸收特性：

显弱碱性4旋光性：

手性碳原子，具有光学活性二，鉴别试验1与铁盐的反应：

Fe3++酚羟基配位显绿色加入碱显紫色2与甲醛硫酸反应：

3还原性反应：

酚羟基易被碘，H2O2、铁氰化钾、氧化呈色4氨基醇的双缩脲反应：

供试品+CuSO4+NaOH显蓝紫色加乙醚后，醚层显紫红色，水层为蓝色5脂肪伯胺的Rimini试验：

供试品+亚硝酸铁氰化钠+丙酮（不含甲醛）+碳酸氢钠显色三，含量测定1非水滴定法☆常用非水溶剂：

（1）酸性溶剂：

冰醋酸（增强有机弱碱的相对碱度）

（2）碱性溶剂：

二甲基甲酰胺（增强有机弱酸的相对酸度）（3）两性溶剂：

甲醇（4）惰性溶剂：

甲苯、三氯甲烷、丙酮苯乙胺类拟肾上腺素药物多采用高氯酸非水滴定1.1原理：

（1）盐酸多巴胺盐类+高氯酸（置换过程）强酸置换出与有机弱碱结合的较弱的酸，HA酸性越弱，越利于反应进行。

1.2指示剂：

结晶紫，酸式色：

黄色；碱式色：

紫色1.3注意事项：

（1）非水溶液滴定时，有机弱碱盐类药物被置换出的酸在醋酸介质中的酸性，排列顺序如下：

高氯酸（最强酸）氢溴酸硫酸盐酸硝酸磷酸有机酸

（2）有机弱碱盐中被置换的HA，其酸性较强时，则反应不能进行到底。

处理方法：

加入定量的醋酸汞、冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞，以消除氢卤酸（ＨＸ）对滴定的干扰与不良影响。

掩蔽剂：

醋酸汞（稍过量不影响测定结果）Chapter8对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类一，构性分析对氨基苯甲酸酯类：

1芳伯氨基特性（除盐酸丁卡因外）：

显重氮化偶合反应。

与芳醛缩合成schiff碱反应。

易氧化变色。

2酯键易水解：

苯佐卡因、盐酸普鲁卡因水解产物对氨基苯甲酸（PABA）盐酸丁卡因水解产物丁氨基苯甲酸（BABA）3弱碱性：

脂烃胺侧链为叔胺氮原子（苯佐卡因除外），具有碱性，可以成盐。

生物碱沉淀剂反应，非水溶剂滴定（在水溶液中不能直接用酸滴定）4溶解性：

游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。

典型药物：

盐酸普鲁卡因（procainehydrochloride）盐酸丁卡因（tetracainehydrochloride）.酰苯胺类药物1芳伯氨基特性：

芳酰胺基酸性溶液中水解为芳伯胺基化合物，重氮化反应。

但是盐酸布比卡因和盐酸罗哌卡因在酰胺基邻位存在两个甲基，空间位阻而稳定。

2弱碱性：

脂烃胺侧链为叔胺氮原子，具有碱性，可以成盐。

生物碱沉淀剂反应，非水溶剂滴定（在水溶液中不能直接用酸滴定）3与重金属离子络合：

酰胺氮原子在水溶液中与金属离子铜或钴络合成有色配位化合物沉淀。

可溶于氯仿呈色。

例如：

对乙酰氨基酚（paracetamol）二鉴别试验1芳伯氨基：

苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺NaNO2/HCl、碱性-萘酚有色偶氮染料（橙黄到猩红色）潜在芳伯氨基：

