微生物和洁净作业知识.docx

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微生物和洁净作业知识

微生物和卫生、洁净作业知识培训讲义

◆98版GMP中对卫生的要求：

见GMP规范条款第48条～56条规定。

第六章  卫生（GMP1998年修订版）

  第四十八条  药品生产企业应有防止污染的卫生措施，制定各项卫生管理制度，并由专人负责。

  第四十九条  药品生产车间、工序、岗位均应按生产和空气洁净度等级的要求制定厂房、设备、容器等清洁规程，内容应包括：

清洁方法、程序、间隔时间，使用的清洁剂或消毒剂，清洁工具的清洁方法和存放地点。

  第五十条  生产区不得存放非生产物品和个人杂物。

生产中的废弃物应及时处理。

  第五十一条  更衣室、浴室及厕所的设置不得对洁净室（区）产生不良影响。

  第五十二条  工作服的选材、式样及穿戴方式应与生产操作和空气洁净度等级要求相适应，并不得混用。

  洁净工作服的质地应光滑、不产生静电、不脱落纤维和颗粒性物质。

无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。

  不同空气洁净度等级使用的工作服应分别清洗、整理，必要时消毒或灭菌。

工作服洗涤、灭菌时不应带入附加的颗粒物质。

工作服应制定清洗周期。

  第五十三条  洁净室（区）仅限于该区域生产操作人员和经批准的人员进入。

  第五十四条  进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。

  第五十五条  洁净室（区）应定期消毒。

使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。

消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。

  第五十六条  药品生产人员应有健康档案。

直接接触药品的生产人员每年至少体检一次。

传染病、皮肤病患者和体表有伤口者不得从事直接接触药品的生产．

◆关于污染的一些基本概念

（1）污染：

当某物与不洁净的或腐坏物接触或混合在一起从而使该物变得不纯净或不适用时，它即受到污染。

（2）污染的形式：

1、尘粒污染；2、微生物污染。

（3）尘粒的特点：

1、普遍存在；2、制药企业中大量存在尘粒；3、尘粒大小的区别很大。

（4）药厂中可能存在的一些典型尘粒如下：

泥土、沙、金属微粒、尘埃、物料粉尘、油、烟雾、棉绒和衣服纤维、头发喷嚏和咳嗽排出物、皮屑。

◆微生物污染

一、定义：

微生物（Microorganismsmicrobes）是指一类体积微小，结构简单，大多是单细胞的，必须用光学显微镜观察形态的微小生物的通称。

二、微生物的特征：

1、个体小，作用大。

2、分布广，种类多。

3、繁殖快，代谢强。

4、易变异。

三、微生物的主要种类：

非细胞型：

病毒（病毒、类病毒、脘病毒）；原核细胞型：

细菌、衣原体、立克次体、支原体、螺旋体和放线菌；真核细胞型：

真菌（酵母菌、霉菌）、原生动物、显微藻。

四、微生物与人类

（1）.人类真正开始认识微生物是发明了显微镜之后。

至少放大1000倍才能看到。

（2）.病菌只占全部细菌的一小部分。

在人类已知的1400种细菌中，只有150种对人、植物、饲养动物造成危害。

（3）.自然界不可缺少微生物：

生物链的一环、食品发酵、化学医药工业

五、微生物在自然界分布

土壤：

最适宜生长的环境；水：

90%为革兰氏阴性菌，病原微生物易通过水传播；空气：

主要依附于灰尘。

人及动物的呼吸道排出，特别易造成病毒传播。

六、细菌

细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5μm,0.5-5μm）、结构简单、细胞壁坚韧以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物，分布广泛。

