HLPC法测定不同感冒药中马来酸氯苯那敏含量.docx

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HLPC法测定不同感冒药中马来酸氯苯那敏含量

HLPC法测定不同感冒药中马来酸氯苯那敏含量

马来酸氯苯那敏为抗过敏类非处方药，其药理毒理作用：

作为组织胺H1受体拮抗剂，本品能对抗过敏反应（组胺）所致的毛细血管扩张，降低毛细血管的通透性，缓解支气管平滑肌收缩所致的喘息，本品抗组胺作用较持久，也具有明显的中枢抑制作用，能增加麻醉药、镇痛药、催眠药和局麻药的作用。

本品主要在肝脏代谢。

本品不仅可以作为抗过敏性药物，在各种感冒药中也均含有。

本文采用HLPC法来测定在不同感冒药中马来酸氯苯那敏的含量。

一：

1HLPC法测定复方感冒灵中马来酸氯苯那敏的含量

1.1仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪,四元泵（G1311A）,DAD检测器（G1315B）。

马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检定所提供,批号:

100047-200305）;复方感冒灵药品（本厂提供）。

乙腈为色谱纯,水为重蒸水。

2方法与结果

2.1色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:

乙腈-水（75∶25）;检测波长:

280nm;柱温:

30℃;流速:

1.0ml/min。

在此条件下马来酸氯苯那敏能有效分离。

2.2对照品溶液的制备

精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量,加流动相制成每1毫升含马来酸氯苯那敏50μg的溶液,即得。

2.3供试品溶液的制备

精密称取供试品,超声处理30min,取出放冷,再精密称定重量,加乙腈补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜过滤,即得。

2.4标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液0.2,0.3,0.4,0.5,1.0ml置10ml量瓶中,加乙腈定容,分别进样,测得峰面积积分值,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程Y=13901X-12.681（r=1.0000）,结果表明马来酸氯苯那敏在0.00808~0.40400mg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.5空白干扰试验

按处方比例及工艺制备缺马来酸氯苯那敏的阴性对照溶液,按上述条件和实验方法操作,结果在与对照品峰相应位置上无吸收峰。

说明该实验条件和方法对马来酸氯苯那敏的测定专属性强,处方中其他成分及辅料对测定结果无影响。

2.6精密度考察

精密吸取同一供试品溶液进样6次,测得平均峰面积为1256.8,RSD为1.93%。

2.7重复性试验

取同一批号的供试品,按供试品溶液制备方法处理,共6份,测得平均浓度为1.81mg/g,RSD为1.05%。

2.8稳定性考察

取同一供试品溶液,每隔2h进样1次,连续8h,结果峰面积平均值1072.1,RSD=1.82%,表明供试品溶液稳定性较好。

2.9加样回收试验

称取感冒灵细粉约0.5g,共6份,精密称定,精密加入0.101mg/ml的马来酸氯苯那敏对照品溶液10ml,再精密加入乙腈-水（75∶25）10ml,以样品测定法进行测定,平均回收率为96.86%,RSD=1.00%。

结果表明本测定方法准确度高,误差小。

2.10样品测定

将处理好的三批样品溶液按上述条件和方法测定。

二：

1.HPLC法测定速感宁胶囊中马来酸氯苯那敏的含量

1.1　仪器与试药

LC210AP型高效液相色谱仪（日本岛津公司）;SPD-10Avp紫外-可见检测器;LC210ATVP7725（i）型手动进样器;威玛龙色谱工作站。

甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯。

马来酸氯苯那敏对照品购自中国药品生物制品检定所（供含量测定用）;速感宁胶囊。

2　实验方法与结果

2．1　色谱条件　色谱柱:

AgilentEclipseXDB2C18（416250

mm,5μm）;流动相:

甲醇0125%磷酸溶液（25:

75）;流速:

1

ml/min;检测波长:

262nm;进样量:

10μl。

2.2对照品溶液的制备　精密称取马来酸氯苯那敏对照品

适量,加流动相稀释成每1ml含3215μg的溶液,作为对照

品溶液。

2.3　供试品溶液的制备　取本品内容物约015g（约相当于

马来酸氯苯那敏118mg）,精密称定,置具塞锥形瓶中,加流

动相50ml,称定重量,超声处理40min,放冷,补重,摇匀,滤

过,取续滤液,即得。

2.4　线性关系　分别精密吸取对照品溶液（32145μg/ml）

3,6,9,12,15μl,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量对峰

面积绘制标准曲线,得回归方程Y=1106105X+2901413,r

=019995,表明马来酸氯苯那敏在010974～014868μg范围

内呈现良好线性关系。

2.5　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液10μl,重复进

样6次,测定马来酸氯苯那敏,其RSD为0135%。

2.6　稳定性试验　精密吸取供试品溶液（批号:

20080407）

10μl,分别于0、4、8、12、24h进行测定,其峰面积RSD为

0145%,表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7　阴性对照试验　取除马来酸氯苯那敏阴性样品,按供

