解脲支原体MB蛋白金标检测试剂盒胶体金法作业指导书docx.docx
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解脲支原体MB蛋白金标检测试剂盒胶体金法作业指导书docx
解腺支原体MB蛋白金标检测试剂盒胶体金法作业指导书
1目的
建立解月尿支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）作业指导书，确保生产过程处于受控状态。
适用于解服支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）相关工序的操作者。
3职责
3.1操作人员应严格执行本作业指导书。
3.2生产主管负责监督检查。
3.3质检部质检员负责抽查执行情况。
4工作内容
4.1生产工艺流程图
解豚重
抗
NC
组抗原
原
膜
的表达
检
包
—►
测
—►
被
NC反应膜检涮
★
NC
膜
处
理
NC
膜
检
测
兔抗鼠
抗
IgG抗体
体
制备
>
检测
注：
探关键过程★特殊过程
4.2作业内容
4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠述原法）
氯金酸（HAuCb）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾一加热柠檬酸三钠溶液
-混匀，搅拌煮沸10至15分钟一待胶体金溶液颜色由蓝一紫-＞红，冷却即可。
4.2.2金标抗体（反应膜）制备
以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0-加入解腺支原体单抗，15分钟后加入聚乙二醇一离心，调532nm测OD值5〜10,方阵滴定法选定标记工作浓度一用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。
4.2.3金标抗体反应膜质检
将制备好的金标抗体反应膜按5%。
比例抽检，与标准反映膜兀配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测。
a）符合率：
样品稀释液、阴性质控品无假阳，高、中、低浓度（0」ug/mK
1.0ug/ml>10ug/ml）支原体阳性质控品均呈阳性。
b）敏感度：
最小检出0.1ug/ml支原体阳性质控品。
c）反应强度：
+/+++邙日性反应线/阴性反应线）。
d）反应时间：
30s〜5min。
确认合格后才能转入下一工序。
4.2.4NC反应膜制备
亲和性高分子硝酸纤维素膜一活化处理12小时一用水洗5次，每次20分钟〜室温干燥后一取纯解嫌支原体MB蛋白单抗和兔抗鼠IgG抗体溶于10%CS中,浓度均为2mg/ml,用解啄支原体单抗在NC膜上包被衣原体阳性反应线-*用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被阴性对照线一干燥后，用BS液封闭H20清洗后，室温干燥，备用。
4.2.5NC反应膜质检
4.2.5.1常规图形模式检测：
将制备好的反应膜按5%。
比例抽检，与标准金标抗体反应膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本
底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。
4.2.5.2均一性，灵敏性和符合率筛选：
按3%比例/批，随机取样，每张5〜10人份，作阴性参比品和高、中、底（0.1口g/ml、1.0Pg/mK10ug/ml）三个浓度的阳性参比品检测，灵敏度解腺支原体最小检岀g/ml,无假阳性，均一性299%。
4.2.6反应体系组装
组装材料
材料规格（mm）
组装方式
反应膜（S1）
20
见图1
无纺布（S2）
25,30
吸水纸（S3）
30
金标反应膜（S4）
10
双而胶带（S5）
29,48
塑料垫板S6
78
单面胶带S7
15
4.2.6.1反应体组装程序：
a）在S6塑料基板上贴双而胶带S5（29,48mm）二条；
b）在S5上贴反应膜SI（20mm）,S1上下缘距S6上下缘各29mm；
c）在S6上贴吸水纸S3（30mm）,吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与
S5的上边缘对齐；
d）在S5下端贴无纺布S2-1,其上缘压住S1下缘1mm；
e）在S2-1±平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐；
0在S4上平放无纺布S2・2（30mm）上下缘分别S4、S6对齐；
g）将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成5mm测试条，装入干燥器，待包
装。
4.2.6.2成品包装：
每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂,
附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检.