（1）.细菌的形态：

球菌（包括双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌）、杆菌、螺旋菌。

（2）.细菌的基本结构：

细胞壁、胞浆膜、间体、细胞浆、核糖体、核质。

某些细菌具有荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞，为其特殊结构。

芽胞是细菌的休眠体，能够抵抗恶劣环境因素。

因不同细菌芽胞的形态不同，因此可作为鉴别的依据。

（3）.细菌的繁殖：

二分分裂繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。

（4）.细菌的菌落：

以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的细菌子细胞集团。

细菌的菌落特征因种而异。

可作为鉴定细菌种的依据。

七、真菌

（1）真菌比细菌大几倍至几十倍。

结构比细菌复杂。

（2）真菌可分单细胞和多细胞两类。

单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称酵母菌（yeast）。

多细胞真菌大多长出菌丝和孢子，交织成团，称丝状菌（filamentousfungus），又称霉菌（mold）

（3）真菌感染的防治原则：

皮肤癣菌的传播主要靠孢子。

遇潮湿和温暧环境又能发芽繁殖。

当体表角质层破损或糜烂，更易引起感染。

预防主要要注意清洁卫生，保持鞋袜干燥，防止真菌孳生，或以含福马林棉球置鞋内杀菌后再穿。

避免直接或间接与患者接触。

真菌由于表面抗原性弱，无有效的预防疫苗。

局部治疗可用5%硫磺软膏、咪康唑霜、克霉唑软膏或0.5%碘伏。

若疗效不隹或深部感染可口服抗真菌药物：

如二性霉素B、制霉菌素、咪康唑（miconazole）、酮康唑（ketoconazole）、氟康唑（fluconazole）和伊曲康唑（itraconazole）等。

