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设计实验
设计实验指导
实验须知
天然产物分离与纯化实验教学是天然产物分离与纯化技术课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然产物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验须知：
1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。
实验过程应养成及时记录的习惯。
凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。
节约用水、用电、药用试剂。
严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
前言
天然产物分离与纯化是运用现代科学理论与方法研究天然产物中生物活性成分的一门学科。
其主要内容是研究各类天然有机化合物（主要是植物）的化学成分（主要是生物活性成分或药效成分）的结构特征、理化性质、提取、分离、检识以及主要类型化学成分的结构鉴定知识等。
此外，还将涉及中草药制剂的成分分析等内容。
本课程设置了提取分离、鉴定技术的大量实验操作内容，以期通过对知识的学习与操作练习，使同学们充分了解技术原理并熟练掌握天然产物中有效成分的提取、分离与鉴定的常用方法。
设置的相应方法有：
溶剂提取法（对比了浸渍法、回流提取和连续回流提取法）；层析法（设置了薄层层析、柱层析、HPLC法的组合对比实验）；物质鉴定方法（对比了化学法、色谱法和光谱法）；含量测定（设置了分光光度法与HPLC法）。
同时，针对高年级同学已系统学习过有机化学、分析化学、物理化学和生物化学等课程，
为进一步培养和锻炼同学们运用理论知识、独立操作、分析思考和解决问题的能力，本课程
将实验内容中提取、纯化部分设置为需自行摸索最适条件的探讨型试验，这是和以往实验教
材最大的不同之处，目的是使同学们在开放的实验环境下，充分发挥主观能动性，摸索试验
条件，解决具体问题，培养应用基本理论去分析和解决实际问题的能力。
我们希望通过这些实验和探索，让同学们获得天然产物分离与纯化最基本的实验技术训练，为今后独立科研和工作打下扎实的基础。
1.相关基础知识
1.1有效成分提取常见方法
有效成分提取常见方法：
溶剂法，水蒸气蒸馏法
1.1.1溶剂提取法
（1）浸渍法：
将处理过的药材，用适当的溶剂在常温或温热（60～80℃）的情况下浸渍以溶出其中成分。
本法适用于有效成分遇热易破坏以及含多量淀粉、树胶、果胶、粘液质的药的提取。
但浸出效率差。
（2）渗漉法：
向粗药粉中，不断添加浸出溶剂使其渗过药粉，从渗漉筒下端出口流出浸出
液的方法。
溶剂消耗量大、费时长。
（3）煎煮法：
加水加热煮沸。
但含挥发性成分、有效成分遇热易破坏的药材不易用此法。
（4）回流提取法：
如用易挥发的有机溶剂加热提取植物材料时，需采用此法。
遇热易破坏
的成分不易用此法，且溶剂消耗大、操作较烦。
（5）连续提取法：
为弥补回流提取法中需要溶剂量大，操作较烦的不足，可采用连续提取法，采用索氏抽提器，遇热易破坏的成分不易用此法。
1.1.2水蒸气蒸馏法
适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，与水不发生反应，且难溶或不溶于水的成分的提取。
此类成分的沸点多在100度以上，并在100度左右有一定的蒸气压。
挥发油、某些小分子生物碱如麻黄碱、烟碱、槟榔碱、某些小分子酚性物质如牡丹酚等的提取可采用水蒸气蒸馏。
水蒸气蒸馏装置
1.1.3其它提取方法
除以上方法外，提取的方法还有升华法、超临界流体萃取法、超声波法和微波萃取法等。
升华法：
某些固体物质如水杨酸、苯甲酸、樟脑等受热在低于其熔点的温度下，不经过熔化就可直接转化为蒸气，蒸气遇冷后又凝结为固体。
