缓冲液常用试剂培养基的配制方法.docx
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缓冲液常用试剂培养基的配制方法
实验常用试剂、缓冲液、培养基的配制方法
1、1MTris-HCl □组份浓度1MTris-HCl
（pH7.4，7.6，8.0） □配制量1L
□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTris-HCl □组份浓度1.5MTris-HCl
（pH8.8） □配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TEBuffer □组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA
（pH7.4，7.6，8.0） □配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL
500mMEDTA（pH8.0）20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠 □组份浓度3M醋酸钠
（pH5.2） □配制量100mL
□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBSBuffer □组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42g
KH2PO4 0.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：
上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸铵 □组份浓度10M醋酸铵
□配制量100mL
□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：
醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris-HCl平衡苯酚 □配置方法
1.使用原料：
大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意：
苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3.苯酚平衡：
因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
1.说明：
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：
24：
1）。
氯仿可使蛋白（25：
24：
1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配置方法：
将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：
1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS □组份浓度10％（W/V）SDS
□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3.将溶液定容至100mL后，室温保存。
10、2NNaOH □组份浓度2NNaOH
□配制量100mL
□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
11、2.5NHCl □组份浓度2.5NHCl
□配制量100mL
□配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
2.室温保存。
12、5MNaCl □组份浓度5MNaCl
□配制量1L
□配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3.高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度20％（W/V）Glucose
□配制量100mL
□配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.高温高压灭菌后，4℃保存。
14、SolutionI □组份浓度2
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