对乙酰氨基酚、醋氯苯砜----盐酸或硫酸加热水解---NaNO2/HCl碱性-萘酚有色偶氮染料（红色）区别丁卡因加亚硝酸乳白色沉淀2与金属离子反应2.1与盐酸利多卡因铜和钴离子反应（具有芳酰胺结构的）供试品加硫酸铜、碳酸钠试液蓝紫色配合物溶于氯仿显示黄色【苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因不发生此反应】供试品加氯化钴、酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀2.2与汞离子反应芳酰胺类，如盐酸利多卡因硝酸汞/硝酸，煮沸黄色对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因硝酸汞/硝酸，煮沸红色或者橙黄色2.3盐酸普鲁卡因胺羟肟酸铁盐反应（具有芳酰胺结构的）加浓过氧化氢、三氯化铁/加热至沸羟肟酸铁（紫红色）3水解产物反应3.1盐酸普鲁卡因＋10％氢氧化钠溶液白色（加热变为油状物）继续加热蒸气（二乙氨基乙醇）（能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色）加热至油状物消失放冷、加盐酸白色（能溶于过量的盐酸）3.2苯佐卡因＋氢氧化钠试液/煮沸生得乙醇加入碘试液/加热黄色（碘仿臭气）三特殊杂质检查盐酸普鲁卡因及其注射液需检查对氨基苯甲酸（ＰＡＢＡ）原料药及注射灭菌粉末限量不得超过０.５％，注射液不得超过１.２％检查方法：

TLC法，对氨基苯甲酸对照品对照，对二甲氨基苯甲醛溶液显色。

四含量测定１亚硝酸钠滴定法（苯佐卡因、盐酸普鲁卡因）１.１基本原理：

芳伯氨基或水解后生成的药物在酸性条件下与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停法（外指示剂法、内指示剂法）指示反应终点１.２反应条件：