试品制备方法制成阴性供试品。

按上述色谱条件测定,结果

在马来酸氯苯那敏出峰位置无干扰峰。

2.8　重复性试验　取同一批样品6份,分别按样品溶液制备方法制备,按上述色谱条件测定,求得马来酸氯苯那敏平

均含量为标示量的95167%,RSD为1135%。

2.9　回收率试验　取已知含量的样品6份（批号:

20080407）,分别精密加入马来酸氯苯那敏对照品018113

mg,按供试品溶液制备方法处理。

并按上述色谱条件测定,

计算回收率分别为98106%、99188%、97165%、102116%、

99198%、96187%,平均回收率为99110%,RSD=1196%。

2.10　样品测定　取对照品溶液和供试品溶液,依法测定,

外标法计算马来酸氯苯那敏含量分别为95114%

（20080117）、95103%（20080407）、96183%（20080823）。

3　讨论

3．1　波长的选择　文献[2]采用262nm作为检测波长;对马

来酸氯苯那敏对照品溶液进行紫外吸收光谱测定,其吸收峰

为226nm和262nm,262nm处的峰面积较大,故选择262

nm作为本品的检验波长。

3．2　流动相的选择　文献[3]采用甲醇2庚烷磺酸钠醋酸混

合溶液（60∶40）为流动相;本试验分别考察了流动相:

①甲

醇:

水:

乙酸（30:

70:

1）;②甲醇:

水:

磷酸（43:

57:

012）;③甲

醇0125%磷酸溶液（25:

75）;结果表明在③条件下,马来酸

氯苯那敏的峰型和分离度较好,阴性对照无干扰。

参考文献

[1]　朱张庆,李园园.高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒马

来酸氯苯那敏含量与均匀度.医药导报,2008,27（11）:

139121392.

[2]　罗远秀.HPLC法测定维C银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含

量.广西中医学院学报,2009,12

（2）:

60262.

[3]　刘晓琳.HPLC法测定感宁胶囊中马来酸氯苯那敏的含量及含

量均匀度.安徽医药,2003,7

（2）:

1332134.

三HPLC法测定维C银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量

　维C银翘胶囊是根据维C银翘片改变剂型的中西药复方制剂,为8类新药。

处方中的中药由连翘、荆芥、金银花等组成,西药为对乙酰氨基酚、维生素C、马来酸氯苯那敏,具有辛凉解表,清热解毒之功效,常用于流行性感冒引起的发热头痛,咳嗽,口干,咽喉疼痛。

维C银翘片现行质量标准[1-2]中无马来酸氯苯那敏含量测定项,维C银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定方法也未见有文献报道。

为进一步更好地控制该制剂的质量,笔者对维C银翘胶囊的质量标准进行研究,建立了维C银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定方法,方法操作简单,专属性强,可作为维C银翘胶囊的质量控制方法。

1　仪器与试药

　　Waters515泵、996二极管阵列检测器、M32色谱工作站、

717自动进样系统。

乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

马来酸氯苯那敏对照品购于中国药品生物制品检定所（供含

量测定用）,维C银翘胶囊样品（批号为050801、050802、

050803）由广西维威药业有限公司提供。

2　方法与结果

211　色谱条件　色谱柱:

shim2packCLC2ODS色谱柱（250

mm×610mm,5μm,日本岛津公司）;流动相:

乙腈-013%

十二烷基硫酸钠-磷酸（60∶40∶0102）（用三乙胺调节pH值至313±011）;检测波长:

262nm;流速:

110ml/min;柱温:

室

温;进样量:

20μl,理论板数按氯苯那敏峰计不低于10000。

212　对照品溶液的制备　取马来酸氯苯那敏对照品约

10mg,精密称定为10132mg,置50ml量瓶中,加乙醇使溶

解并稀释至刻度,精密量取5ml,置50ml量瓶中,加乙醇至

刻度,摇匀,即得浓度为012064mg/ml的对照品溶液。

213　供试品溶液的制备　取样品20粒的内容物,混匀,精

密称取相当于一粒量的内容物,置50ml的容量瓶中,加乙醇

约35ml,超声处理30min,放冷,加乙醇稀释至刻度,摇匀,

滤过,取续滤液作为供试品溶液。

214　阴性样品溶液的制备　按处方和工艺制备不含马来酸

氯苯那敏的阴性样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性样

品溶液。

215　检测波长的选择　取对照品溶液20μl,注入液相色谱

仪,记录色谱图（见图1）。

在上述色谱条件下,马来酸氯苯那

敏出现马来酸峰和氯苯那敏峰,马来酸出峰在前,保留时间

短,阴性有干扰,不宜采用;氯苯那敏出峰在后,峰形好,无干

扰,因此本文以氯苯那敏峰计算马来酸氯苯那敏的含量。

经

采用液相色谱仪二极管阵列检测器检测氯苯那敏峰,结果在

225nm和262nm处有吸收峰,225nm为紫外末端吸收,不

宜采用,因此选择以262nm为检测波长。

216　干扰试验　按上述色谱条件,分别取对照品溶液、供试

品溶液和阴性样品溶液各20μl,进样测定,结果阴性样品溶

液在氯苯那敏峰相应的保留时间处无色谱峰,表明处方中其

他组分对氯苯那敏的测定没有干扰。

各色谱峰见图1～3。

217　线性关系的考察　精密量取对照品溶液（浓度为

012064mg/ml）1,3,5,7,9ml,分别置50ml量瓶中,加乙醇

至刻度,摇匀。

精密吸取上述溶液各20μl,分别进样,测定。

以氯苯那敏峰面积A对马来酸氯苯那敏浓度C回归,得回

归方程为:

A=141064C-541109（r=110000）。

表明马来

酸氯苯那敏进样量在010826～017430μg范围内,其峰面积

与浓度之间线性关系良好。

218　精密度试验　精密吸取对照品溶液20μl,按上述色谱

条件,分别连续进样6次,记录氯苯那敏峰面积,结果平均峰

面积为294544,RSD=0117%（n=6）,表明精密度良好。

219　重复性试验　取同一批样品（批号为050801）6份,分

别按213项下制备供试品溶液,取供试品溶液20μl,进样测

定,计算含量。

结果马来酸氯苯那敏平均含量为标示量的

96173%,RSD=2106%（n=6）,表明重复性良好。

2110　稳定性试验　取样品（批号050801）的供试品溶液,分

别在制备后0,2,6,12,24,48h进样,记录氯苯那敏峰峰面

积,结果RSD=0124%（n=6）,表明供试品溶液在48h内稳

定性良好。

2111　加样回收率试验　精密称取已测定含量的样品（批号

050801,马来酸氯苯那敏含量11022mg/粒）6份,每份相当

于半粒量,置50ml量瓶中,分别精密加入马来酸氯苯那敏对

照品溶液（浓度012064mg/ml）215ml,按213项方法制备供

试品溶液,在上述色谱条件下测定,计算回收率。

3　讨　论

311　本方成份较复杂,马来酸氯苯那敏在处方中量少（每粒

含1105mg）,不易混匀,影响药效和质量,在其质量标准中增

加马来酸氯苯那敏的含量测定,对保证药品的质量至关重

要。

312　根据马来酸氯苯那敏的溶解性质,曾试用过水、70%乙

醇和流动相溶解样品,但溶解效果不好,过滤困难,测得的含

量偏低,选用乙醇作溶剂,溶解和过滤效果均得到改善,测得

的含量与投料量相符。

313　使用了不同的色谱柱试验,如Extend2C18柱（250mm×

416mm,5μm,）、lunaC18

（2）柱（250mm×416mm,5μm）、

NucleodurC18Gravity柱（250mm×416mm,5μm）、shim2pack

CLC2ODS柱（250mm×610mm,5μm）等,结果以shim2pack

CLC2ODS柱（250mm×610mm,5μm）柱效、分离效果和峰

形最好。

314　参照文献报道[325],曾考察了甲醇-0105mol/L磷酸二

氢钾-三乙胺（15∶85∶0102）,用磷酸调pH至314;乙腈-

015%十二烷基硫酸钠-磷酸（60∶40∶011）及乙腈-013%十

二烷基硫酸钠-磷酸（60∶40∶0102）（用三乙胺调节pH值至

313±011）等流动相;结果表明以乙腈-013%十二烷基硫酸

钠-磷酸（60∶40∶0102）（用三乙胺调节pH值至313±011）

为流动相最理想。

315　取050801批的样品5份,超声时间分别为10min,20

min,30min,40min,60min,其它操作按213项方法制备供

试品溶液,进样,测定,结果超声30min及超声40min、超声

60min的含量基本不变,故超声时间定为30min。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会1中华人民共和国卫

生部药品标准[S].中药成方制剂第二十册.1998:

324-

325.

[2]国家药典委员会审定,国家药品监督管理局发布.国家

药品监督管理局国家药品标准[S].WS3

2B240002982

2003.

[3]田秀英,王宝娟,曲素欣.用HPLC法测定复方对乙酰氨

基酚胶囊4组分的含量[J].中国药师,2003,6（12）:

793.

[4]陈赞民1高效液相色谱法测定伤风感冒液中盐酸甲基

麻黄碱及马来酸氯苯那敏的含量[J].药物分析杂志,

2000,20（5）:

349.

[5]国家药典委员会1化学药品地方标准上升国家标准[S].

第十三册.2002:

128-129.

（编辑　陈明伟）

收稿日期:

2008-11-15

基金项目:

广东省经贸委/财政厅科技创新重大课题（20060205-1）

作者简介:

贝伟剑（1963-）,副研究员,博士,研究方向为中药现代化及中成药二次研发

HPLC