但药材中的物质可升华的很少。
超临界流体萃取法：
当一种物质处于其临界温度与临界压力以上的状态下，形成既非液体又非气体的单一相态，称为超临界流体（supercricticalfluid）。
密度近似液体，粘度有气体数倍，扩散力比液体大增，介电常数也随压力的增大而增加，其浸透性优于液体，有更佳的溶解性，有利于溶质的萃取。
利用一种物质在超临界区域形成的流体进行提取的方法，称为“超临界流体萃取法”。
常用超临界流体有二氧化碳、氧化亚氮、乙烷、乙烯等，最常用二氧化碳。
超声波提取技术是利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了提出率，缩短了提取时间，并且免去了高温对提取成分的影响。
微波法：
微波是一种波长在l～0.001m、频率在300MHz～300GHz的电磁波。
由于其具有独特的性质—似光特性、穿透特性、热特性、生物效应，因而已被广泛应用于医药领域。
在中草药有效成分的提取中亦有尝试和应用，但尚未在规模生产中应用。
微波提取技术主要是基于微波的热特性，其加热原理是利用微波场中介质的偶极子转向极化与界面极化的时间与微波频率吻合的特点，促使介质转动能级跃迁，加剧热运动，将电能转化为热能。
微波辐射导致细胞内的极性物质尤其是水分子吸收微波能量而产生大量的热量，使胞内温度迅速上升，液态水汽化产生的压力将细胞壁和细胞膜冲破，形成微小的孔洞。
进一步加热，细胞内部和细胞壁水分减少，细胞收缩，表面出现裂隙。
因此使胞外溶剂容易进入胞内，溶解并释放出有效成分。
1.2有效成分的分离与精制
植物材料经上述方法（溶剂法等）提取后，提取液是混合物，需进一步分离纯化，可根据混合物中各物质溶解度差别、在两相溶剂中的分配比不同、各物质的吸附性差别、分子的大小差别和物质解离程度不同进行分离。
1.2.1根据物质溶解度差别进行分离
（1）利用温度不同引起溶解度的改变以分离物质，如常见的结晶及重结晶等操作。
（2）在溶液中加入另一种溶剂以改变混合溶剂的极性，使一部分物质沉淀析出，从而实现分离。
（3）对酸性、碱性或两性有机化合物来说，常可通过加入酸、碱以调节溶液的pH值，改变分子的存在状态（游离型或解离型），从而改变溶解度而实现分离。
如：
一些生物碱类在用酸性水从药材中提取出后，加碱调至碱性即可从水中沉淀析出、调节pH至等电点使蛋白质沉淀的方法。
（4）酸性或碱性化合物还可通过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶性的盐类等沉淀析出。
如酸性化合物可做成钙盐、钡盐、铅盐等；碱性化合物如生物碱等，则可做成苦味酸盐、苦酮酸盐等。
1.2.2根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离
（1）液-液萃取法：
利用两种物质在不相混溶的两相间分配系数不同
（2）逆流分溶法（countercurrentdistributionCCD）：
是一种多次、连续的液-液萃取分离过程。
（3）液-液分配柱色谱法：
将两相溶剂中的一相涂覆在载体上，作为固定相，填充在层析管中，然后加入与固定相不相混溶的另一相溶剂（流动相）冲洗层析柱，这样，物质在两相溶剂相对作逆流移动过程中不断进行动态分配而得以分离。
分配柱色谱用的载体主要有硅胶、硅藻土及纤维素粉。
1.2.3根据物质的吸附性差别进行分离
该方法利用吸附剂（固定相）对混合物中各成分吸附能力的差别而达到分离目的的。
一般有薄层色谱与柱色谱两种方式，常用吸附柱色谱进行分离。
常见吸附剂可分为：
极性吸附剂：
硅胶、氧化铝（用极性溶剂解吸附）
非极性吸附剂：
活性炭（用非极性溶剂解吸附）
氢键吸附剂：
聚酰胺
大孔吸附树脂：
一种常用的吸附剂。
它是一种不含离子交换基团，具有大孔网状结构的
高分子材料。
利用本身的吸附性和筛选性使各成分获得分离。
