药学专业毕业论文全套二.docx
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药学专业毕业论文全套二
本科毕业论文（设计）手册
（2010届）
题目：
黄芪扶正口服液提取工艺的优化
学院：
专业：
学号：
姓名：
指导老师：
职称：
合作老师：
职称：
成绩：
温州医学院教务处制
学位论文原创性声明
兹呈交的学位论文，是本人在指导老师指导下独立完成的研究成果。
本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。
本人依法享有和承担由此论文而产生的权利和责任。
声明人（签名）：
年月日
手册目录
（一）本科毕业论文（设计）正文…………………………………………04
（二）本科毕业论文（设计）任务书………………………………………16
（三）本科毕业论文（设计）开题报告……………………………………19
（四）本科毕业论文（设计）文献综述……………………………………24
（五）本科毕业论文（设计）外文翻译……………………………………31
（六）本科毕业论文（设计）指导记录……………………………………53
（七）本科毕业论文（设计）中期检查表…………………………………56
（八）本科毕业论文（设计）答辩资格审查表……………………………57
（九）本科毕业论文（设计）答辩记录……………………………………58
（十）本科毕业论文（设计）成绩评定书…………………………………60
（十一）本科毕业论文（设计）作品（实物）验收表………………………61
本科生毕业论文（设计）
黄芪扶正口服液提取工艺的优化
姓名：
指导老师：
合作老师：
专业：
药学
提交日期：
黄芪扶正口服液提取工艺的优化
摘要：
目的：
正交试验设计优选黄芪扶正口服液的提取工艺。
方法：
实验方法用紫外分光光度法、高效液相色谱法及薄层色谱法。
采用正交试验设计法，以总黄酮含量、总固体质量、淫羊藿苷高效液相峰面积大小为指标，考察乙醇浓度、浓缩体积及静置时间对黄芪扶正口服液提取工艺的影响。
结果：
总黄酮含量的测定优于淫羊藿苷的测定。
用薄层色谱进行了验证，证明了黄酮类化合物的存在。
最佳提取工艺：
水煎煮后的滤液减压浓缩至约80ml，放冷，加入适量乙醇搅匀使含醇浓度达65%，静置24h后回收乙醇。
结论：
黄芪扶正口服液的提取工艺方法简单、准确、重复性好，质量可控。
关键词：
黄芪扶正；正交试验；TLC；UV；HPLC;总黄酮；总固体重量
OptimizetheextractionprocessofAstragalusFuzhengoralliquid
Abstract:
TheobjectiveofthisthesisistooptimizetheextractionprocessofastragalusFuzhengoralliquidbyorthogonalexperimentaldesign.TheapplicationofUV,HPLCandTLCwillbeintheexperimentofthethesis.Withtheindexofthequalityofthetotalflavonoidsandthewholesolid,andtheareasizeofliquidicariininhighperformance,itistoobservetherelationbetweenthewholeprocessfortheextractionandthedataincludingthelevelofethanol,thevolumeofconcentrationandtimeforstandingthroughtheorthoqonalexperimentaldesign.Fromtheresultsoftheexperiment,itisprovedthatthewayofthetotalflavonoidsissuperiortothemethodofHPLC’s.Andthebestwaytocollectoralliquidcanbeconcluded:
thefirststepistoreducepressureandconcentratethefilterliquortobeabout80mlafterdecoction;secondly,itisnecessarytoputtheliquidasidetobecool;thenextstepisincreasingthealcoholconcentrationpercentto65%byaddingthedefinedamountofethylalcohol;finally,itisrecollectingthealcoholafter24-hourstanding.Therefore,theconclusionforthisthesiscanbethatthemethodforextractionprocessofastragalusFuzhengoralliquidissimple,accurateandoperation-friendly.