近年来发现灰黄霉素对小鼠有致癌作用，使用时应加注意。

90年代以来主要使用氟康唑和伊曲康唑，对表皮癣菌与深部真菌均有疗效。

八、病毒

病毒（virus）是最微小，结构最简单的微生物。

必须用电子显微镜放大几万至几十万倍后方可观察。

无完整的细胞结构，仅有一种核酸（RNA或DNA）作为其遗传物质。

病毒体大小的测量单位为纳米（nanometer,nm），最小约为30nm，如脊髓灰质炎病毒、鼻病毒等。

在微生物引起的疾病中，由病毒引起的约占75％。

不仅传染性强、流行广泛，而且很少有特效药物。

病毒必须在活细胞中方能进行生命活动。

九、微生物的营养要求

微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。

根据微生物对碳源的要求不同，可将其分为自养菌和异养菌两大营养类型。

凡能利用无机碳合成菌体内有机碳化物的，叫自养菌；不能利用无机碳而需要有机碳才能合成菌体内有机碳化物的，为异养菌。

十、常见的影响微生物生长与死亡的物理、化学因素主要有：

1、温度：

温度是影响有机体生长与存活的最重要的因素之一。

微生物生长的温度范围较广，已知的微生物在零下12-100℃均可生长。

而每一种微生物只能在一定的温度范围内生长。

各种微生物都有其生长繁殖的最低温度、最适温度、最高温度和致死温度。

2、氢离子浓度（pH）：

每种微生物都有其最适pH值和一定的pH范围。

强酸和强碱具有杀菌力。

3、氧化还原电位

4、辐射：

辐射是指通过空气或外层空间以波动方式从一个地方传播或传递到另一个地方的能源。

它们或是离子或是是电磁波。

电磁辐射包括可见光、红外线、紫外线、X射线和Υ射线等。

5、干燥：

水分是微生物的正常生命活动必不可少的。

干燥会导致细胞失水而造成代谢停止以至死亡。

6、渗透压：

细胞若置于高渗溶液中，造成细胞脱水而不能生长甚至死亡。

所以日常生活中常用高浓度的盐或糖保存食物，如腌渍蔬菜、肉类及蜜饯等。

7、超声波：

超声波具有强烈的生物学作用，超声波的作用是使细胞破裂。

8、重金属及其化合物：

大多数重金属及其化合物都是有效的杀菌剂或防腐剂。

其作用最强的是Hg、Ag和Cu。

如：

二氯化汞又名升汞，是杀菌力极强的消毒剂。

0.1-1%浓度的硝酸银常用于皮肤的消毒。

9、有机化合物：

如酚、醇、醛等能使蛋白质变性，是常用的杀菌剂。

10、卤族元素及其化合物：

碘：

是强杀菌剂。

3-7%碘溶于70-83%的乙醇中配制成碘酊，是皮肤及小伤口有效的消毒剂。

碘一般都作外用药。

氯气或氯化物：

这是一类最广泛应用的消毒剂。

11、表面活性剂：

具有降低表面张力效应的物质称为表面活性剂，可影响微生物细胞的生长与分裂。

如肥皂、漂白粉、洗衣粉等。

12、染料：

特别是碱性染料，在低浓度下可抑制细菌生长。

13、化学疗剂：

能直接干扰病原微生物的生长繁殖并可用于治疗感染性疾病的化学药物即为化学疗剂。

十一、微生物污染所引起的药品质量变化

1、药品物理性状的改变。

2、药品化学成分变化：

微生物几乎具有降解所有有机物的能力。

微生物产酸：

可导致液体制剂的PH值降低。

微生物产气：

致使药品化学成分改变，并可引起安瓿、玻璃瓶爆炸。

3、药品疗效的变化：

某些微生物有较强的降解力，因此许多药可被降解而失效或显著地改变疗效。

传播污染的四大媒介——空气、水、表面和人体

一、空气：

微生物常常依附于尘埃微粒的表面而悬浮在空气中。

1、对洁净室（区）的要求：

见GMP规范第13~19条规定。

·药品生产洁净室（区）的空气洁净度划分为四个级别：

洁净度级别    尘粒最大允许数/立方米    微生物最大允许数

    ≥0.5μm   ≥5μm   浮游菌/立方米   沉降菌/皿

100级    3，500    0    5    　1

10，000级    350，000    2，000    100    　3

100，000级    3，500，000  20，000   　500   　 10

300，000级    10，500，000    60，000   ——    15

·洁净室（区）的管理需符合下列要求：

（1）洁净室（区）内人员数量应严格控制。

其工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室（区）的临时外来人员应进行指导和监督。

（2）洁净室（区）与非洁净室（区）之间必须设置缓冲设施，人、物流走向合理。

  （3）100级洁净室（区）内不得设置地漏，操作人员不应裸手操作，当不可避免时，手部应及时消毒。

  （4）10，000级洁净室（区）使用的传输设备不得穿越较低级别区域。

-  （5）100，000级以上区域的洁净工作服应在洁净室（区）内洗涤、干燥、整理，必要时应按要求灭菌。

  （6）洁净室（区）内设备保温层表面应平整、光洁，不得有颗粒性物质脱落。

  （7）洁净室（区）内应使用无脱落物、易清洗、易消毒的卫生工具，卫生工具要存放于对产品不造成污染的指定地点，并应限定使用区域。

  （8）洁净室（区）在静态条件下检测的尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌数必须符合规定，应定期监控动态条件下的洁净状况。