吸附性是由于范德华力和氢键
的结果，筛选性是由于其本身多孔性结构决定的。
常见溶剂极性（依次递减）：
水>甲醇>乙醇>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>苯>乙烷>石油醚
1.2.4根据分子的大小差别进行分离
植物成分分子大小各异，分子量从几十到几百万，故也可据此进行分离。
常有透析法、
凝胶过滤法、超滤法，超速离心法等。
常用凝胶柱层析法将大小不同的混合物分离，常见的
凝胶有：
葡聚糖凝胶（Sephadex）、羟丙基葡聚糖凝胶（SephadexLH-20，可采用有机溶剂洗
脱）、丙烯酰胺凝胶（Bio-GelA）和琼脂糖凝胶（Sephadex）。
1.2.5根据物质解离程度不同进行分离
植物成分中，具有酸性、碱性及两性基团的分子，在水中多呈解离状态，据此可用离子
交换法或电泳技术进行分离。
1.3影响有效成分提取的因素
天然产物提取的效果除主要取决于选择合适的溶剂和提取方法外，原料的基原、采集季节、地域差别、质量优劣、提取部位、提取温度、提取时间、溶剂对原料的溶胀等因素也不同程度影响提取效果。
1.3.1原料的采集及粉碎度
（一）原料基原及采集
1．原料基原的影响
原料品种的真伪、正确与否，关系到提取物有效成分的含量和制成成品的质量。
中药商品中同名异物、同物异名现象比较突出。
2．产地的影响
植物产地对提取物的质量和使用效果有着直接关系。
产地不同，同一种动、植物所含的有效成分不完全相同，从而使制剂质量不稳定。
3．原材料采收季节的影响
现代药学科学研究表明，药材在生长发育的各个时期，所含的有效成分均存在较大的差别。
【避免】“夏药春收，秋药夏采”的不良现象。
4．原材料的贮藏
（二）原料的粉碎粒度
原理：
天然产物的有效成分通常存在于动、植物细胞内，而细胞膜产生的扩散阻力使得其浸提速率比较小。
为了提高提取效率，需要对细胞进行预处理如干燥、粉碎等，这样有助于细胞膜的破裂。
溶剂也容易进入细胞内部直接溶解有效成分，而不同的预处理方式会影响提取物的得率和含量。
1.3.2提取温度的影响
在选定适宜溶剂后，提高温度是增大目标成分的溶解度、加快溶出速率的有效途径。
【注意】温度过高可能会导致活性成分的湿热降解或异构化，使提取物有效成分含量降低或降解成分的活性作用，改变临床疗效或出现毒副作用等。
因此，无论是原材料还是提取液在提取和浓缩干燥过程中应尽量避免高温处理。
提取液的浓缩对有效成分也有影响。
浓缩时间越长、温度越高，有效成分的损失越大。
有效成分损失从少到多为：
反渗透浓缩（35℃）<减压浓缩（60℃）<常压浓缩（100℃）。
1.3.3提取时间的影响
在提取过程中，正确掌握提取时间对有效成分的提取效果有很重要的影响。
一般来说，视被提取活性成分存在原料的部位和溶胀难易。
1.3.4溶剂用量和浓度差
（1）溶剂用量
需根据被提取原材料的干燥程度、质地、成分在动、植物存在形式及体积而定，一般用量为原料的6-10倍。
（2）浓度差
概念：
是原料组织内的浓度与外周溶液的浓度差异。
浓度差越大，扩散推动力越大，越有利于提高提取效率。
【措施】：
①在提取过程中不断搅拌；②更换新溶剂；③采取流动溶剂。
④对于一些质地坚实、致密性强的原料，需施加一定的压力。
增大压力虽对扩散速度没有影响，但在压力作用下可使某些原料组织内细胞壁破坏，有利于有效成分的溶出。
1.3.5提取方法及工艺条件的影响
依据：
按其性质设计合理的提取工艺。
1.3.6其他因素的影响
（一）提取过程中各成分间的相互影响
在动、植物原料的提取过程中，要注意化学成分间的相互反应和配伍机理。
（二）提取容器的影响
1.4甘草简介
甘草是蝶形花科（Fabaceae）、甘草属（Glycyrrhiza）植物，我国药典记载药用甘草有乌拉尔甘草、胀果甘草、光果甘草。
甘草地下部分是名贵中药材，地上部分是多年生牧草。