Keywords:
Astragalusfuzheng;TLC;UV;HPLC;Orthogonalexperimentaldesign;thetotalflavonoids;thewholesolid
引言
本课题为浙江省医学会临床科研基金项目黄芪扶正口服液制备及临床疗效观察（编号：
2007ZYC58）的子课题，旨在优选黄芪扶正口服液[1]的提取工艺。
黄芪扶正口服液由黄芪、淫羊藿、枸杞、黄精、白花蛇舌草、桑椹子、女贞子、生地、杜仲、赤芍、党参、白术、补骨脂、黄芩、甘草[2]等15味药材组成。
黄芪具有保肝、扩张冠状血管及全身末梢血管、强心、扩张血管、增强机体免疫力、抗衰老、利尿、降压、抗菌等作用，生用偏于走表，能固表止汗、托里排脓、利水、消肿；炙用偏于走里，能补中益气、补气生血[3]。
淫羊藿具有雄性激素样作用、抗骨质疏松、抗衰老、降压和增加冠脉血流量等作用。
本品用炙黄芪，配伍枸杞等补益药，以益气补虚，配伍白花蛇舌草等祛邪药物，以扶正祛邪固本。
本课题试验采用传统的水提醇沉法，取影响水提醇沉的主要因素，即乙醇浓度、浓缩体积及静置时间3个因素，各取2个水平进行L4（23）正交试验。
以黄芪扶正口服液的君药黄芪中的主要药效成分总黄酮量[4.5]和总固体重量为指标，综合考察黄芪扶正口服液的最佳提取工艺[6.7]。
1.实验材料
1.1药材与试液
黄芪、枸杞、淫羊藿、黄精、白花蛇舌草、桑椹子、女贞子、生地、杜仲、赤芍、党参、白术、补骨脂、黄芩、甘草（《中国药典》2005年版一部），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余化学试液均为分析纯。
1.2仪器
高效液相色谱仪（Agilent1100）、真空浓缩罐、紫外分光光度计（UV-1601，日本岛津）、数显恒温水浴锅（上海梅香仪器有限公司）、PHSJ-4A实验室pH计（上海精密科学仪器有限公司）、电子万用炉（220V，1kW，上海宝磊仪器有限公司）、电热恒温干燥箱、USC-302超声波清洗器、电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
2.处方与制备
2.1处方
黄芪10g、枸杞10g、淫羊藿6g、黄精6g、白花蛇舌草6g、桑椹子6g、女贞子6g、生地6g、杜仲5g、赤芍4g、党参4g、白术4g、补骨脂4g、黄芩2g、甘草2g，制成100ml。
2.2制备
2.2.1供试品溶液的制备
按上述配方比例称取15味药材，按照正交设计表的工艺条件进行水煎煮及乙醇沉淀，提取液过滤，回收乙醇，浓缩，得100ml药液，置于4℃冰箱保存，备用。
2.2.2空白溶液的制备
按上述配方比例称取除淫羊藿外14味药材，通过12倍量水煎煮3次，每次20分钟，合并煎液，滤过，回收乙醇，提取液过滤浓缩，得100ml药液，置于4℃冰箱保存，备用。
3.方法与结果
3.1正交试验设计[8]
本试验采取水提醇沉法[9.10]，综合考虑影响本品提取效果的多种因素，采用乙醇浓度（A）、浓缩体积（B）和静置时间（C）等因素（表3-1）进行考察，按L4（23）正交设计进行试验以总黄酮含量作为考察指标，对提取工艺进行优化筛选。
表3-1正交试验设计因素水平表L4（23）
水平
因素
A乙醇浓度（V/V）
B浓缩体积（ml）
C静置时间（h）
1
60%
60
24
2
65%
80
48
3.2总黄酮含量的测定[11]
3.2.1方法原理[12]
利用黄酮类化合物中的3-羟基、4-羟基、5-羟基、4-羰基或邻二位酚羟基，可与Al3+在碱性溶液中生成红色络合物，在一定浓度范围内，其浓度与吸光度符合比耳定律，进行比色定量。
3.2.2总黄酮的含量测定
3.2.2.1对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品49.1mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇40ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含芦丁982g）。
3.2.2.2标准曲线的制备[13.14]
精密吸取芦丁对照品溶液0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加甲醇6ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液1.0ml，摇匀放置6min，加4%NaOH溶液10ml，加蒸馏水至刻度，摇匀放置15min，即得。
用1cm石英比色皿在500nm波长处，以0号溶液作空白对照，分别测定吸光度，以总黄酮含量（C）为纵坐标，吸光度（A）为横坐标，进行回归，求得回归方程为：
A=0.0002C+0.006（r=0.9998），结果表明芦丁对照品溶液在1964～5892μg范围内与吸光度有良好的线性关系（见图3-1）。
图3-1
3.2.2.3供试品溶液的制备