  （9）洁净室（区）的净化空气如可循环使用，应采取有效措施避免污染和交叉污染。

  （10）空气净化系统应按规定清洁、维修、保养并作记录。

2、洁净厂房的空气净化

（1）空气净化的目的：

就是控制住尘埃微粒、微生物和有毒有气体，同时保持空气中含有必要的新鲜空气量。

（2）洁净室的主要功能：

A、阻止灰尘的产生。

B、阻止灰尘的进入。

C、把已有的灰尘一次有效地排出去。

3、洁净室的发尘源：

空气、人体、内环境发尘、设备发尘、尘埃积存。

（1）空气——空气中的尘埃粒子是含有微生物的。

因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。

（2） 人体的发尘——洁净室操作人员是最主要的发尘源。

人体所散发粒子数（≥0．３um）

体态

散发粒子数（万个／min）

站

１０

坐

５０

坐下站起

１００—２５０

走

５００—１０００

爬楼梯

１０００

运动

１５００—３０００

着衣种类    　　　　　　测定日期    细菌数/100cm

上衣   内侧外侧    使用5日后    300200

裤子    内侧外侧    使用5日后    45070

★帽子  内侧外侧    使用5日后    100150

★口罩  内侧外侧    使用1日后    2.2×104100

袜子    内侧外侧    使用1日后    3×1042，800

（3）内环境的发尘——洁净厂房内装饰的发尘量，大部分来自地面（操作人员移动时与地面摩擦引起）。

（4） 设备的发尘——设备运转产尘。

（5）尘埃的积存——净化空气流分布不均匀引起。

4、空气过滤器：

按过滤微粒的大小分为初效、中效、亚高效、高效、超高效。

类别（滤器）过滤对象（尘粒粒径） 滤材 尘粒除去率（%）（对0.3μ粒径） 阻力（毫米汞柱） 特点

初效 　　>10μ 粗、中孔泡沫塑料，<20 　　　　　　　　　<3 　用过　滤材可水

WY-CP-200涤纶无纺布 　　　　　　　　　　　　　　　洗再生重复使用

中效 　1-10μ 中、细孔泡沫塑料，  　 20—50 　　　　　　　<10   保护高效滤器

WZ-CP-2涤纶无纺布

亚高效  <5μ   短纤维滤纸玻璃纤维  90—99.9   　　　 <15    

高效 　　<1μ  超细玻璃纤维优质合 　　>99.91    　　　　<25    效力高、阻力大，成纤维,纤维直径1-5μ一般能用3-4年，对1μ细菌透过率0.0001%，对病毒透过率0.0036%。

5、空气净化系统（HVAC）评价七大指标：

1、温湿度；2、静压差；3、风量[送风量（换气次数）新风量]；4、尘埃粒子数；5、微生物；6、噪声；7、照度。

二、水——微生物在绝对的“纯水”中是不能生长的

1、在生产过程中所用的水：

原水（地下水、地面水、城市管网水）→适当处理后→生产用水

2、工艺用水按洁净程度分为饮用水、纯化水、注射用水。

三、表面

1、一个表面看起来很干净，而实际上已被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。

2、清洗表面的基本知识

（1）应使清洁剂与污染物紧密接触；

（2）从被清洗的表面上移去污染物；

（3）将污染物扩散到溶剂中；

（4）防止已扩散的污染物重新沉积回到清洁的表面上。

四、人——生产区最大的污染源

污染途径：

⑴人的头发和皮肤。

⑵水滴——如呼吸、咳嗽和喷嚏。

⑶衣着。

⑷化妆品和手饰。

⑸人为差错引起。

◆制药企业的卫生管理

一、范围：

环境卫生、原辅料的卫生、包装材料的卫生、设备的卫生、工艺卫生、人员卫生。

二、卫生工作在中国制药企业实施GMP中的特殊重要性

（一）药品的特殊性决定了其质量的严格性。

（二）药品污染所引起的药品质量变化。

（三）我国药品生产企业硬件的差距更使卫生工作显得重要。

（四）我国人民的生活、卫生习惯与卫生工作要求差距较大。

三、制药企业清洁卫生的内涵——清洗、灭菌与消毒

1、定义

清洗：

是从表面除去泥士和其它微粒，从而阻止污染物积聚和生长过程。

消毒：

杀死病原微生物。

灭菌：

杀死或除去所有微生物及其芽孢。

防腐：

抑制微生物生长繁殖。

无菌：

指没有活的微生物存在。

采取防止或杜绝一切微生物进入动物机体或物体的方法，称为无菌法。

以无菌法操作时称为无菌操作。

在进行外科手术或微生物学实验时，要求严格的无菌操作，防止微生物的污染。

2、制药企业清洁与日常生活中的清洁的区别

（1）制药企业清洁的含义：

①用工具、水或清洗剂清除物体表面附着物；②对与药品接触的物体、环境、水进行物理或化学灭菌、消毒；③将不同批次、种类的物料严格分开，避免混淆；④有书面的、并经证明行之有效的作业规程；⑤有明确的效果评价指标，检查方法除外观检查还包括化学分析检验；⑥规定了清洁有效期限和清洁频次；⑦清洁物和不清洁物分区存放，并要求有状态标识；⑧有明确的清洁实施人和监督人员；⑨对清洁工具提出了材质、使用、清洁、存放要求。