甘草具有抗寒、耐热、耐旱、抗盐碱等优良特性，适生性和抗逆性强，生命力旺盛，为干旱、半干旱地区重要的植物资源之一。
早在2000多年前，《神农本草经》就将其列为药之上乘，医药家陶弘景将甘草尊为“国老”。
甘草味甘、性平，有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒的功能，用于脾胃虚弱、中气不足、咳嗽气喘、解毒等病症。
现代研究表明，甘草还有肾上腺皮质激素样的作用，可治慢性肾上腺皮质机能低下症和胃、十二指肠溃疡，以甘草配伍的古方有“四君子汤”、“甘草甘姜汤”、“凉隔丸”、“复脉丸”、“甘草大枣汤”等，近年来又发现甘草可抗癌和防治艾滋病，又是预防和治疗SARS的复方组份之一。
1.4.1甘草的主要有效成分
甘草的主要有效成分为甘草酸（glycyrrhizicacid）及甘草次酸（glycyrrhetinicacid）等三萜类化合物、甘草黄酮类化合物以及甘草多糖等。
药理研究表明，甘草酸及甘草次酸具有解毒、消炎、镇痛、抗肿瘤的作用。
近年来，还用于防治病毒性肝炎、癌症以及艾滋病等。
甘草酸约占甘草根茎的3-14%，分子式为C42H62O16，分子量822.92，熔点212ºC-217ºC，其结构式为五环三萜皂甙，结构图如图1-1所示：
图1-1甘草酸结构分子式
纯品甘草酸为白色针状晶体，不溶于冷水，可溶于热水，故溶于热水后，经冷却则呈胶体状沉淀析出。
加热、加压及在稀酸作用下可水解为一分子甘草次酸和两分子葡萄糖醛酸。
甘草次酸与单葡萄糖醛酸结合成甘草酸苷元单葡糖苷酸（MGGR）。
甘草酸分为α、β型两种异构体，分子中有三个羧基，可呈单盐、二盐、三盐三种形式。
1.4.2甘草酸的提取方法
1.4.2.1水提法
水提法是最为古老、也是最为常用的一种提取方法。
其操作简单，溶剂成本低廉，但得率较低，按1990年版中国药典中含量测定方法测得甘草酸得率仅约3.0%。
据推测可能是因为水提法提取出的杂质较多，在去除杂质的过程中夹带了甘草酸，损失较大。
工艺流程如1-2所示：
图1-2水提法提取甘草酸的工艺流程
1.4.2.2稀氨水提取法
甘草酸成铵盐后水溶性增加可增加提取率。
稀氨水提取法常采取冷渗的方法。
工艺流程如图：
图1-3稀氨水提法工艺流程
1.4.2.3氨性醇提取法
在对甘草提取工艺的研究中，发现用含氨0.8%的65%乙醇回流提取乌拉尔甘草的效果优于含氨0.6%的65%乙醇和0.6%的氨水，甘草酸的得率达21%，比水提法提高了两倍以上，节省了资源，降低了成本，也避免了糖类、淀粉等大量水溶性杂质的混入，便于精制。
如果能够解决加热回流过程中氨气逸出造成的污染问题，氨性醇提取法将成为一种较为理想的方法。
工艺流程如图1-4所示。
图1-4氨醇溶液提取甘草酸的工艺流程
1.4.2.4超声波提取法
谢果[21]等研究了超声条件下不同因素对甘草酸得率的影响，通过选择，可以得到最佳提取工艺：
溶剂为70%乙醇溶液、超声频率为18kHz、浸泡时间为90min、粒度为18~20目，在此工艺进行提取，甘草酸的提取率可以达到87.4%。
1.4.2.5双水相体系萃取
林强[22]等对6种不同水溶性溶剂/盐的双水相体系（异丙醇/硫酸铵、异丙醇/磷酸氢二钾、乙醇/硫酸铵、乙醇/磷酸氢二钾、丙酮/硫酸铵、丙酮/磷酸氢二钾）进行了研究，确定最佳的双水相体系为乙醇/磷酸氢二钾。
实验结果为：
双水相总量为10mL，乙醇的体积6mL，水体积4mL，磷酸氢二钾的量为1.5g，甘草精品为0.200g，分配系数K=12.8最大，收率Y=89.3%。
1.4.2.6其他方法
罗晨曲等在实验室条件下，用乙醇、丙酮、汽油3种不同溶剂对单钾盐收率的影响进行了比较，结果发现用95%乙醇/汽油（10:
4）作为萃取剂提取甘草甜素效果最好，生产的甘草酸单钾盐含量为（98.71±1.69）%，收率为32.4%。
1.4.3甘草酸的分离与纯化
1.4.3.1超滤法