（１）加入适量KBr加快反应速度。

重氮化反应在HBr酸性条件下速度最快，但是昂贵。

体系中溴化钾与盐酸起到氢溴酸的作用

（2）加入过量盐酸加速反应，到药物与其比例1：

2.5到6（3）反应温度，控制在室温10到30摄氏度进行，15度结果最准。

（4）滴定速度，一次加入大部分亚硝酸进行反应，在缓缓滴定。

滴定管尖端插入液面2/3处２非水溶液滴定法（盐酸丁卡因、盐酸布比卡因，含弱碱性氮原子仲胺叔胺基。

也不适用于酰胺基）供试品溶在冰醋酸与醋酐溶液中用高氯酸滴定终点电位法指示滴定终点。

注意：

加入醋酐的作用，有利于布比卡因碱性的增强。

滴定突跃敏锐；滴定前加入醋酸汞溶液以除去氢卤酸的干扰。

Chapter9二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析一构性分析母核：

苯基-1、4-二氢吡啶典型药物：

硝苯地平，尼群地平，尼索地平1二氢吡啶环还原性：

氧还鉴别以及滴定法含测2硝基氧化性：

被还原重氮化3二氢吡啶环氨基质子解离性：

碱性条件，1、4位氢均可解离发生颜色反应4稳定性：

遇光极不稳定，发生光化学歧化反应。

药物分析应避光操作。

5旋光性，药物大多数为消旋体。

二鉴别试验1化学鉴别法1.1与亚铁盐反应：

供试品加乙醇溶解，新制硫酸亚铁铵，硫酸溶液，氢氧化钾溶液强烈振摇沉淀由灰绿色变为红棕色。

1.2与氢氧化钠试液反应：

供试品溶于丙酮，氢氧化钠显示橙红色1.3沉淀反应：

尼莫地平加氯化汞白色沉淀尼群地平加碘化铋钾橙红色沉淀1.4重氮化偶合反应：

供试品苯环硝基酸性条件下，加锌粉加亚硝酸钠溶液，萘酚显示红色2分光光度法注意避光操作三有关物质的检查大多采用ＨＰＬＣ，在避光条件下进行有关物质检查。

四含量测定铈量法原理：

强酸条件下，以硫酸柿为标准溶液的氧化还原滴定法。

用邻二氮菲作指示剂。

优点：

（１）硫酸柿标准溶液稳定，长时间放置，曝光，加热浓度均不变。

（２）Ｃｅ４＋还原为Ｃｅ３＋是单电子转移，反应简单，副反应少。

（３）大部分有机物不与硫酸柿反应，干扰少。

（４）本法特别适用于糖浆剂、片剂等制剂的测定。

指示剂：

邻二氮菲应现用现配，防止因放置后，Fe2+被氧化为Fe3+失效终点：

Ce4+（微过量）与指示剂中Fe2+反应，将其氧化为Fe3+，使橙红色消失，以指示终点。

Chapter10巴比妥类及苯并二氮杂卓类镇静催眠药的分析一构性分析巴比妥类（母核环状酰脲类）1弱酸性：

母核环状结构中１,３二酰亚胺基团。

弱酸与强碱形成的巴比妥钠盐，加酸酸化后，析出结晶性的游离巴比妥类药物。

２水解反应：

酰亚胺结构，与碱液共沸水解放出氨气，红色石蕊试纸变蓝。

３与金属离子的反应：

丙二酰脲或酰亚胺基团，合适ＰＨ下与金属离子显色或者有色沉淀。

（1）与银盐的反应：

巴比妥钠盐+硝酸银溶液可溶性银盐+硝酸银（过量）难溶性二银盐，白色沉淀

（2）与铜盐的反应：

巴比妥类+Cu2+紫色或紫堇色；硫喷妥钠绿色（3）与钴盐的反应：

巴比妥类在有机碱（异丙胺）甲醇或者乙醇溶液中可与钴盐生成紫堇色配合物（4）与汞盐的反应：

巴比妥类药物与Hg（NO3）2或者HgCl2生成白色沉淀，沉淀可溶于胺试液中。

４与香草醛反应：

丙二酰脲基团可与香草醛在浓硫酸条件下发生缩合反应，生成红棕色产物。

５紫外吸收：

ＰＨ１０,一级电离，２４０ｎｍ处最大吸收，ＰＨ１３，二级电离，红移２５５ｎｍ苯二氮杂卓类药物1弱碱性：

具有生物碱特性2水解性：

弱酸性条件下水解。

除地西泮水解后生成仲胺外，奥沙西泮、劳拉西泮、氯硝西泮均水解后生成伯胺重氮化偶合反应鉴别二鉴别试验巴比妥类药物１丙二酰脲反应：

（1）取供试品加碳酸钠试液，振摇滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解）取供试品加碳酸钠试液，振摇滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解

（2）取供试品加吡啶溶液，溶解后，加铜吡啶试液，即显紫色或生成紫色沉淀。

硫喷妥钠则显绿色。

）取供试品加吡啶溶液，溶解后，加铜吡啶试液，即显紫色或生成紫色沉淀。

硫喷妥钠则显绿色。

２特征基团反应２.１利用硫元素：

硫喷妥钠加氢氧化钠，醋酸铅白色沉淀加热后，沉淀变为黑色２.２不饱和取代基：

司可巴比妥加碘或者高锰酸钾试剂褪色２.３芳环取代基：

（１）苯巴比妥及其钠盐硝酸钾、硫酸。

共热黄色硝基物（２）苯巴比妥硫酸，亚硝酸钠橙黄色至橙红色（３）苯巴比妥硫酸、甲醛玫瑰红色。

☆苯巴比妥类药物鉴别A苯巴比妥B司可巴比妥C异戊巴比妥D含硫巴比妥A紫堇色不褪色黄色B加Cu2+紫堇色溴水不褪色加硝酸钾硫酸不变色C紫堇色褪色D绿色苯二氮杂卓类药物1化学鉴别1.1沉淀反应：

氯氮卓+碘化铋钾橙红色沉淀阿普唑仑+硅钨酸白色沉淀1.2硫酸-荧光反应：

溶于硫酸后，在紫外光下，显示不同颜色的荧光。

2特征基团反应2.1氯化物的鉴别反应：

（1）硝酸银

（2）与二氧化锰生成氯气，使KI淀粉试纸变蓝2.2芳伯胺的反应：

重氮化偶合反应鉴别，供试品，加亚硝酸钠溶液，萘酚显示猩红色三有关物质检查巴比妥类药物１酸度：

副产物苯基丙二酰脲酸性（可使甲基橙指示剂显示红色）较苯巴比妥强，使用甲基橙指示剂不得显红色，控制酸性杂质的量。

２乙醇溶液的澄清度：

苯巴比妥中间体1杂质在乙醇中的溶解度小。

３中性或碱性物质：

不溶于氢氧化钠，但溶于乙醚４有关物质四含量测定巴比妥类药物１溴量法：

（含不饱和双键的巴比妥类药物）1.1原理：

1.2流程：

药品精称定量过量溴水1.3注意事项2银量法:

供试品+硝酸银可溶性银盐（完全反应后），继续加硝酸银（稍过量）难溶性二银盐，溶液变浑浊,此为滴定终点。

3酸碱滴定法3.1注意事项：

（1）在水-乙醇混合溶剂中滴定

（2）胶束水溶液中进行滴定（3）非水溶液滴定法，常用指示剂有麝香草酚蓝苯二氮杂卓类药物1非水溶液滴定法1.1非水碱量法：

苯二氮卓类药物多为弱碱性，在水溶液用标准酸直接滴定没有明显的突跃；而在非水酸性溶剂中，药物的相对碱强度显著增强。

弱碱Pkb8~10时，一般选冰醋酸为溶剂，10~12，选用冰醋酸与醋酐作溶剂，12时，选用醋酐作溶剂，（醋酐有利于碱性药物的相对碱性增强）1.2非水酸量法苯二氮杂卓类药物仅奥沙西泮、劳拉西泮能在碱性介质中去质子化，具有一定的酸性。

可采用氢氧化四丁基铵滴定液非水酸量法进行含量测定。

Chapter11吩噻嗪类抗精神病药物的分析一，构性分析1弱碱性：

硫氮杂蒽母核氮原子碱性极弱；R取代基中氮原子碱性极强2易氧化性：

硫氮杂蒽母核具有还原性，被H2O2，HNO3，H2SO4，FeCl3氧化。

3与金属离子配合呈色：

二价硫与钯离子配合有色化合物（钯离子只与二价硫反应，若药物被氧化，则不与钯离子配位，在含量测定时，只测定药物而不测定被氧化的药物）4紫外吸收特性：

254nm处波长有最强吸收。

5红外波谱吸收特征二，鉴别试验1根据弱碱性：

与生物碱沉淀试剂反应2母核易被氧化：

常用的氧化剂：

H2O2，HNO3，H2SO4，FeCl3试液，氧化显色3与钯离子配位显色4含卤素取代基的反应

（1）焰色反应：

奋乃静绿色

（2）显色反应：

含F的药物，在酸性条件下，茜素锆试液（茜素磺酸钠+硝酸锆配位红色）反应供试品F-+茜素锆（红色）氟化锆（无色F+硝酸锆）释放出茜素磺酸钠（黄色）结果判定：

红色到黄色三，含量测定1酸碱滴定法1.1非水溶液滴定法Chapter13莨菪烷类抗胆碱药物的分析一，构性分析1水解性：

莨菪醇和莨菪酸形成的酯2碱性：

五元环叔胺氮原子，较强碱性，易与酸成盐。

采用废水滴定法进行含量测定（非水酸性染料比色法）二，鉴别试验1托烷类生物碱的Vitaili反应：

供试品酯键水解为莨菪酸加发烟硝酸、乙醇制氢氧化钾溶液、固体氢氧化钾共轭结构阴离子呈深紫色2与硫酸-重铬酸钾反应：

供试品水解为莨菪酸加硫酸重铬酸钾，加热苯甲醛，苦杏仁臭味3与生物碱沉淀试剂反应：

酸性水溶液中与重金属盐等沉淀试剂难溶性盐三，含量测定1酸性染料比色法原理：

在适当PH下，碱性药物B可与H+结合成阳离子（BH+），而一些酸性染料（HIn）如溴甲酚绿、溴酚蓝等可解离成阴离子（In-）;l两种离子定量的结合，即生成有色离子对（BH+In-）。

