大学生创新项目开题报告.docx

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大学生创新项目开题报告

大学生创新项目开题报告

上海海洋大学水产与生命学院

2011年上海市大学生创新项目计划实验

开题报告

题目斑马鱼尾垂体血管网形成过程的研究

负责人姓名梅桂华学号0913214

专业生物科学（海洋生物）

指导教师吕为群职称博士生导师

2012年2月22日

2、实验（设计）的研究目标：

本项目以转基因斑马鱼（flk1:

EGFP）为实验对象，通过形态观察、组织切片以及免疫组化等实验方法，研究斑马鱼尾垂体血管网的形成过程，以确定斑马鱼尾垂体血管网的形成时间和形态变化，并将UⅡ作为一个标志基因用来研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。

3、实验（设计）的主要研究内容、研究方法、具体措施和研究的可行性、创新点：

研究内容：

1.通过荧光显微镜观察转基因斑马鱼（flk1:

EGFP）的血管生成情况。

2．采用组织切片技术对尾垂体血管网进行细致地研究，确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化。

3．利用免疫组化技术研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。

方法:

1.收集转基因斑马鱼（Fli1:

EGFP）胚胎，培养在含色素抑制剂PTU的胚胎水中，以防止黑色素细胞形成。

2.每天定时用荧光显微镜观察转基因斑马鱼（Fli1:

EGFP）血管生成情况并照相，记录其形成时间和形态变化。

使用MS-222麻醉剂对斑马鱼进行麻醉10分钟，之后用荧光显微镜绿色荧光对转基因斑马鱼（Fli1:

EGFP）血管生成情况进行连续的观察。

3．采用组织切片技术对尾垂体血管网进行地研究以确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化。

收集斑马鱼样品制成切片，用荧光显微镜进行观察。

并参照Habeck等（2002）的方法，利用定量碱性磷酸酶（endogenousalkalinephosphatase,EAP）染色，对样品进行血管分析（Parngetal.,2002），所用染色液为NBT和BCIP，染色完成后在立体显微镜下观察，采集图像并拍照，记录尾垂体血管网的形成时间和形态变化。

4.通过免疫组化技术研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。

收集斑马鱼样品并制成切片，再用UII的特异性抗体进行标记，最后用显微镜进行观察并拍照，用来研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。

可行性：

实验室已建有斑马鱼养殖系统，实验材料有保证；而且实验室具有斑马鱼孵化槽，可以进行正常的交配，繁殖活动；项目中所运用到的仪器在本实验室和中心实验室中都已具备，如恒温培养箱，荧光显微镜，普通显微镜，包埋机与切片机烘片机；并且形态观察、组织切片以及免疫组化等实验方法都较为成熟，研究技术手段完全可行，可保证该项目的顺利进行。

创新点：

本项目首次利用Fli1:

EGFP转基因斑马鱼可以实时观测尾垂体血管网的生成，再采用组织切片技术对尾垂体血管网进行地研究，可以确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化，最后利用免疫组化技术研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系，可为进一步研究尾垂体以及尾部神经分泌系统奠定基础。

4、主要参考资料及使用的原始资料（或数据）：

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[2]Cioni,C.,N.Francia,etal.（2000）."DevelopmentofthecaudalneurosecretorysystemoftheniletilapiaOreochromisniloticus:

animmunohistochemicalandelectronmicroscopicstudy."JMorphol243

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209-218.

[3]Hazon,N.,andBalment,R.J.（1998）."Endocrinology."InThephysiologyoffishes.EditedbyD.H.Evans.2ndedition.CRCpress,NewYork.pp.441–463.

[4]Ingleton,P.M.,L.A.Bendell,etal.（2002）."Calcium-sensingreceptorsandparathyroidhormone-relatedproteininthecaudalneurosecretorysystemoftheflounder（Platichthysflesus）."JAnat200（5）:

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[5]Lu,W.etal.（2006）."MolecularCharacterizationandExpressionofUrotensinIIanditsReceptorintheFlounder（Platichthysflesus）:

AHormoneSystemSupportingBodyFluidHomeostasisinEuryhalineFish."Endocrinology147（8）:

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[6]Lu,W.,L.Dow,etal.（2004）."Coexpressionofcorticotropin-releasinghormoneandurotensinⅠprecursorgenesinthecaudalneurosecretorysystemoftheeuryhalineflounder（Platichthysflesus）:

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[7]McCrohan,C.R.,W.Lu,etal.（2007）."Fishcaudalneurosecretorysystem:

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[9]Oka,S.,A.Chiba,etal.（1993）."Developmentofthecaudalneurosecretorysystemofthechumsalmon,Oncorhynchusketa,asrevealedbyimmunohistochemistryforurotensinsIandII."

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[11]Parng,C,Seng,W,L,Semino,C,etal.（2002）."Zebrafish:

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[12]Habeck,H,Odenthal,J,Walderich,B,etal.（2002）."AnalysisofazebrafishVEGFreceptormutantrevealsspecificdisruptionofangiogenesis".CurrBiol,12:

1405−1412.

[13]丁丽丽,刘明,张胜华,等.力达霉素通过下调VEGF表达抑制斑马鱼胚胎血管生成药学学报.2010,45（4）:

456−461.

5、实验（设计）的进度安排（按照月份、季度和寒暑假安排实验内容和实验目标）：

起止时间

开展内容

2011.2——2012.5

用荧光显微镜观察尾垂体血管网的形成过程并记录尾垂体的形成时间以及形态变化

2012.4——2012.5

采用组织切片技术对尾垂体血管网形成过程进行研究，确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化

2012.5——2012.6

采用免疫组化技术对UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系进行研究

2012.6——2012.8

撰写研究报告

实验小组成员

序号

姓名

学号

专业