精密吸取溶液10ml置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取稀释液5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇6ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液1.0ml，摇匀放置6min，加4%NaOH溶液10ml，加蒸馏水至刻度，摇匀放置15min，即得；另取“3.2.2.2”的0号溶液，作空白对照；分别在500nm波长处测定其吸光度。
3.2.3计算
X=C*F/1000（公式3-1）
式中：
X-样品中总黄酮的含量，mg；
C-标准曲线中计算出的总黄酮的量，g；
F-样品的稀释倍数，为25倍。
3.3总固体重量的测定
将4只同一型号蒸发皿恒重（取蒸发皿置于105℃的恒温箱中干燥3小时，然后在干燥器中冷却至室温，取出，置于电子天平中称重；再同法干燥3小时，同法冷却至室温，两次称重的差异在0.3mg以下）。
再分别精密量取各样品10ml置于各蒸发皿中，放在恒温水浴锅上蒸干，置105℃的恒温箱中干燥3小时，然后在干燥器中冷却至室温，取出，电子天平称重。
3.4正交试验数据分析
根据总黄酮含量及总固体重量的测定结果，分析优选筛选，见（表3-2）。
表3-2正交试验结果及分析表
试验号
A
B
C
H总黄酮重量
（mg.g-1）
G总固体重量
（g.g-1）
1
1
1
1
0.7513
1.4286
2
1
2
2
0.7938
1.8839
3
2
1
2
0.8838
1.4623
4
2
2
1
0.9288
1.6885
HK1
0.7725
0.8175
0.8400
HK2
0.9063
0.8613
0.8388
HR
0.1338
0.0438
0.0012
GK1
1.6563
1.4455
1.5586
GK2
1.5754
1.7862
1.6731
GR
0.0809
0.3407
0.1145
3.5实验结果
由（表3-2）可知，影响总黄酮含量的主次因素为A>B>C，即乙醇浓度>浓缩体积>静置时间；影响总固体重量的主次因素为B>C>A，即浓缩体积>静置时间>乙醇浓度；故确定最佳提取工艺：
A2B2C1，即：
水煎煮后的滤液减压浓缩至约80ml，放冷，加入适量乙醇搅匀使含醇量达65%，静置24h后回收乙醇。
3.6薄层色谱法[15.16]
3.6.1供试品溶液的制备
取黄芪扶正口服液30ml，加入中性氧化铝柱（100-120目，5g，内径10-15mm）上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇，提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。
3.6.2对照品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所），加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
3.6.3薄层色谱法
照薄层色谱法（附录VIB）试验：
吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：
甲醇：
水（13：
7：
2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
在对照品色谱相应的位置上，紫外灯（365nm）下检视，有相同的橙黄色荧光斑点（见图3-2）。
图3-2
3.7结论
总之，提取黄酮类化合物,水煎煮后的滤液减压浓缩至约80ml，放冷，加入适量乙醇搅匀使含醇量达65%，静置24h后回收乙醇的提取过程是最优化的提取条件。
用薄层色谱鉴别黄芪甲苷呈阳性。
黄芪扶正口服液的提取工艺方法简单、准确、重复性好，质量可控。
讨论
1.高效液相色谱法
与其他方法相比，高效液相色谱法对样品的分离不受挥发度、热稳定性及分子量的影响，分离效能高，分析速度快，方法较简单，数据的获得和解释较容易，在中成药分析中可同时分离和分析样品，已成为中药制剂质量控制的一种有力手段。
黄芪甲苷可以采用HPLC法测定，由于本院实验室无蒸发光散热检测器，又由于黄芪甲苷无特征的紫外吸收，只在约200nm波长处有微弱末端吸收，测定所需条件较严格，因而本实验采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷。
1.1供试品溶液的制备
精密吸取“2.2.1”10ml置蒸发皿中蒸干，待冷却，加甲醇溶解并将溶液倒入25ml容量瓶中，加甲醇定容，置冰浴中2小时，备用。
1.2空白溶液的制备
精密吸取“2.2.2”10ml置蒸发皿中蒸干，待冷却，加甲醇溶解并将溶液倒入25ml容量瓶中，加甲醇定容，置冰浴中2小时，备用。
1.3色谱条件
色谱柱:
XDB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：