将甘草提取液酸析后所得的粗品用氨水溶解，然后在一定的压力下进行超滤，滤液浓缩干燥得甘草酸铵。
1.4.3.2结晶法
结晶法是利用甘草酸转化为铵盐后在某些特定溶剂中溶解度下降而结晶出来，达到纯化的目的。
较为常用的有晶种法[13]和反复结晶法。
晶种法是先将甘草提取液进行酸析，再用适量甲醇回流提取沉淀物，提取液氨化后减压蒸干得糖浆状物，趁热加入适量冰醋酸使溶解、静置，投入甘草酸单铵盐晶种，隔日吸滤，冰醋酸洗涤，减压蒸干即得甘草酸单铵盐。
反复结晶法是先将甘草提取液进行酸析，再经乙醇或丙酮溶解提取，氨化成盐析出，再经活性炭脱色，反复重结晶得纯品。
1.4.3.3树脂法
树脂法包括离子交换树脂法和大孔吸附树脂法，两种方法均是利用甘草酸与杂质理化性质的不同，通过吸附和解吸附的过程，达到纯化的目的。
离子交换树脂法：
因为甘草酸中含有3个羧基，可与阴离子交换树脂上的阳离子结合而吸附在树脂上，其他一些非酸性的杂质不被吸附，从而得以与这些杂质分离。
日本专利中以弱碱性树脂DuoliteA374吸附甘草酸水提液，再用2.0%氨水洗脱即得铵盐产品。
原苏联专利是先用阴离子交换树脂AB-6G富集甘草酸，再用弱酸性阳离子交换树脂除去铵离子，从而得到高纯度的产品。
大孔吸附树脂法：
大孔吸附树脂法是一种较为经济实用的方法。
通常选用的树脂有AmbliteXAD4,XAD8,XAD9,XAD11,DA201以及AB-8等。
姚德佳等用以苯乙烯和二乙烯苯为骨架，由丙烯腈组成的主链上带有CN基的DA-201型大孔树脂柱吸附，以水或稀的低级醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂后得到的甘草酸纯度可90.0%以上。
1.4.3.4聚酰胺吸附法
潘福生等把甘草提取所得甘草酸粗品制成的单铵盐吸附在粉状聚酰胺上，先洗脱甘草酸单铵盐以外的杂质，再用极性溶剂洗脱甘草酸单铵盐，浓缩，再通过强酸型阳离子交换树脂脱铵，从而制得甘草酸（纯度可达99.5%－100.0%）。
2.实验目的和要求
（1）通过提取分离、鉴定技术原理学习与操作练习，充分了解技术原理并熟练掌握相关技术方法。
（2）本课程设置了同一内容的组合及对比实验，以及最佳提取纯化条件的探讨试验，注重独立操作、分析思考和解决问题能力的培养。
（3）实验设计中要求包含提取和纯化最佳条件的摸索过程。
（4）按自行设计的方案进行实验，要求有完整的提取分离、鉴定的过程，并获得提取物。
（5）实验中应如实记录原始数据和实验现象，并严格遵守实验规则。
（6）实验完成后，按标准论文格式写出完整规范的报告，实验报告格式：
包括标题、
实验目的、实验原理、材料、方法、结果、讨论和参考文献。
实验一、甘草酸的提取、测定
中药甘草，属豆科植物，生长于草原向阳干燥钙质土地以及河岸沙质地土壤中，富含甘草皂苷，又称甘草酸，特点是高甜度、低热能、安全无毒，起泡性和溶血作用很低。
具有增溶、增加药物稳定性、提高生物利用度及降低毒副作用的功效。
甘草酸的许多金属盐，人体可适当吸收，不易造成元素的积蓄中毒。
因此常被用来配制成健脾开胃、止咳化痰、顺气止喘、治疗慢性肝炎、降低血脂的良药。
同时还具有抗癌防癌、干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂等功能。
一、实验目的
1.掌握甘草酸的提取原理和方法。
2.熟悉皂甙的性质和测定方法。
二、实验原理
甘草酸在原料中以钾盐或钙盐形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂提取，提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离甘草酸。
三、实验材料和试剂
甘草，极性溶剂，硫酸，苯酚
四、实验步骤
1.查阅相关资料，以小组为单位确定具体实验方案，上报老师确定可行性。
2.市售甘草干燥，用粉碎机将其粉碎成粉末。
