高考生物 讲练测系列 专题15 基因工程 克隆技术教师.docx

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高考生物讲练测系列专题15基因工程克隆技术教师

【专项冲击波】2013高考生物讲练测系列专题15基因工程克隆技术（教师版）

考点突破

考点一基因工程

与基因工程有关的几种酶

名称

作用

参与生物过程

相同点

DNA连接酶

连接两个DNA片段

基因工程

化学本质均为蛋白质，合成场所均为核糖体

限制性核

酸内切酶

切割某种特定的脱氧核苷酸序列

DNA聚合酶

在脱氧核苷酸链上添

单个脱氧核苷酸　

DNA复制

RNA聚合酶

在核糖核苷酸链上添加单个核糖核苷酸　

转录

解旋酶

使碱基间氢键断裂，形成脱氧核苷酸单链

DNA复制及转录

逆转录酶

以RNA为模板合成DNA

逆转录、基因工程

例1、（2012上海56）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0．8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb。

若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。

考点二基因工程的基本操作程序

程序

说明

目的基因

的获取

①从自然界中已有的物种中分离出来；②用人工的方法合成；③从基因文库中获得；

④通过PCR技术获得

基因表达载

体的构建

要点:

同种限制酶切割目的基因与质粒；双酶切；运载体的要求；基因表达载体的组成

将目的基

因导入受

体细胞

①受体细胞种类：

大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞；②导入方法:

显微注射法、农杆菌转化法、Ca2+处理细胞使细胞壁的通透性增大等　

目的基因

的检测与

鉴定

检测对象：

①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因；②检测目的基因是否转录出了mRNA；③检测目的基因是否翻译成了蛋白质。

检测方法：

分子检测法——①和②都是核酸分子杂交技术，③是抗原—抗体杂交法；形态检测法——可根据目标性状的有无来判断目的基因是否表达

例2、（2012江苏32）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。

现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

请回答下列问题

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。

（2）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长度为。

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。

从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，产物中共有种不同长度的DNA片段。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是。

在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加的培养基进行培养。

经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是。

考点三细胞工程

1、植物组织培养、植物体细胞杂交、细胞核移植的比较：

植物组织培养

植物体细胞杂交

细胞核移植

原理

植物细胞的全能性

细胞膜的流动性、植物细胞的全能性

动物细胞核的全能性

方法

离体的植物器官、组织或细胞→　愈伤组织→根、芽→植物体

去掉细胞壁→诱导原生质体融合→组织培养

核移植→胚胎移植　

优点

快速繁殖、培育无病毒植株等

克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出作物新品种

繁殖优良品种，用于保存濒危物种，有选择地繁殖某性别的动物　

缺点

技术要求高、培养条件严格

技术复杂，难度大；需植物组织培养等技术支持

导致生物品系减少，个体生存能力下降

举例

试管苗的培育、培养转基因植物

培育“番茄—马铃薯”杂种植株

“多利”羊等克隆动物的培育

2、植物组织培养流程图

3、动物细胞培养流程图

例3、（2012·全国重点中学领航冲刺卷）如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示体外受精培育优质奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答下面的问题。

（1）在图1中注射到小鼠体内的物质是__________。

融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是__________。

该过程所用的生物技术有___________________________________________________________________

____________________________________________________________________。

（2）图2中参与体外受精的精子需要经过成熟和________的过程，才能使卵细胞受精。

若要获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的__________均等分割后进行胚胎移植。

以上技术是在__________（填“体内”或“体外”）完成的。

（3）图3中过程①是植物细胞形成__________的阶段，该阶段所用的酶是__________。

在形成再生植株的过程中与组织培养有相似之处的步骤是__________。

专项练习

1、（2011·浙江卷）将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。

下列叙述错误的是（　　）。

A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒

B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点

C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada

D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子

2、（2012·浙江六校联考）下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性核酸内切酶的酶切位点。

若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是（　　）

A．催化①过程的酶是RNA聚合酶

B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合

C．催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温

D．如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%

4、（2012广东6）科学家用人工合成的染色体片段，成功替代了酵母菌的第6号和第9号染色体的部分片段，得到的重组酵母菌能存活，未见明显异常，关于该重组酵母菌的叙述，错误的是

A．还可能发生变异B．表现型仍受环境的影响

C．增加了酵母菌的遗传多样性D．改变了酵母菌的进化方向“汉水丑生的生物同

5、（2012浙江6.）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。

现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是（）

A.提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B

B.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B

C.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞“汉水丑生的生物同行”超级群公

D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞

6、（2012上海55）如图18所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1（3.7kb，1kb=1000对碱基）上相应的E—F区域（0.2kb），那么所形成的重组质粒pZHZ2___________。

A．既能被E也能被F切开B．能被E但不能被F切开

C．既不能被E也不能被F切开D．能被F但不能被E切开

7、（2011·四川卷，5）北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。

下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（　　）

A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序

B．将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻

蛋白

C．过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选

D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达

8、.（2012·合肥模拟）下列有关基因工程的叙述，正确的是（）

A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来

B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变

C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大

D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等

9、（2011·江苏）下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（　　）。

A．愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞

B．二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株

C．用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子

D．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得

10、（2012江苏22）下列事实能体现细胞全能性的是（）“

A.棉花根尖细胞经诱导形成幼苗B.单细胞的DNA在体外大量扩增

C.动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体D.小鼠体细胞经诱导培育成小鼠

11、（2011·江苏卷，16）下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（　　）

A．愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞

B．二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株

C．用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子

D．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得

12、（2011·无锡质检）用a表示骨髓瘤细胞，b表示浆细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别为（　　）

A．a、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→ab培养

B．a、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→ab培养

C．a、aa、ab、bb、b→ab→产生特定抗体的ab培养

D．a、aa、ab、bb、b→aa→能无限增殖的aa培养

答案：

C　

解析：

第一次筛选是选出杂交瘤细胞即ab，第二次筛选是选出能产生特异性抗体的ab细胞。

13、（2012·中山模拟）对于下面制备单克隆抗体过程示意图，不正确的叙述是（双选）（　　）

A．①表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的

B．④中的筛选是通过抗原、抗体反应进行的

C．②促进细胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介导

D．⑤是可以无限增殖的杂交瘤细胞也是癌细胞

14、（2012上海13）以绵羊红细胞刺激小鼠脾脏B淋巴细胞，再将后者与小鼠骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞克隆群，由此筛选出的单克隆杂交瘤细胞所产生的抗体

A．能识别绵羊整个红细胞B．只识别绵羊红细胞表面的特定分子

C．能识别绵羊所有体细胞D．只识别绵羊所有体细胞表面的特定分子

15、（2011·安徽理综，31Ⅱ）家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。

将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。

（1）进行转基因操作前，需用________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。

（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的____________和__________之间。

（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。

该PCR反应体系的主要成分应包含：

扩增缓冲液（含Mg2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、_________________和____________________________。

（4）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。

通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放