乙腈:
水（26:
74）；流速：
1.0ml/min；检测波长：
270nm；柱温：
35℃；进样量：
10μl。
1.4实验结果
表1-1高效液相色谱法结果及分析表
实验号
A
B
C
Area（s）
1
1
1
1
3561.969
2
1
2
2
1380.818
3
2
1
2
1232.506
4
2
2
1
1025.138
AK1
2471.394
2397.238
2293.554
AK2
1128.822
1202.978
1306.662
AR
1342.572
1194.260
986.892
由（表1-1）可知，影响淫羊藿苷的主次因素顺序为A>B>C，即乙醇浓度>浓缩体积>静置时间。
确定最佳提取工艺：
A1B1C1，即：
水煎煮后的滤液减压浓缩至约60ml，放冷，加入适量乙醇搅匀使含醇量达60%，静置24h后回收乙醇。
此方法只从淫羊藿苷含量单方面进行了考察，没有正文中所述的方法更合理，故未能纳入正文。
2.正交试验设计
本实验采用正交试验设计，以多指标进行考察，根据综合评分值优选黄芪扶正口服液水提醇沉的工艺，重复验证实验表明优选出的工艺科学、经济，可用于指导制剂生产及临床应用。
正交试验设计（orthogonalexperimentaldesign）是研究多因素多水平的一种设计方法，它是用正交表来安排试验的，由于正交表的构造具有“均衡搭配”的特点，利用它能优选出代表性较强的少量试验，求得最优或较优的试验条件，从而达到试验目的。
在试验中，因素间总存在着或大或小的交互作用，但并非对所有的交互作用都要考察，要像确定试验因素那样，根据专业知识和经验认真分析，对那些影响甚微的交互作用，尽量略去，以便减少试验次数。
3.测定总黄酮的原理
黄酮类化合物包含许多种物质，其在紫外区间的吸光度并不一样，加入Al（NO3）3显色剂，在碱性条件下，利用其与黄酮形成红色螯合物，在500nm形成新的吸收峰，从而得到待测物质的黄酮含量。
参考文献
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致谢
经过四个月的艰苦努力研究，终于完成了本课题的研究和论文撰写工作。
在此过程中，本人收益匪浅。
系统的实验设计过程，具体的实验操作步骤，以及指导老师的理论知识传授和操作规范指导等，都给予我新的学习空间。
了解了科研的基本思路，巩固了药学的基础理论、专业知识和基本技术，掌握学术论文的写作过程和方法、步骤。
在一定程度上提高了分析问题和解决问题的能力。
作者能顺利完成本项实验研究及论文撰写工作，主要得益于丽水市人民医院药剂科各位老师的殷殷指导及其提供的实验研究环境。
首先要感谢的是导师刘丽仙老师的辛勤付出和殷殷指导。
本论文从选题到完成，每一步都倾注了她大量的心血。
当实验遇到难题时，她总是给予无私帮助，让我感受她诲人不倦的高尚师德。
导师扎实的药学知识，科学缜密的研究思维，精益求精的工作作风，严以律己、宽以待人的崇高风范，朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远;还要感谢临床药学室朱亚兰老师的技术支持，适时地答疑解惑，对实验给予极大的支持和帮助；更要感谢的是药剂科为本实验提供优良的实验环境和必需的实验条件，以及制剂室给予的良好的学术论文写作环境和宽裕的时间。
衷心感谢丽水市人民医院药剂科，感谢其提供这么好的科研环境和如此优秀的指导老师，正是他们的悉心指导，作者才能完成这项研究。
在此，谨向导师刘丽仙老师致以崇高的敬意和衷心的感谢，向所有为本课题提供帮助和支持的老师表示深深的谢意！
作者只是充当了一个总结者的角色，更多的功劳还是各位老师的！
本科毕业论文（设计）任务书
学院
专业
药学
姓名
学号
指导老师
职称
合作老师
职称
题目
黄芪扶正口服液提取工艺的优化
一、课题的内容和任务要求：
1、论文研究：
目的：
通过正交设计试验对影响因素（乙醇浓度、静置时间和浓缩体积）进行了研究，优选出黄芪扶正口服液的最佳提取工艺条件。
内容：
TLC-UV二法通过正交试验优选黄芪扶正口服液的最佳提取工艺。
结果：
应用所建立的方法学能快速，准确，灵敏地测定总黄酮含量和总固体重量。
2、要求：
（1）应收集的资料及主要参考文献：
10篇以上，英文至少1篇。
（2）开题报告：
包括课题来源及名称，研究的目的和意义，国内外研究现状和发展趋势，主要研究内容和要求达到的深度，研究工作的主要阶段、进度和完成时间，现有条件及必须采取的措施、协作单位及要解决的主要问题等。
（3）外文翻译：
文献内容要与自己所做论文有相关性，翻译要文题相对，2000字以上。
（4）文献综述：
2000-3000字，内容与自己所做论文要有相关性，要文题相对，包括题目，姓名，中、外文摘要及关键词，正文和参考文献等。
（5）毕业论文：
正文字数（含图、表）在50
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