（2）日常生活清洁的含义：

①用工具、水或清洗剂清除物体表面附着物；②清洁方法及频次根据个人而习惯而定；③清洁效果评价指标模糊，只检查外观情况；④清洁物和不清洁物存放随意。

3、消毒与灭菌方法

（1）、物理灭菌：

用加热、辐射等物理手段达到灭菌目的的方法。

①干热灭菌：

A、火焰灭菌法：

小器具通过火焰几秒即可，较大物品用酒精点燃。

B、干热空气灭菌法：

180℃（1小时）、160℃（2小时）、140℃（3小时）C、高速热风灭菌法：

190℃、风速30～80m/s

②湿热灭菌：

热压灭菌法、流通蒸汽灭菌法、煮沸灭菌法、低温间歇灭菌法。

③滤过除菌法：

滤材孔径0.2μm以下。

④紫外线灭菌法：

波长254nm杀菌力最强。

由于穿透力差，只适用于表面和空气的灭菌。

⑤微波灭菌法；微波能穿透物体内部，由表及里均匀加热。

作用迅速。

⑥辐射灭菌法：

常用60Co辐射源放射γ射线杀菌。

杀菌过程中被灭菌物品只有几度的温度变化，穿透力强，可用于包装好的物品灭菌。

（2）化学灭菌法：

①消毒剂灭菌法：

0.1%-0.2%新洁尔灭、75%乙醇。

②化学气体灭菌法：

甲醛、戊二醛蒸汽、环氧乙烷。

（3）防腐剂（抑菌剂）

0.1%-0.25%苯甲酸（钠）、0.01%-0.25%尼泊金类、0.15%-0.25%山梨酸（钾）、20%以上乙醇、30%以上甘油。

四、卫生管理

1、一个完善的药厂卫生规程，必须坚持的八项基本做法：

（1）养成良好的卫生习惯。

（2）严格遵守所有的清洗计划和书面卫生规程。

（3）迅速而正确地记录我们的工作。

（4）及时报告可能引起产品污染的厂房和设备的一切情况。

（5）应有防虫、防鼠措施，防止工厂受到外界干扰。

（6）常规（定期地）检查空气和水系统，以确保滤器洁净、阴沟畅通、各系统运转有效正常。

（7）正确贮藏和除去垃圾和废料。

（8）彻底清洗所有生产设备。

2、个人卫生

（1）“四勤”：

勤剪指甲、勤理发剃须、勤换衣、勤洗澡。

（2）正确穿戴工装。

（3）从事生产操作时不得化妆，佩戴饰物。

（4）不携带与工作无关物品（包括食物）进入生产区域。

3、环境卫生：

垃圾管理、草坪管理、三废处理、防鼠、防虫

4、生产工艺卫生：

包括物料卫生、设备容器卫生、工艺操作卫生、工艺用水卫生

5、人员、物料进出生产区程序

（1）人员进出一般生产区

（2）人员进出洁净区

注意事项：

1气闸间两侧门不能同时打开，洁净区和一般区人员不能见面。

2、警戒线。

3、人净不能带入任何物品

4、气闸一次性5人

注：

虚线框内的设施可根据需要设置。

（3）物料进出一般生产区：

从生产区物料通道进出。

（4）物料进出洁净区

（5）容器具、工具

物净消毒气闸进入

注意：

1进入洁净所有的容器具、工具需如此执行。

2不能消毒的仪器、仪表应用布擦拭。

3工具包括维修工具。

6、洁净作业中需注意的事项

1不得裸手接触药品。

2和药品直接接触的容器具应放在不锈钢容器内。

3动作应稳、准、轻。

4容器具、工具、洁净服应严格执行现行清洁SOP。

5洁净区清洁用具不得混用（毛巾）。

6维修过程中应将设备上的药品清理，设备正常后做适当清理方可继续生产。

清洗规程的编制程序

·确定从表面将要清洗的污染物性质和类型

  A、该污染物在水中是否溶解？

  B、该污染物是有机物还是无机物？

·用水进行预冲洗[饮用水、热水（温度：

50—60℃）]