该离子可定量的被有机溶剂萃取，测其特定波长下的吸光度，即可以进行碱性药物的含量测定。

B+H+BH+HInIn-+H+BH++In-（BH+In-）水相（BH+In-）有机相影响因素：

（1）水相的最佳PH的选择

（2）酸性染料的种类及选择：

常用酸性染料：

溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、甲基橙（3）有机溶剂的选择：

三氯甲烷（常用）、二氯甲烷（4）水分的影响：

水相中有过量的酸性染料，水分的混入又可能使有机相浑浊，从而影响bisexual测定的准确性。

（5）酸性染料中的有色杂质。

2非水溶液滴定硫酸阿托品，与高氯酸1：

1的反应Chapter14维生素类药物的分析14-1维生素A一．构效分析1,维生素A中有共轭多烯键，在无水无醇三氯化锑中显色（carr-Price反应）；不稳定，易被氧化，含量测定需考虑杂质影响，制剂用油封；UV325~328nm有最大吸收，用于鉴定和含量测定。

2,顺反异构体：

全反式结构。

二，鉴别试验1三氯化锑法：

（carr-Price反应）VA在饱和无水无醇三氯化锑的三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变至紫红色。

（三氯化锑遇水被水解为氯化亚锑，仪器要求干燥无水）（碳正离子显示蓝色，醇可使其消失）2紫外光谱法：

VA在无水乙醇-盐酸（100:

1）中溶解，在326nm处得单一吸收峰，供试品加热30秒冷却出现三个尖锐的吸收峰。

（VA在盐酸中加热生成脱水VA）三，含量测定1UV（三点校正法）1.1原理：

杂质的无关吸收在310~340nm处波长范围内几乎成一条直线，且随波长的增大而吸光度下降。

物对光吸收呈现加和性1.2方法选择及计算流程根据所测A值与药典规定值的差异。

波长300316326~329340360测得AA1A2A3A4A5Ai/A3A1/A3A2/A3A3/A3A4/A3A5/A3规定值比值之差○1直接测定法：

比值之差绝对值若小于0.02，直接使用A3值求得E1%；若有一个或几个大于0.02，则用【（A3校正值A3）/A3】*100%得到的值进行判断。

绝对值小于3.0%仍使用A3，若小于负3.0%，大于负15.0%时，则用A校正值，若大于3.0%，小于负15.0%，则采用皂化法测定。

A校正值=3.52*（2*A328A316A340）标示量%=（A*D*1900*W平均/W*100*L*标示量）*100%○2皂化法：

用【（A3校正值A3）/A3】*100%得到的值进行判断。

绝对值小于3.0%仍使用A3，若绝对值大于3.0%，则用A校正值。

A校正值=6.815*A3252.555*A3104.260*A334标示量%=（A*D*1830*W平均/W*100*L*标示量）*100%2HPLC

（1）首先需确定检测器，流动相（一般水甲醇，VaVb则用无水正己烷异丙醇即正相色谱）固定相；

（2）系统性试验：

理论塔板数，衡量柱效。

连续进样5次，标准偏差不得过3.0%。

（3）分离度，Va全反式与其他异构体。

在试验中加入碘溶液，将部分维生素醋酸酯转化为顺势异构体，进行分离度考察。

（4）拖尾因子142维生素B1的分析一，构性分析1硫色素反应2具有紫外吸收特性3与生物碱沉淀试剂反应4氯化物特性二，鉴别试验1硫元素荧光反应：

供试品加氢氧化钠、铁氰化钾、正丁醇生成硫元素，正丁醇层显蓝色荧光。

加酸消失，再加碱荧光重现。

三，含量测定1紫外分光光度法：

药品20片，精密称定研细精密取适量约相当于20mgB1置于100ml容量瓶，定容于盐酸（91000ml）干燥滤纸滤过，精密取续滤液5ml，定溶于100ml容量瓶在246nm处测定A，按吸光系数E=421计算标示量%＝（ＡＤＷ平均／Ｅ＊１００＊Ｗ*标示量）＊１００％14－３维生素Ｃ的分析一，构性分析１酸性：