4.2.7质控甜制备
4.2.7.1解服支原体MB蛋白阳性质控品
取基因工程表达解月尿支原体MB蛋白抗原，以样品稀释液（A液和B液1：
1混合液）分别配成高、中、低（10Ug/ml,lug/ml,0.1ug/ml）三个浓度，0.5ml/支分装，・70°C保存。
4.2.7.2解U尿支原体MB蛋白阴性质控品
含0.1mg/ml牛血清白蛋白样品稀释液（A液和B液1：
1混合液），0.5ml/支分装，・70°C保存。
4.3成品检测
《解尿支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）》产品注册标要求。
4.3.1外观
4.3.1」要求
a）检测条：
表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、内容齐全；
b）检测卡：
外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应芯试条在外壳内应附着牢固；
4.3.1.2检验
在自然光线下，用手感和目力观察方法进行检验。
4.3.2灵敏度
4.3.2.1要求
检测卡可以测定出0.1Mg/ml的解）1尿支原体MB蛋口，凡解腺支原体MB蛋
白等于和高于该浓度时检测线和对照线均显色，而低于该浓度时检测线不显色,
但无论任何浓度对照线均应显色。
4.3.2.2测试
a）试剂
1）X白对照液：
样品稀释液；
2）测定样品液:
10ug/ml,lug/ml,0.1ug/ml,<0.1ug/ml四个浓度的质控品。
b）测定方法
随机从同批待测试剂盒屮抽取足量试样对空白对照液和每个浓度的样品液分别进行测定，毎个浓度测定重复测定10个检测卡。
测定时取约4滴处理好的样品液在测试板右端的圆加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察测试板中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
c）结果
以下结果为合格：
测定空白对照液的试剂盒检测线不显色，只有对照线显色。
测定浓度$0.1Ug/ml解服支原体MB蛋白样品液的试剂盒检测线和对照线均有显色，且在测定阈值以上的检测线色带随解腺支原体MB蛋口的浓度升高而色带加深。
4.3.3符合率
4.3.3.1阴性符合率
4.3.3」」要求
试剂盒测试解嫌支原体MB蛋白阴性质控品10份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应290%。
433.1.2测试
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阳性质控品10份。
测定时取100,阳性质控品加在检测卡加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.3.2阳性符合率
4.3.3.2.1要求
试剂盒测试解服支原体MB蛋白含量高于0.1ug/ml的阳性质控品10份，
假阳性判断结果不多于1份，符合率应290%。
4.3.322测试
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阴性质控品10份。
测定时取100UL阴性质控品加在检测卡加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.4重复性
4.3.4.1阴性重复率
4.3.4.1.1要求
使用试剂盒检测同一份阴性质控品10次，同一份质控品的阴性判定结果应基本一致，假阳性判定结果不多于1份，阴性重复率应290%。
4.3.4.1.2测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定吋取100u1阴性质控品加在检测卡加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.4.2阳性重复率
43421要求
使用试剂盒检测同一份阳性质控品10次，同一份质控品的阳性判定结果应基木一致，假阴性判定结果不多于1份，阳性重复率应390%。
43322测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取100u1阳性质控品加在检测卡加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.5精密性
4.3.5.1要求
每批试剂盒随机抽取10个检测卡样品，用同一份阳性UU质控品进行检测，要求各检测卡的显色应均一。
4.3.5.2测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡进行检测。
测定时取100p1阳性UU质控品加在检测卡加样孔中，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的结果,但不可超过20分钟读结果。
4.3.6稳定性
4.3.6.1要求
a）在37弋条件下加速破坏试验放置12天，检测卡的灵敏度、符合率和精密度应符合要求；
b）在有效期后一个月内的留样检测卡的灵敏度、符合率和精密性应符合要求。
4.3.6.2测定
解服支原体MB蛋白金标检测试剂盒成品在三种不同条件下（37°C12天）
进行稳定性试验。
测定方法同4.3.2,4.3.3,4.3.5c
5相关文件
《解服支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）》产品标准。
6质量记录
6.1《生产检验报告》
6.2《解月尿支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）批生产记录》
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