  A、除去可溶性物质

  B、冲掉不溶性物质

  C、减轻清洁剂的负荷量和节约人力

·用优质清洁剂清洗表面

  （有许多种清洁剂可供选用，您选择清洁剂后应查找应用该清洁剂的一些条件）

  A、所需的浓度

  B、最佳使用温度

  C、为使清洁剂起化学作用所需搅拌次数或应施加的力（使劲搅拌）的程度

  D、所需的时间

  E、所需要的经济花费

·用标准饮用水冲洗表面

  阻止清洁剂起作用后结膜或干燥

·用纯化水冲洗表面（冲洗时间、流量）

·让表面空气干燥（烘干或阴干）

·迅速将您清洗工作记录在案，并正确地保存清洁设备

·清洁工具的清洁方法和存放地点

★一个完美的药厂卫生规程，必须坚持的八项基本做法：

1、    养成良好的卫生习惯。

2、    严格遵守所有的清洗计划和书面卫生规程。

3、    迅速而正确地记录我们的工作。

4、    及时报告可能引起产品污染的厂房和设备的一切情况。

5、    应有防虫、防鼠措施，防止工厂受到外界干扰。

6、    常规（定期地）检查空气和水系统，以确保：

·滤器洁净

·阴沟畅通

·各系统运转有效正常

7、    正确贮藏和除去垃圾和废料。

8、    彻底清洗所有生产设备。

药品生产企业卫生工作中应注意哪些问题

1、    环境卫生

2、    原辅料的卫生

3、    包装材料的卫生

4、    设备的卫生

5、    工艺卫生

6、    人员卫生

药品生产企业卫生工作应注意的事项

1、人员的健康——健康档案。

2、 培养药品生产人员良好的个人卫生习惯。

3、 卫生工作的监督和检查

A、生产卫生的监督（例：

温、湿度，洁净度的监测；指检；工艺用水监测等）。

B、生产卫生检测结果的评价与处理。

·卫生工作在制药企业实施GMP中的特殊重要性

（一） 药品的特殊性决定了其质量的严格性。

（二）药品污染所引起的药品质量变化。

（三） 我国药品生产企业硬件的差距更使卫生工作显得重要。

（四） 我国人民的生活、卫生习惯与卫生工作要求差距较大。

   卫生工作的监督和检查

（一）    生产卫生的监督

（二）    生产卫生监督方法

（三）    生产卫生检测结果的评价与处理

（一）生产卫生的监督

·进气的过滤

．空气分布和空气交换频率

．比邻近低洁净等级高出的正压

生产卫生的监督

·建筑物的布局以及物流的设计

·物料和人员的缓冲室

·地板、墙壁、天花板和设备材料的选择

·人员防护设备和工作服

·．人员的卫生规程

·厂房和设备的清洁和消毒规程

．安全设施

质量部应制定书面卫生监督规程（具体规定所采用方法、仪器、培养基、取样方法、频率、地点、记录及保存等），并通过试验确定的内容报警限和内部工作限。

（二）生产卫生的监督方法

1、尘埃粒子计数

粒子计数器、风速仪、噪音测定仪、照度测定仪

2、 微生物

·浮游菌的检测

·沉降菌的检测

3、 个人卫生

·手指试验（监督对象:

对所有直接与产品接触的人员,要做琼脂板指尖随机试验法试验）

·工作服的清洗后抽查

4高效过滤器和层流台裂隙试验

5、培养基灌封

6、 生产用水的卫生监督

（三）生产卫生检测结果的评价与处理

洁净区人员入口处设置整个区域的平面图，并用绿色、黄色、红色磁性小块作为环境检测结果合格，超过报警限和不合格的指示块。