3.称取一定量的甘草粉末，加入一定剂量的溶剂，控制温度、固液比、提取时间、提取次数。
4.收集每次提取液混合，并记录滤液体积。
5.提取液中甘草酸的测定：
提取液摇匀，准确移取一定量的提取液转移到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容，静置20min后，于254nm处测定吸光度。
据标准曲线计算提取液中甘草酸的浓度，再计算甘草酸提取率。
公式如下：
A=13.17C—0.017（参考）
式中：
A-吸光度；
C-浓度，mg/ml
甘草酸提取率=nCV/m×100%
其中：
n-提取液稀释倍数
C-提取液中甘草酸的浓度mg/ml
V-提取液体积，ml
m-甘草的质量，mg
五、思考题
查阅资料，还有什么辅助方法可加速甘草酸的提取效果？
并解释原因。
实验二、甘草酸的纯化
提取的甘草酸溶液中，还含有大量的蛋白质、果胶、鞣质等物质，在提取过程中，这些杂质也转移到了提取液中。
由于这些物质的大量存在，使得产物的含量降低，试验误差加大，同时甘草酸作为药物和保健品等使用时，杂质还会引起一些副作用，因此必须将这些杂质除去，对甘草酸进行纯化。
一、实验目的
掌握甘草酸的分离纯化方法。
二、实验原理
提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离甘草酸。
三、实验材料和试剂
甘草酸浓缩液，硫酸，苯酚
四、实验步骤
1.查阅相关资料，以小组为单位确定具体实验方案，上报老师确定可行性。
2.甘草酸滤液预处理：
甘草酸溶液减压浓缩，滴加3.5mol/l的硫酸至pH2～3，静置使之完全沉淀，离心，沉淀用去离子水洗2～3次，放入真空干燥箱中干燥，得甘草酸粗品。
3.甘草酸粗品进一步纯化：
可采用溶剂萃取分离法、重结晶法、大孔吸附树脂柱层析法对甘草酸分离。
4.提取液中甘草酸的测定：
提取液摇匀，准确移取一定量的提取液转移到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容，静置20min后，于254nm处测定吸光度。
据标准曲线计算提取液中甘草酸的浓度，再计算甘草酸提取率。
公式如下：
A=13.17C—0.017（参考）
式中：
A-吸光度；
C-浓度，mg/ml
甘草酸提取率=nCV/m×100%
其中：
n-提取液稀释倍数
C-提取液中甘草酸的浓度mg/ml
V-提取液体积，ml
m-甘草的质量，mg
五、思考题
查阅资料，还有什么方法可使得甘草酸的纯度更高？
实验三、残渣中甘草多糖的提取分离
甘草在中医处方中占有举足轻重的地位，被医药界誉为“众药之王”。
甘草的主要有效成分是甘草酸、黄酮和多糖类化合物，但目前多糖还没有被有效利用。
甘草多糖具有抗肿瘤、免疫调节作用、抗辐射、抗病毒、抗溃疡、降血糖、抗衰老和免疫调节等作用，因此对多糖的研究越来越受到人们的重视。
本实验以提取甘草酸后的甘草渣为原料提取多糖，这对甘草资源的综合利用和多糖的开发均具有特别重要的意义。
一、实验目的
掌握多糖类物质的提取方法。
二、实验原理
甘草多糖为易溶于水的白色粉末，熔点很高，不溶于酒精等有机溶剂，故可用水提醇沉法得到甘草多糖。
三、实验材料和试剂
提取甘草酸后的废渣，硫酸，苯酚，95%乙醇，葡萄糖标准品
四、实验步骤
1.查阅相关资料，以小组为单位确定具体实验方案，上报老师确定可行性。
2.取一定量的甘草药渣，选取提取方法、提取条件（如提取溶剂、提取温度、提取固液比、提取次数）。
3.将每次提取的滤液过滤并合并，量取体积，并测定吸光度，初步计算甘草多糖得率。
4.提取液减压浓缩，浓缩液加95%乙醇使最后醇浓度到一定浓度，静置过夜。
5.沉淀干燥，得粗黄芪多糖。
6.鉴定：
苯酚-硫酸法
五、思考题
查阅资料，还有什么方法可使得甘草多糖的纯度更高？
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