大学生创新项目开题报告.docx

1、大学生创新项目开题报告大学生创新项目开题报告上海海洋大学水产与生命学院2011年上海市大学生创新项目计划实验开 题 报 告题 目 斑马鱼尾垂体血管网形成过程的研究 负责人姓名 梅桂华 学号 0913214 专 业 生物科学(海洋生物) 指导教师 吕为群 职 称 博士生导师 2012年 2月 22 日2、实验（设计）的研究目标：本项目以转基因斑马鱼(flk1:EGFP)为实验对象，通过形态观察、组织切片以及免疫组化等实验方法，研究斑马鱼尾垂体血管网的形成过程，以确定斑马鱼尾垂体血管网的形成时间和形态变化，并将U作为一个标志基因用来研究U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。3、实验（

2、设计）的主要研究内容、研究方法、具体措施和研究的可行性、创新点：研究内容：1.通过荧光显微镜观察转基因斑马鱼(flk1:EGFP)的血管生成情况。2采用组织切片技术对尾垂体血管网进行细致地研究，确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化。3利用免疫组化技术研究U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。方法: 1. 收集转基因斑马鱼（Fli1:EGFP）胚胎，培养在含色素抑制剂PTU的胚胎水中，以防止黑色素细胞形成。2. 每天定时用荧光显微镜观察转基因斑马鱼（Fli1:EGFP）血管生成情况并照相，记录其形成时间和形态变化。使用MS-222麻醉剂对斑马鱼进行麻醉10分钟，之后用荧光显微镜绿色

3、荧光对转基因斑马鱼（Fli1:EGFP）血管生成情况进行连续的观察。3采用组织切片技术对尾垂体血管网进行地研究以确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化。收集斑马鱼样品制成切片，用荧光显微镜进行观察。并参照 Habeck 等(2002)的方法，利用定量碱性磷酸酶(endogenous alkaline phosphatase, EAP)染色，对样品进行血管分析(Parng et al., 2002 )，所用染色液为 NBT 和 BCIP，染色完成后在立体显微镜下观察，采集图像并拍照，记录尾垂体血管网的形成时间和形态变化。 4.通过免疫组化技术研究U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。

4、收集斑马鱼样品并制成切片，再用UII的特异性抗体进行标记，最后用显微镜进行观察并拍照，用来研究U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。可行性： 实验室已建有斑马鱼养殖系统，实验材料有保证；而且实验室具有斑马鱼孵化槽，可以进行正常的交配，繁殖活动；项目中所运用到的仪器在本实验室和中心实验室中都已具备，如恒温培养箱，荧光显微镜，普通显微镜，包埋机与切片机烘片机；并且形态观察、组织切片以及免疫组化等实验方法都较为成熟，研究技术手段完全可行，可保证该项目的顺利进行。创新点：本项目首次利用Fli1:EGFP转基因斑马鱼可以实时观测尾垂体血管网的生成，再采用组织切片技术对尾垂体血管网进行地研究

5、，可以确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化，最后利用免疫组化技术研究U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系，可为进一步研究尾垂体以及尾部神经分泌系统奠定基础。4、主要参考资料及使用的原始资料（或数据）：1 Arnold-Reed, D. E., R. Balment, et al. (1991). The caudal neurosecretory of Platichthys flesus: general morphology and responses to altered salinity. Comp Biochem Physiol 99A: 137-143.2 Cioni

6、, C., N. Francia, et al. (2000). Development of the caudal neurosecretory system of the nile tilapia Oreochromis niloticus: an immunohistochemical and electron microscopic study. J Morphol 243(2): 209-218.3 Hazon, N., and Balment, R.J. (1998). Endocrinology. In The physiology of fishes. Edited by D.

7、H. Evans. 2nd edition. CRC press, New York. pp. 441463.4 Ingleton, P. M., L. A. Bendell, et al. (2002). Calcium-sensing receptors and parathyroid hormone-related protein in the caudal neurosecretory system of the flounder (Platichthys flesus). J Anat 200(5): 487-497.5 Lu, W. et al. (2006). Molecular

8、 Characterization and Expression of Urotensin II and its Receptor in the Flounder (Platichthys flesus): A Hormone System Supporting Body Fluid Homeostasis in Euryhaline Fish. Endocrinology 147(8): 3692-3708.6 Lu, W., L. Dow, et al. (2004). Coexpression of corticotropin-releasing hormone and urotensi

9、n precursor genes in the caudal neurosecretory system of the euryhaline flounder (Platichthys flesus): a possible shared role in peripheral regulation. Endocrinology 145(12): 5786-5797.7 McCrohan, C. R., W. Lu, et al. (2007). Fish caudal neurosecretory system: a model for the study of neuroendocrine

10、 secretion. Gen Comp Endocrinol 153(1-3): 243-250.8 Zhen, H, Y, Xue, Y, C, Zhen YS (1997) . Inhibition of angiogenesis is by antitumor antibiotic C1027 and its effect on tumor metastasisJ. Natl Med J China, 77: 657660.9 Oka, S., A. Chiba, et al. (1993). Development of the caudal neurosecretory syste

11、m of the chum salmon, Oncorhynchus keta, as revealed by immunohistochemistry for urotensins I and II.Cell Tissue Res, 272: 221-216. 10 Oka, S., A. Chiba, et al. (2000). Ontogenetic Development of the Caudal Neurosecretory System in the Chum Salmon, Oncorhynchus keta, with Regard to Its Ultrastructur

12、al Changes and with Relation to Neuropeptide Y-immunoreactive Fibers. Zoolog Sci , 17(1): 103-109.11 Parng, C, Seng, W, L, Semino, C, et al. (2002). Zebrafish: a preclinical model for drug screening. Assay Drug Dev Technol, 1: 4148.12 Habeck, H, Odenthal, J, Walderich, B, et al. (2002). Analysis of

13、a zebrafish VEGF receptor mutant reveals specific disruption of angiogenesis . Curr Biol, 12: 14051412.13 丁丽丽, 刘明, 张胜华, 等. 力达霉素通过下调 VEGF 表达抑制斑马鱼胚胎血管生成药学学报. 2010, 45 (4): 456461.5、实验（设计）的进度安排(按照月份、季度和寒暑假安排实验内容和实验目标)：起止时间开展内容2011.22012.5用荧光显微镜观察尾垂体血管网的形成过程并记录尾垂体的形成时间以及形态变化2012.42012.5采用组织切片技术对尾垂体血管网形成过程进行研究，确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化2012.52012.6采用免疫组化技术对U在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系进行研究2012.62012.8撰写研究报告实 验 小 组 成 员序 号姓 名学号专 业