烯二醇基，Ｃ３位上ＯＨ由于受共轭作用酸性较强。

可与碳酸钠生成一元钠盐２还原性：

烯二醇基具有还原性。

用于鉴别，硝酸银、二氯靛酚；用于含量测定，碘量法、二氯靛酚３水解性：

因双键使内酯环变得较稳定，与碳酸钠可成单钠盐，不断键；强碱中断键，内酯环水解，生成酮酸盐。

４糖类的性质：

水解脱羧失水（１）糠醛＋吡咯５０摄氏度，成蓝色。

（２）糠醛自身聚合，需进行杂质检查５紫外吸收特性：

共轭双键，用于含测和鉴别二，鉴别试验１与硝酸银反应（还原性）：

供试品＋硝酸银去氢抗坏血酸＋Ａｇ（黑色沉淀）２与二氯靛酚反应（还原性）：

供试品＋二氯靛酚（玫瑰红色）无色３糖类的反应：

供试品＋三氯醋酸／盐酸水解脱羧失水糠醛＋吡咯５０摄氏度，呈蓝色三，杂志检查１铁铜离子检查请设计原子吸收法测定金属离子杂质检查实验（流程及判断）１份（含Ｍ＋）吸光度ｂ供试品１份（含Ｍ＋）＋标准液（标准Ｍ＋）吸光度ａａ＝ｂ＋限量，限量＝ａ－ｂｂ＜ａ－ｂ，合格；ｂ＞ａ－ｂ，不合格。

（测铁离子，标准液为硫酸铁铵；铜离子选硫酸铜）２草酸的检查草酸与钙离子容易形成沉淀四，含量测定１碘量法原理：

Ｖｃ在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。

根据消耗的碘滴定液体积得出含量。

Ｖｃ＋碘去氢抗坏血酸＋ＨＩ流程：

已知Ｔ＝８.８０６，常量法（约取０.２ｇ，约消耗２２ｍｌ）稀醋酸，新沸冷水，淀粉指示剂至蓝色出现且３０秒内不褪色。

注意事项：

（１）酸性介质中Ｖｃ不易被迅速氧化，仍然需要立即滴定；（２）新沸冷水，除去氧气（３）Ｖｃ注射剂测定前加入丙酮２ｍｌ以消除注射剂中抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响。

２二氯靛酚滴定法原理：

Ｖｃ在酸性条件下，用二氯靛酚标准液滴定至溶液显示玫瑰红色为终点。

多用于维生素Ｃ制剂含量测定。

３二氯靛酚剩余比色法原理：

定量过量的二氯靛酚随Ｖｃ加入吸光度值不断减小。

１４－４维生素Ｄ的分析一，构性分析１不稳定性：

多烯键，易被氧化２显色反应：

本品的三氯甲烷溶液，加醋酐和硫酸，黄色红色紫色绿色。

（甾醇类化合物共同反应）３紫外吸收特性二，鉴别试验１与醋酐、浓硫酸反应：

Ｄ２、Ｄ３三氯甲烷中溶解加醋酐和硫酸，黄色红色紫色绿色２三氯化锑反应：

供试品二氯乙烷中溶解三氯化锑（无水无醇）橙红色粉红色３Ｄ２、Ｄ３的区别反应：

前者显红色５７０ｎｍ处最大吸收；后者显黄色４９５ｎｍ处最大吸收。

三，杂质检查１麦角甾醇是维生素Ｄ的杂质２有关物质检查：

供试品：

本品约２５ｍｇ供试品１００ｍｌ定容于异辛烷对照品：

供试品稀释一百倍取对照液１００Ｌ注入液相色谱仪，调节测定灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的２０分别取供试品、对照品１００Ｌ，记录色谱峰至维生素Ｄ峰保留时间的２倍若有杂质峰：

（除前维生素Ｄ外）单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的０.５倍（０.５％），各杂质峰面积之和不得大于对照液主峰面积（１.０％）。

四，含量测定ＣｈＰ采用正相高效液相色谱法测定流程：

Vd贮备液的配置色谱条件：

硅胶为填充剂，正己烷-正戊醇为流动相：

检测波长：

254nm系统适应性试验：

贮备液先在90摄氏度水浴加热1小时、紫外灯管下照射5分钟，除Vd、前Vd又得到反式Vd、速甾醇。

连续进样五次，记录峰面积，Vd峰面积标准偏差应不大于2.0%，其他物质保留时间或分离度应该符合规定响应因子测定f=C/A含量测定Ci=f1*Ai1+f